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【摘要】目的：检测注射用头孢米诺钠中聚合物。方法：采用伊立特公司葡聚糖凝胶G-10色谱柱，玻璃柱内径1.5cm，柱长30cm。以pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61:39）]为流动相A，以水为流动相B，检测聚合物。结果：本方法能准确检测注射用头孢米诺钠中聚合物，聚合物的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势。
【关键词】注射用头孢米诺钠；聚合物；过敏原
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）12-0338-02
高分子聚合物是头孢菌素类抗生素中引发速发型过敏反应的过敏原，在β－内酰胺类抗生素所致的速发型过敏反应中，药物分子本身只是半抗原，药物中存在的高分子聚合物才是引发速发型过敏反应的真正过敏原。β－内酰胺类抗生素中的高分子杂质按其来源通常被分为两类：外源性杂质和内源性杂质。对于现在的生产工艺，外源性的高分子杂质已经较少产生，对内源性聚合物的控制是当前抗生素高分子杂质质量控制的重点。
研究表明，高分子聚合物不仅能引发IgE介导的过敏反应，而且青霉素类的抗生素还能经胃肠道吸收而引发过敏反应。因而在β－内酰胺类抗生素中应对高分子聚合物进行严格的控制，可以保证临床用药的安全有效。
1.仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent色谱工作站。色谱柱：葡聚糖凝胶G-10柱（填料：Sephadex G-10 尺寸：15.0mm×300mm）Mettler-AB204-E型电子天平。头孢米诺对照品来自中国药品生物制品检定所。注射用头孢米诺批号为20120201、20120202、20120203；甲醇色谱纯，其余试剂为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性试验摸索
流动相：以pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61:39）]为流动相A，以水为流动相B，检测波长为254nm。
系统适用性：分别以流动相A、B为流动相，取0.4mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液100～200μl，注入液相色谱仪，理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均不低于400，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。称取头孢米诺约0.2g，置10ml量瓶中，加0.4mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。取100～200?l，用流动相A进行测定，记录色谱图。高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液100～200?l，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0％。
为使聚合物分离的更好，对流动相流速进行了适当的摸索，分别考察了流速1.5ml/min、1.0 ml/min、0.8ml/min、0.7ml/min下的聚合物峰的流出情况。
流速与聚合物流出情况图
备注：①为流速1.5ml/min、②为1.0ml/min、③为0.8ml/min ④为0.7ml/min
结果：流速为1.5ml/min时，聚合物峰无法分离。随流动相流速的下降，聚合物分离度明显变好。将流速由1.5ml/min的调整成0.7ml/min，聚合物在0.7ml/min的流速下，各项系统适应性试验完全符合要求，聚合物能被很好的检测。
2.3 方法学考察
照分子排阻色谱法（中国药典2010版二部附录Ⅴ H）测定。
2.3.1线性关系 称取头孢米诺对照品适量，精密称定，置100ml量瓶中，用注射用水溶解后，稀释至刻度，摇匀作为储备液；分别精密移取储备0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml、1.2ml、1.3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按聚合物测定的色谱条件，取上述溶液各100?l注入色谱仪，记录色谱图，以进样浓度C(?g/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。
表1 头孢米诺聚合物测定的线性关系
结果表明：供试品浓度在范围50%～200%之间，聚合物峰面积呈良好的线形关系。
2.4 结果
按照上述聚合物的检测方法，对注射用头孢米诺钠为批号为20120201、20120202、20120203批的样品进行检测并进行样品留样稳定性考察，注射用头孢米诺钠中聚合物的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势，结果见表5。
表5 聚合物检测结果
3.讨论
高分子聚合物是头孢菌素类抗生素中引发速发型过敏反应的过敏原，会导致药物不良反应的发生。因此β－内酰胺类抗生素，必须控制聚合物的量。聚合物方法学研究结果表明，本方法精密度高，重复性、线性关系好，能够准确定量注射用头孢米诺钠中聚合物的量，达到控制本品中聚合物量的目的。经样品检测，试验用注射用头孢米诺钠中聚合物的量均符合规定。但在留样考察过程中聚合物的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势。因此存放过程中应严格按照说明书储存条件执行，存放在阴凉干燥处。
【参考文献】
[1] 《中国药典》2010版二部.
[2] 高丹玲.头孢米诺钠高分子聚合物的测定[J].海峡药学2006（6）：45-47.
[3] 李兵，肖甜甜.高效分子排阻色谱法测定头孢米诺钠聚合物的含量[J].中国医药指南2013（26）：344-345.
论文作者:王雪莲,翟灵妍
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第12期供稿
论文发表时间:2015/7/31
标签：聚合物论文; 头孢论文; 色谱论文; 溶液论文; 流速论文; 聚糖论文; 高分子论文; 《医药前沿》2015年第12期供稿论文;