李岩峰
黑龙江省绥化市中医医院 152000
摘要：目的 比较三种不同检验方法对阴道细菌的阳性检出率。方法 采集本院收治的86例阴道疾病患者的阴道分泌物，分别采取细菌培养法、革兰染色法及PCR法检验阴道分泌物，并将检验结果进行对比分析。结果 革兰染色法检验总阳性检出率为75%，PCR法检验总阳性检出率为97.06%；PCR法检验结果与细菌培养法无统计学差异性，P>0.05；革兰染色法检验结果与细菌培养法有统计学显著性差异，P<0.01；PCR法与革兰染色法有统计学明显性差异，P<0.05。结论 PCR检验法具有较高的阳性检出率，且操作简便快捷，能够满足临床诊断需要，可于阴道细菌临床检验工作中推广应用。
关键词：阴道细菌；细菌培养；PCR；革兰染色法
ABSTRACT：Objective To compare the positive detection rates of vaginal bacteria by three different methods.Methods The vaginal secretions of 86 patients with vaginal diseases were collected and tested by bacterial culture， Gram staining and PCR， and the results were compared and analyzed.Results The total positive rate of Gram staining was 75% and that of PCR was 97.06%.There was no significant difference between the results of PCR and bacterial culture（P > 0.05）.There was significant difference between the results of Gram staining and bacterial culture（P < 0.01）；there was significant difference between PCR and Gram staining（P < 0.05）.ConclusionThe method of PCR has a high positive detection rate and is simple and fast to operate.It can meet the needs of clinical diagnosis and can be widely used in clinical testing of vaginal bacteria.
Key words：vaginal bacteria；bacterial culture；PCR；Gram staining
正常健康女性的阴道内各定植菌群保持着相对平衡状态，当自身抵抗力下降或者阴道内环境发生改变时，各菌群数量随之改变而出现比例失衡，从而导致阴道炎的发生[1]。阴道炎是妇科临床中一种最为常见的感染性炎症疾病，如炎症上行感染可导致异位妊娠、急慢性盆腔炎及不孕症等严重疾病[2]。我院对阴道疾病患者的分泌物以3种不同的检验方法进行检验，以分析出最具有临床适用性的检验方法，现将详细情况总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料 以本院2013年1月～3月收治的86例阴道疾病患者作为本院研究资料。年龄为21～48岁，平均（28.63±4.26）岁；全部患者均有明显阴道炎临床表现，并伴有不同程度的阴道瘙痒，阴道内均可见大量白带分泌物。
1.2方法
1.2.1样本采集 采集全部患者的阴道分泌物后分别采取A-细菌培养法、B-革兰染色法及C-PCR法进行检验。全部患者均取截石位，在无菌阴道镜下显示宫颈，于阴道后穹窿处，以无菌棉签沾取分泌物，准备好已置入无菌生理盐水的检验试管，将取得的分泌物移入试管中。
1.2.2细菌培养方法 取出试管中的阴道分泌物样本，于无菌条件下使用无菌接种环将其接种至细菌分离专用培养基上，置入二氧化碳培养箱，于35℃条件下孵育48 h，择取光滑、半透明、灰色的滴露状菌株依据生化鉴定标准行生化检验。
1.2.3革兰染色方法 以95%乙醇溶液浸泡清洁玻片，拭干备用；取试管中的阴道分泌样本均匀涂于玻片上，于医用显微镜下对涂片进行检验分析。
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1.2.4 PCR方法 提取500 μL试管中的阴道分泌物样本放入至生理盐水中，以12000 r/min速度离心 10 min后去清除上清液，加入带有适当碱性的裂解液，于98℃温度下加热10 min，以12000 r/min速度再次离心5 min，取上清液制备为DNA模板。进行PCR细菌检验阴性与阳性对比时，选取与阴道分泌物DNA模板相同的PCR试剂，将无添加物的DNA作为阴性组，添加了DNA模板后的PCR扩容作为阳性组。将两组进行对比分析，检查 PCR的产物与扩容情况，自总体积当中取得25 μL引物、模板、缓冲液及离子水，以无菌石蜡油30μl将其覆盖，进入至PCR循环，循环共32环[3]，PCR循环标准参数为：95℃ 5 min、94℃ 1 min、58℃ 1 min、72℃ 1 min，最后一环于72℃条件下延伸5 min。
1.3统计学分析法 3种检验方法的检验结果进行循环对比，采取χ2检验，使用SPSS 19.0软件进行计算；以细菌培养法检验结果为金标准，计算革兰染色法与PCR法阳性检出率。
2结果
2.1检验结果 以细菌培养法为检验金标准，革兰染色法检验总阳性检出率为75%，PCR法检验总阳性检出率为97.06%。
2.2统计学结果 PCR法检验结果与细菌培养法无统计学差异性，P>0.05；革兰染色法检验结果与细菌培养法有统计学显著性差异，P<0.01；PCR法与革兰染色法有统计学明显性差异，P<0.05。
3讨论
细菌检验是临床工作中的一项重要内容，可为感染性疾病的诊断治疗提供科学性指导，并且能够提高疾病传播的防控力度[4]。阴道炎的主要致病原因为阴道内上皮细胞组织在阴道内环境的作用下，致细菌侵润其表层糖原，使阴道内杆菌出现酸碱度改变经，杆菌数量异常减少，致病菌异常增殖，从而引发阴道炎[5]。阴道炎病起较为缓慢，初期症状不严重，不易引起患者重视，因此明确致病菌对于疾病的有效治疗至关重要。阴道细菌检验是阴道疾病临床诊断的重要方法，检验的准确度对疾病的诊断与致病菌的确定均具有重要作用。
目前临床中常用的阴道细菌检验方法有细菌培养法、PCR法及革兰染色法等。其中细菌培养法是临床公认的阴道细菌检验金标准，但细菌培养法的检验过程较为复杂，对检验设备与环境的要求高，不易于基层医疗单位开展，从某种程度上说限制了其临床应用范围。革兰染色法具有操作简便的优势，在临床中应用广泛，但能够影响检验结果的因素较多，导致革兰染色法在检验过程中存在着一定的误差。常见的误差原因有：染色过程中的脱色不当，脱色过度可致革兰阳性菌于显微镜观察下被确定为革兰阴性菌，脱色不足则可致检验中将革兰阴性菌判断为革兰阳性菌。因此革兰染色法虽具有操作方面的优势，但其检验结果较不理想。PCR技术最早是由Khorana等于1971年提出的核酸体外扩增设想而逐步形成的。PCR检测法将PCR技术的敏感性、杂交DNA的特异性以及光谱学精确度等优点融合于一体，使得PCR检测具有理想的准确度同时操作也更加简便易行。
本次研究中细菌培养法的阳性检出率为79.07%，革兰染色法为59.30%，PCR法为76.74%；以细菌培养法为金标准革兰染色法准确率为75%，而PCR法的准确率高达97.06%。经统计学卡方检验，细菌培养法检验结果与PCR无统计学差异性P>0.05，但与革兰染色法具有统计学差异性P<0.01，同时PCR法检验结果明显优于革兰染色法P<0.05。充分的说明了PCR法在阴道细菌检验中具有理想的阳性检出率，同时由于其操作简便，检验快捷，可于阴道细菌临床检验中推广应用。
参考文献：
[1]钟里华.156例妇女阴道细菌临床检验方法的比较分析[J].中国医药指南，2013，11（19）：553-554.
[2]史跃杰.99例阴道细菌的检验方法比较分析[J].现代预防医学，2011，38（14）：2815-2817.
[3]吴祥如.实验室对阴道细菌的两种检验方法对比[J].中国卫生产业，2013，10（32）：18-18，20.
[4]武翠娥.细菌检验结果失误的临床分析[J].河北医药，2011，33（19）：3012-3013.
[5]严冬霞，樊尚荣.复发性细菌性阴道病的发病机制和治疗[J].实用妇产科杂志，2010，26（2）：85-87.
[6]蒋丽.不同检验方法在细菌性阴道炎诊断中的临床价值[J].中国现代药物应用，2014，8（6）：91-92.
[7]许海涛.几种不同检验方法用于阴道细菌检验临床对比分析[J].当代医学，2014，21（34）：51-52.
[8]朱顺新.阴道细菌临床检验方法的分析与比较[J].医学信息，2014，28（21）：126-127.
论文作者:李岩峰
论文发表刊物:《健康世界》2019年7期
论文发表时间:2019/8/15
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