新精神活性物质5F-AMB和策划药Diclazepam的GC-MS检验方法研究
赵彦彪，郑晓雨，郑 珲，钱振华，高利生
（公安部物证鉴定中心，北京 100038）
摘 要： 目的 5F-AMB属于合成大麻素类新型精神活性物质，Diclazepam是一种苯二氮䓬类新型策划药，本文首次报道了中国大陆出现的5F-AMB电子烟油和Diclazepam片剂，建立了气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析方法，并阐述其在EI离子源轰击下的分子裂解机理。方法 未知样品混合均匀后用甲醇提取，吸取上清液采用气相色谱-质谱检测。结果 通过GC-MS分析分别测得两个目标样本中未知组分的质谱特征碎片峰及保留时间信息，经与相关标准物质的质谱图和保留时间比对，最终认定两个目标样本分别含有5F-AMB和Diclazepam成分，并对其在电子轰击源（EI）模式下的碎裂机理进行了详细阐述。结论 该方法简单可靠，可用于新精神活性物质5F-AMB和策划药Diclazepam的检验。
关键词： 5F-AMB；Diclazepam；GC-MS；裂解机理
5F-AMB，即N-(1-甲氧基羰基-2-甲基丙基)-1-(5-氟戊基)吲唑-3-甲酰胺，是一种新型精神活性物质，属于合成大麻素类化合物，分子式C19H26FN3O3，分子量363。近年，虽然世界各地有多例5F-AMB的报道[1-4]，且有滥用5F-AMB导致死亡的案例[5]，但是尚未有5F-AMB药理作用的研究。目前，中国、日本、瑞典和新加坡等国已将该物质列为管制毒品，美国、加拿大和德国等国对其在购买、销售和持有等方面均加以管制。Diclazepam，化学名称为7-氯-5-（2-氯苯基）-1-甲基-1,3-二氢-1,4-苯并二氮杂䓬-2-酮，是一种新型苯二氮卓类策划药，分子式C16H12Cl2N2O，分子量319。Diclazepam的化学结构和地西泮类似，具有和地西泮相同的药理作用，但动物实验显示，其镇静、催眠效果是地西泮的数倍[6-7]。Diclazepam的相关报道有多例[8-10]，其中有一例MDPV和Diclazepam等同时滥用引发中毒死亡的案例报道[10]。在我国，已出现多起贩卖Diclazepam并将其用于麻醉抢劫、迷奸犯罪的案件。在世界各地法规管制方面，英国将其列为C级管制药品，加拿大仅将其列入第IV类管控药物目录，其余各国均为对其采取管制措施。
本文首次报道了中国大陆出现的5F-AMB电子烟油和Diclazepam片剂，并建立了其气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析方法，同时提出了其分子裂解机理。
图1 5F-AMB和Diclazepam分子结构式
Fig.1 Chemical structures of 5F-AMB and diclazepam
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
AGILENT7890A-5975C型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent 公司）；EYELA CM-1000型高速振荡机（上海爱朗仪器有限公司）；SIGMA 3K15型高速离心机（德国Sigma离心机有限公司）；甲醇（中国国药化学试剂有限公司）；1.0 mg/mL 5F-AMB标准溶液（美国Cerilliant公司）；Diclazepam标准品粉末（美国Cayman Chemical公司）；分析目标样本1（浅棕色粘稠液体，来自毒品案件缴获，图2）；分析目标样本2（正面、背面均光滑的白色片剂，来自毒品案件缴获，图3）。
1.2 提取方法
取分析目标样本1，混合均匀，量取100 μL，置于15 mL离心管中，加入10 mL甲醇，震荡10 min，5000 r/min下离心5 min，吸取1.5 mL上清液进GC/MS分析；取分析目标样本2，研磨均匀，称取10.00 mg 粉末，置于15 mL离心管中，加入10 mL甲醇，震荡10 min，5000 r/min下离心5 min，吸取1.5 mL上清液进GC-MS分析。
当然，现在的线上线下混合式教学改革还只是迈出了一小步，还存在许多问题值得我们进一步反思和研究，如：在应用中如何对学生的自主学习过程进行设计与监测、该模式应用效果如何从量化的角度加以论证与评价等，本文只是抛砖引玉，期待在现今的教学改革中激起一片小小涟漪。
图2 分析目标样本1
Fig.2 The seized liquid
图3 分析目标样本2
Fig.3 The seized tablets
1.3 分析方法
梁实秋说：“中年的妙趣，在于相当的认识人生，认识自己，从而作自己所能作的事，享受自己所能享受的生活。科班的童伶宜于唱全本的大武戏，中年的演员才能担得起大出的轴子戏，只因他到中年才能真懂得戏的内容。”这话说得实在，人到中年，才会真正成熟起来，学识、经验、能力、水平达到最高峰，敢于挑大梁，能撑大场面，高度自信，从容不迫，正是干事业出成就的好时候。人的一生是否成功，有无价值，中年是关键。
2 结果和讨论
把30对母亲和婴儿分为两组。一组为实验组,一组为对照组。对实验组的母亲和婴儿进行母婴床边照顾的模式,床边母婴的专科护士进行护理操作和对母亲及婴儿健康教育,另一组使用普通的照顾。选择的产妇都是第一次生育的产妇,所有产妇都没有精神方面或其他的身体疾病。并且他们都进行本次试验。两组在家庭地位、文化程度、年龄、孕龄、入院的日期等方面的区别,有可比性。,因此试验的结果也具有代表性。
图4 目标分析样本1提取液的总离子流图
Fig.4 Total ion chromatogram of the seized liquid
图5 Rt=16.323min的色谱峰对应的质谱
Fig.5 The mass spectrum of seized liquid (Rt = 16.323 min)
为了详细地阐明Diclazepam在EI离子源轰击下的裂解机理，本文对其裂解方式进行了推测（图9）。Diclazepam在EI离子源作用下失去电子得到分子离子峰碎片 7（m /z 318），7失去一个氯自由基（Cl˙）得到基峰碎片9（m /z 283），然后继续失去一分子一氧化碳（CO）生成m /z 255的离子碎片10；m /z 290的离子碎片8是由7直接失去一分子一氧化碳得到的。至此，质谱图中主要的分子离子峰都得到了合理解释。
目标样本1提取液的总离子流色谱图和保留时间为16.323 min的色谱峰对应质谱图见图4和图5所示。所设分析条件下，分析目标样本中保留时间为16.323 min的色谱峰对应的GC/MS质谱碎片主要的特征离子峰为：m /z 为145.0、175.0、213.0、233.1、304.1、363.2。将1.0 mg/mL 5F-AMB标准溶液稀释至0.1 mg/mL，在相同条件下分析。5F-AMB的保留时间为16.323 min，GC-MS质谱碎片主要的特征离子 峰 为 m /z 为 145.0、175.0、213.0、233.1、304.1、363.2，且丰度比一致，因此，认定目标样本1中含有5F-AMB成分。
DB-5MS（0.25 mm×30 m，0.25 μm）石英毛细管色谱柱；柱温程序起始60 ℃，以15 ℃/min 升至300 ℃，保持15 min；进样口温度280 ℃；氦气（He）作载气，流速1.0 mL/min，分流进样，分流比20∶1；进样量1.0 μL ；电子轰击（EI）离子源；电子能量70 eV；传输线温度280 ℃；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；质量扫描范围m /z 40～500 amu；阈值50；全扫描模式（SCAN）采集总离子流图；溶剂延迟3.0 min。
图6 5F-AMB的EI源诱导裂解机理推测
Fig.6 Proposed pathway of EI-induced fragmentation of 5F-AMB
目标样本2提取液的总离子流色谱图和保留时间为15.883 min的色谱峰对应质谱图见图7和图8所示。所设分析条件下，分析目标样本中保留时间为15.883 min的色谱峰对应的GC/MS质谱碎片主要的特征离子峰为 ：m /z 为 125.0、150.0、177.0、219.1、255.0、283.0、290.0、318.0。将Diclazepam标准品粉末配制成0.1 mg/mL甲醇溶液，在相同条件下分析。Diclazepam的保留时间为15.883 min，GC/MS质谱碎片主要的特征离子峰为m /z 为125.0、150.0、177.0、219.1、255.0、283.0、290.0、318.0， 且 丰 度 比 一致。因此，认定目标样本2中含有Diclazepam成分。
图7 目标分析样本2提取液的总离子流图
Fig.7 Total ion chromatogram of the seized tablets
为了详细地阐明5F-AMB在EI离子源轰击下的裂解机理，本文对其裂解方式进行了推测（图6）。质谱图中主要碎片离子峰的来源如下：5F-AMB在EI离子源作用下失去电子得到分子离子峰碎片1（m /z 363）。1经过羰基邻位N的α位断裂得到基峰碎片5（m /z 233），然后继续失去一个HF分子生成m /z 213的离子碎片6；同时，也可以发生β位断裂得到m /z 304的离子碎片4；m /z 145的离子碎片3是1失去长链氟代烯烃后，再经过酰胺N的α位断裂得到的。
图9 Diclazepam的EI源诱导裂解机理推测
Fig.9 Proposed pathway of EI-induced fragmentation of dicalzepam
本文首次报道了中国大陆出现的5F-AMB电子烟油和Diclazepam片剂，建立了其气相质谱联用（GC/MS）分析检测方法，并通过与标准物质比对进行了确认。同时对二者在EI离子源轰击下的裂解机理进行了详细阐述。这两个案例的出现反映出新精神活性物质5F-AMB液体和策划药Diclazepam片剂已经进入我国，这对于我国司法技术检验部门排查和认定这两种物质具有借鉴作用。
3 案例应用
3.1 姚某某涉嫌贩卖毒品案
2016年1月以来，姚某某（湖北某市人）通过网络出售标有“二代电子烟”“烟油”等标志的商品，销售金额达40余万元。由于姚某某具有购买毒品大麻的前科，且近期与贩毒网站联系频繁，湖北省某市公安部门于2016年8月对其进行立案侦查。2016年10月，侦查员将姚某某售卖的商品送相关部门进行检验鉴定。相关检验鉴定部门按照本文所述方法检验后，认定姚某某售卖的商品中含有5F-AMB成分。
胰岛素由胰岛素分泌颗粒以胞吐的形式进行释放，分为两相。一相分泌是由释放池的胰岛素分泌颗粒受到刺激（如注射精氨酸）后，无需进一步加工修饰即可释放；二相分泌则是由储备池的胰岛素分泌颗粒通过运动、停泊、融合以及最终的排空过程释放。本研究结果显示，T2DM 合并微血管病变患者的 AIR 指数、INSAUC、HOMA-IR 指数均高于对照组，提示胰岛素抵抗以及代偿性的高胰岛素血症与 T2DM 患者微血管病变的发生有关，这与Reaven[10]的研究结论一致。
3.2 张某涉嫌贩卖毒品案
2017年7月，张某在甘肃省康乐县某小区附近准备向他人出售疑似毒品物质时，被当地公安部门当场抓获。现场缴获标有“三唑仑”字样的药品，共计50瓶，净重475 g。2017年9月，侦查员将张某售卖的药品送相关部门进行检验鉴定。相关检验鉴定部门按照本文所述方法检验后，认定张某售卖的药品中含有Diclazepam成分。
参考文献
［1］ DOI T, ASADA A, TAKEDA A, et al. Enantioseparation of the carboxamide-type synthetic cannabinoids N-(1-amino-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)-1-(5-fluoropentyl)-1H-indazole-3-carboxamide and methyl ［1-(5-fluoropentyl)-1H-indazole-3-carbonyl］-valinate in illicit herbal products［J］. Journal of Chromatography A. 2016, 1473: 83-89.
［2］ HESS C, STOCKHAUSEN S, KERNBACHWIGHTON G, et al. Death due to diabetic ketoacidosis: Induction by the consumption of synthetic cannabinoids?［J］. Forensic Science International. 2015, 257: e6-e11.
［3］ KIM E, PARK Y, HA H, et al. Patterns of drugs & poisons in southern area of South Korea in 2014［J］. Forensic Science International. 2016, 269: 50-55.
［4］ LOBO V J, CHASSAIGNE H, HOLLAND M V, et al. Systematic analytical characterization of new psychoactive substances:A case study［J］. Forensic Science International. 2016, 265: 107-115.
［5］ SHANKS K G, BEHONICK G S. Death after use of the synthetic cannabinoid 5F-AMB［J］. Forensic Science International.2016, 262: e21-e24.
［6］ BABBINI M, GAIARDI M, BARTOLETTI M. Anxiolytic versus sedative properties in the benzodiazepines series: differencies in structure-activity relationships［.J］. Life Science. 1979,25(1): 15-22.
［7］ STERNBACH L H, RANDALL L O, BANZIGER R, et al.Chapter 6: Structure-activity relationships in the 1,3-benzodiazepine series, in Drugs Affecting the Central Nervous System(Ed: A. Burger)［ M］. London: Edward Arnold Publishers Ltd,1968.
［8］ HØISETH G, TUV S S, KARINEN R. Blood concentrations of new designer benzodiazepines in forensic cases［J］. Forensic Science International. 2016, 268: 35-38.
［9］ MOOSMANN B, BISEL P, AUWÄRTER V. Characterization of the designer benzodiazepine diclazepam and preliminary data on its metabolism and pharmacokinetics［J］. Drug Testing& Analysis. 2014, 6(7-8): 757-763.
［10］ LIVERI K, CONSTANTINOU M A, AFXENTIOU M, et al. A fatal intoxication related to MDPV and pentedrone combined with antipsychotic and antidepressant substances in Cyprus［J］.Forensic Science International. 2016, 265: 160-165.
Identifying Synthetic Cannabis 5F-AMB and Benzodiazepinecategorized Diclazepam with GC-MS
ZHAO Yanbiao, ZHENG Xiaoyu, ZHENG Hui, QIAN Zhenhua, GAO Lisheng
(Institute of Forensic Science, Ministry of Public Security, Beijing 100038, China)
ABSTRACT: Objective To develop a GC/MS method for identifying synthetic cannabis 5F-AMB, one new psychoactive substance, and benzodiazepine-categorized diclazepam, said of China's first report about these two chemicals, and to describe EI(electron impacting)-induced fragmentation pathways of both 5F-AMB and diclazepam. Methods Both the suspected 5F-AMB-e-liquid and diclazepam substances were fully ground and extracted with methanol, respectively. The extracts were subjected to centrifugation, with the supernatants to be analyzed with GC-MS. Results One unknown component (R t= 16.323 min) was detected out from the e-liquid, appearing its characteristic fragmental ion peaks at m/z 233.0 (base peak), 145.0,304.1 and 363.2. Another one unknown component (R t= 15.883 min) was found from the tablets, turning out its characteristic fragmental ion peaks at m/z 283.0 (base peak), 318.0, 255.1 and 290.0. The two unknown components matched well against the standard reference materials of 5F-AMB and diclazepam with both their retention time and characteristic fragmental ion peaks, respectively. As a result, the drugs in the tested liquid/tablets were identified as new psychoactive substance, 5F-AMB,and the designer drug, diclazepam. Moreover, the proposed EI-induced fragmentation pathways of both 5F-AMB and diclazepam were described in detail. Conclusions A robust and reliable method was developed for 5F-AMB and diclazepam to identify with GC-MS, capable of being applied into relevant forensic cases.
KEY WORDS: 5F-AMB; diclazepam; GC-MS; fragmentation pathway
中图分类号： DF795.1
文献标识码： A
文章编号： 1008-3650(2019)04-0289-04
DOI： 10.16467/j.1008-3650.2019.04.002
基金项目： “十三五”国家重点研发计划项目（No.2017YFC0803604）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（No.2018JB030）
第一作者简介： 赵彦彪，男，河北保定人，硕士，助理研究员，研究方向为毒品检验技术。E-mail：zhaoyanbiao2011@163.com。
收稿日期： 2018-04-10；修回日期：2018-05-29
引用 本文格式：赵彦彪，郑晓雨，郑珲，等. 新精神活性物质5F-AMB和策划药Diclazepam的GC-MS检验方法研究[J]. 刑事技术，2019,44(4):289-292.
标签：5F-AMB论文; Diclazepam论文; gc-ms论文; 裂解机理论文; 公安部物证鉴定中心论文;