关键词:丁酸氢化可的松乳膏；丁酸氢化可的松；高效液相色谱法
[中图分类号]R95 [文献标识码]A [文章编号]1439-3768-（2019）-2-ZYM
湿疹是以变态反应为特征的由多种内外因素引起的具有明显渗出倾向的皮肤炎性过敏性疾病[1]。丁酸氢化可的松软膏是一种中高效不含卤素的皮质类固醇激素外用制剂，它在氢化可的松骨架的17α位进行丁酸酯化，其抗炎效价和治疗作用明显增强[2]。丁酸氢化可的松是治疗婴幼儿湿疹较为理想的外用药[3]，治疗皮炎及湿疹起效快，症状改善明显，用药方便，且无明显不良反应[4，5]。此外，丁酸氢化可的松软膏是一种高效、安全的外用皮质类固醇激素制剂，可以应用于治疗儿童异位性皮炎。通过临床观察，治疗皮炎湿疹与抗菌药膏同治疗效果更为理想。丁酸氢化可的松软膏以其显著的疗效及安全性高的特点，在临床上得到了广泛的应用。
1仪器与试药
1.1仪器:FA1104电子天平(上海民桥电子天平仪器厂)；pHS-25型pH计（上海精科雷磁）；80-1离心计（上海手术器械厂）；LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津公司）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）
1.2试药:乙腈（色谱纯）（TEDIA公司）；甲醇、冰醋酸等均为分析纯；丁酸氢化可的松乳膏（10g∶10mg）（批号：080107、080108、080108，自研）；丁酸氢化可的松对照品（50mg）（批号：10303-0101，中国药品生物制品检定所）；已上市销售药品（批号：070209，天津药业集团有限公司）
2性状
本品为白色乳膏。取本品三批与一批已上市销售药品，除去乳膏管肉眼观察，结果见下表。
Tab1中试样品与一批已上市销售药品性状观察结果
批号 080107 080108 080109 市售品 性状 白色乳膏 白色乳膏 白色乳膏 白色乳膏 结果表明：本品三批样品与已上市销售药品的性状均为白色乳膏。
3鉴别
取本品三批与一批已上市销售药品，照上述方法进行试验。结果见下表。
Tab2中试样品与已上市销售药品高效液相色谱鉴别结果
批号 080107 080108 080109 市售品 对照品 保留时间（min） 12.313 12.295 12.308 12.302 12.307 结果表明：本品三批样品与一批已上市销售药品，照上述方法进行液相色谱鉴别，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致。
4检查
4.1均匀性
取本品适量，分别涂布于平面玻璃板上，肉眼观察。取本品三批与一批已上市销售药品，照上述方法进行试验，结果见下表。
Tab3中试样品与已上市销售药品均匀性检查结果
批号 080107 080108 080109 市售品 肉眼观察 均匀 均匀 均匀 均匀 4.2有无分层
取本品10g，装入带刻度的离心管内，在转速2500转/分的离心机上离心0.5h，应无分层现象。取本品三批与一批已上市销售药品，按上述方法操作，结果见下表。
Tab4中试样品与已上市销售药品有无分层检查结果
批号 080107 080108 080109 市售品 有无分层 无分层 无分层 无分层 无分层 4.3装量
取本品三批与一批已上市销售药品，除去外盖和标签，容器外壁用乙醇擦洗并干燥，分别精密称定重量，除去内容物，容器用乙醇及丙酮溶剂洗净并干燥，再分别精密称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量。结果表明：平均装量不少于标示装量，且每支装量均不少于标示装量的93%，本品三批与一批已上市销售药品的装量检查均符合规定。
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4.4有关物质
采用主成分自身对照法进行有关物质检查。取本品适量（约含丁酸氢化可的松5mg），加乙腈20ml，置70℃水浴中加热，搅拌使丁酸氢化可的松溶解，放冷，加乙腈稀释至50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后离心半小时，取上清液迅速滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1ml，置50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各20µl，分别注入色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，扣除辅料及溶剂峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积，单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的1/2。
取本品三批与一批已上市销售药品，照上述方法进行丁酸氢化可的松有关物质检查，结果见下表。
Tab5 三批样品与一批已上市销售药品丁酸氢化可的松有关物质检查结果
批 号 080107 080108 080109 市售品 有关物质 最大杂质（％） 0.41 0.42 0.39 0.46 有关物质（％） 0.87 0.88 0.84 0.92 5含量测定(照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录VD）测定)
5.1色谱条件与系统适用性试验
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-乙腈-冰醋酸（55∶45∶0.5）为流动相；检测波长240nm。理论板数按丁酸氢化可的松峰计算不低于1500，丁酸氢化可的松峰与内标物质峰的分离度应符合要求。
系统适用性试验
内标溶液的制备取甲睾酮，加甲醇制成每1ml中含0.18mg的溶液，即得。
测定法 取本品适量（约相当于丁酸氢化可的松1.3mg），精密称定，加甲醇15ml，置50℃水浴中加热，搅拌使丁酸氢化可的松溶解，放冷，精密加内标溶液5ml，用甲醇精密稀释至50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出，迅速滤过，放至室温，取续滤液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取丁酸氢化可的松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成1ml中约含0.26mg的溶液，精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。
5.2方法学验证
色谱条件及系统适用性试验
（1）色谱条件
色谱柱：Shim-packVP-ODS（150L×4.6）；流动相：水-乙腈-冰醋酸（55∶45∶0.5）；流速1.0ml/min；检测波长：240nm；进样量20μl。
（2）系统适用性试验
内标溶液的制备同5.1.2项下
测定法及结果取丁酸氢化可的松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成1ml中约含0.26mg的溶液，精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图；N2000色谱工作站系统评价结果看出：理论板数按丁酸氢化可的松计算为14376.067，丁酸氢化可的松与内标物质的分离度为3.617，符合要求。
溶剂干扰性试验
取含量测定项下空白溶剂20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，溶剂不干扰本法的测定。
标准曲线绘制及线性范围的考察
内标溶液的制备同5.1.2项下
测定法取丁酸氢化可的松对照品13mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液2、3、4、5、6、7、8ml，分别置50ml量瓶中，各精密加入内标容溶液5ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取20µl注入液相色谱仪。以校正因子为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归。结果表明：在0.0105～0.0419mg/ml浓度范围内，本法的线性良好。
进样重复性试验
取线性项下的低、中、高溶液，连续进样5次，记录峰面积，计算校正因子及RSD值。
辅料干扰性试验
取空白辅料约1.3g置50ml量瓶中，加甲醇15ml，置50℃水浴中加热搅拌，放冷，用甲醇精密稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出，迅速滤过，放至室温，取续滤液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图；结果表明，辅料不干扰本法的测定。
6回收率试验
内标溶液的制备同5.1.2项下。
测定法精密称定丁酸氢化可的松对照品10.4mg、13mg、15.6mg各三份，精密称定，分别置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述不同浓度的溶液各5ml，分别置50ml量瓶中，加入处方比例的空白辅料，再加入甲醇10ml，置50℃水浴中加热搅拌，放冷，精密加内标溶液5ml，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出，迅速滤过，放至室温，取续滤液20µl注入液相色谱仪，按内标法计算回收率。结果表明：本法测定丁酸氢化可的松含量方法的回收率结果较好。
溶液稳定性试验
取回收率项下的低、中、高三个浓度的样品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24小时各进样20μl，计算RSD值，考察样品溶液的稳定性。结果表明：供试品溶液在24小时内稳定。
重复性
内标溶液的制备同5.1.2项下。
测定法在同批样品中取6份样品（各约相当于丁酸氢化可的松1.3mg），精密称定，加甲醇15ml，置50℃水浴中加热，搅拌使丁酸氢化可的松溶解，放冷，精密加内标溶液5ml，用甲醇精密稀释至50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出，迅速滤过，放置室温，取续滤液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取丁酸氢化可的松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成1ml中约含0.26mg的溶液，精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。结论：本品测定含量的重复性良好。
5.3结果
经方法学验证，该含量测定方法可行，按上述含量测定方法进行测定。取本品三批样品与一批已上市销售药品，照上述方法进行试验，结果如下。
表6中试样品与一批已上市销售药品含量测定结果
批号 080107 080108 080109 市售品 含量（%） 99.1 98.7 100.2 98.8 以上结果可以看出：三批样品的含量均符合要求。
6结论与讨论
（1）参照中国药典2005年版二部丁酸氢化可的松乳膏及丁酸氢化可的松原料药进行了质量标准研究。
色谱柱采用Shim-packVP-ODS（150L×4.6），以水-乙腈-冰醋酸（55∶45∶0.5）流动相，结果表明色谱峰对称性好，柱效高，分离度良好。并进行了方法学验证，结果良好。实验表明，用该标准可以对丁酸氢化可的松乳膏进行质量控制。
（2）含量测定项在供试品溶液制备时发现，样品加甲醇水浴溶解，此时基质也溶解完全，此溶液在存放与进样时，基质可能会析出，损伤色谱柱，故需在冰浴中冷却两小时以上，使其基质充分析出，过滤，放置室温，再进样。
（3）在有关物质供试品溶液制备时，由于乳膏称量量较大，供试品溶液冰浴中冷却2小时后，直接过滤较为困难，采用离心半小时，取上清液再过滤，操作较为方便。
参考文献
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[5]王宗明.丁酸氢化可的松软膏治疗皮炎湿疹的疗效观察[J].药学服务与研究,2003,3(3):193～194.
论文作者:桂向中
论文发表刊物:《药物与人》2019年2月
论文发表时间:2019/5/28
标签：可的松论文; 丁酸论文; 氢化论文; 溶液论文; 精密论文; 色谱论文; 甲醇论文; 《药物与人》2019年2月论文;