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摘要：目的：分析分别采用ELISA、普通PCR及实时荧光PCR检测手足口病病原体的实验室检测结果，为临床检测手足口病提供参考。方法：选取2014年1月至2015年2月我市发生的手足口病患者216例，采集咽拭子、血清、排泄物样本，分别采用ELISA、普通PCR及实时荧光PCR检测所采集样本，对比三种检测方法的实验室检测结果。结果：采用普通PCR、实时荧光PCR检测咽拭子与排泄物样本，排泄物的阳性率均显著高于咽拭子样本，差异具有统计学意义（P<0.05）；实时荧光PCR检测两种样本的阳性率比普通PCR检测阳性率高，但无统计学差异（P>0.05）；ELISA法检测血清的阳性率比实时荧光PCR、普通PCR检查咽拭子、排泄物样本的阳性率较高。结论：实时荧光PCR检测手足口病病原体阳性率比普通PCR高，可用于手足口病的早期检测，利用ELISA对手足口病患者血清样本检测具有较高的临床诊断应用价值。
关键词：ELISA法；普通PCR法；实时荧光PCR法；手足口病
手足口病[1-3]是婴幼儿常见的急性感染性疾病，临床表现多以手、足、口腔疱疹或溃疡，并伴发厌食、乏力、发热等症状，严重影响婴幼儿的正常发育。相关研究表明，CA16和EV71是导致手足口病感染的主要致病病毒[4，5]。为预防手足口病的感染，提高对手足口病病原体检测手段，本研究分析了采用ELISA、普通PCR及实时荧光PCR的检测结果，为临床诊断手足口病提供参考。
1 资料与方法
1.1 样本采集
选取2014年1月至2015年2月我市符合手足口病临床诊断标准的216例患者的咽拭子、血清、排泄物样本各134份、210份、44份。其中咽拭子样本在患者发病后3日内采集；排泄物样本、血清样本均在患者发病7日内采集。
1.2 试剂与设备
核酸提取试剂盒（美国Invitrogen公司），荧光定量检测试剂盒（上海之江生物科技有限公司），柯萨奇病毒A16（CA16）、肠道病毒71（EV71）PCR检测试剂盒与ELISA试剂盒（武汉百泰基因工程有限公司），高速离心机（德国Eppendorf公司），荧光定量PCR仪（美国AB公司7300型），普通PCR仪（美国BIO-RAD公司PTC-200型）。
1.3 检测方法
检测之前按照试剂盒说明书对采集的咽拭子、排泄物样本进行预处理。将排泄物样本加入50ml离心管内，加入10ml的磷酸盐缓冲液、1ml氯仿和1g玻璃珠，振荡后离心处理后取悬液备用；将咽拭子样本充分振荡后备用，严格按照核酸提取试剂盒说明书进行RNA提取，离心处理后取上清液提取RNA以备后用。分别采用普通PCR、实时荧光PCR检测采集的咽拭子、排泄物样本，采用ELISA法检测采集的患者血清样本。对比三种检测方法的实验室检测结果。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计学分析软件进行数据处理，计数资料以百分数表示，组间比较采用Χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义的标准。
2 结果
2.1 普通PCR检测结果
采用普通PCR检测咽拭子、排泄物两种样本，排泄物样本的阳性率显著高于咽拭子样本，差异具有统计学意义（P<0.05）。详见表1。
3 讨论
手足口病具有感染性强、传播迅速、流行性广泛等特点，对5岁以下儿童产生较严重的影响[6]。导致手足口病的病原体是以小RNA病毒科肠道病毒属的柯萨奇病毒、肠道病毒71型为主。实时荧光PCR检测技术是临床常用的病原体检测技术，具有检测迅速、精度性高等优势[7-9]。ELISA法（酶联免疫吸附测定法）检测是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定，是近年来发展起来的新型免疫测定技术[10]。本研究分别采用普通PCR、实时荧光PCR及ELISA法对216例手足口病患者提取的咽拭子、血清、排泄物样本进行检测分析，旨在为临床诊断提供参考。
结果表明，采用实时荧光PCR检测咽拭子、排泄物的EV71与CA16的阳性率均高于普通PCR法；ELISA法检测血清样本的EV71与CA16阳性率与实时荧光PCR、普通PCR检查咽拭子、排泄物样本的检测阳性率较高，说明采用实时荧光PCR检测技术对患者排泄物的检测阳性率较高，而通过检测患者咽拭子样本的阳性率则较低，提示患者咽拭子检测对于手足口病病原体检测应用价值不大，而ELISA检测法对患者血清样本的检测阳性率较高，两种检测方法均可用于手足口病的临床诊断。
综上所述，采用实时荧光PCR法对排泄物检测的阳性率较高，ELISA法对血清样本检测的阳性率明显高于普通PCR与实时荧光PCR法，因此可利用实时荧光PCR法对手足口病患者进行早期检测，利用ELISA对手足口病患者血清样本检测具有较高的临床诊断应用价值。
参考文献：
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论文作者:蒋永林
论文发表刊物:《健康世界》2015年12期
论文发表时间:2016/5/23
标签：手足论文; 样本论文; 排泄物论文; 荧光论文; 实时论文; 血清论文; 阳性率论文; 《健康世界》2015年12期论文;