东莞标检产品检测有限公司 广东东莞 523000
摘 要：为了利用HPLC法对用于清热解毒的中成药的9种非法添加化学药品进行同时检测，利用Eclipse Plus C18色谱柱，流动相为乙腈-0.05mol?L-1乙酸铵，进行梯度洗脱；以0.8mL?min-1为流速；230nm为检测波长；40℃为柱温，发现对照品9种的浓度范围较宽，峰面积与浓度呈线性关系(r不小于0.9995)，且0.3～8.8ng为检出限、1.0～30ng为定量限。所以，这种法简单、重复性佳，能同时对中成药中上述9种化学成分是否被非法添加进行检测。
关键词：中成药；HPLC；非法添加
因为中药的质量标准常常只规定了定性成分和定量检测有效或指标性成分，并没有控制杂质，进而不法厂商借机钻法律空子，将化学药品非法添加到中成药中，这除了违反了我国药品管理法外，还因为中药具有复杂的成分，其中的成分很可能会和某西药成分产生化学反应，进而导致严重的不良反应，这会严重伤害患者身体。而清热解毒类中成药属于临床上的一类常见药物，常用作抗病原微生物，以提高机体防御能力，能抗炎解热 [1-3]，具有较大的市场份额，而且其中的纯中药较慢才起效，所以某些不法厂商也会对其非法添加化学药品。
1 仪器和试药
1.1 仪器
Agilent1260高效液相色谱仪；梅特勒AL204型电子分析天平；数控超声波清洗机(KQ-500DB型、频率40KHz、电功率500W)；Universal320型离心机；XK96-B型快速混匀器。
1.2 试药
乙腈、乙酸铵、甲醇、水为二次蒸馏水。阿司匹林、对乙酰氨基酚、头孢氨苄、磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、氨基比林、芬布芬、双氯芬酸钠和布洛芬(以下顺序同)对照品。购买的二十种(批)用于清热解毒的中成药为：颗粒剂、感冒清热颗粒、感冒清热颗粒、抗病毒颗粒、感冒清热颗粒、羚羊感冒胶囊、清热消炎宁胶囊、羚羊感冒胶囊、三黄片、牛黄解毒片、黄连上清丸、羚翘解毒丸、清咽片、牛黄解毒片、清热解毒口服液、银黄口服液、穿心莲片、板蓝根颗粒、板蓝根颗粒、清咽片。
2 实验
2.1 配制溶液
对照品混合溶液：9种药物均以甲醇为溶剂，并分别制成对照品贮备液。分别吸取适量的对照品贮备液，并利用甲醇将其分别稀释成浓度为0.10，0.10，0.1，0.30，0.062，0.04，0.10，0.01，0.06mg?mL-1的对照品混合溶液。
配制供试品溶液：研细中成药 (一次剂量、连壳或糖衣研)，在250mL的量瓶中放置，加适量甲醇(先加热水溶解囊壳)，将其摇匀，超声10分钟，添加甲醇到刻度，再摇匀，离心10分钟，再通过0.45μm的滤膜。
2.2 条件
以Eclipse Plus C18为柱色谱柱；以乙腈-0.05mol?L-1醋酸铵为流动相，梯度洗脱：5%乙腈的增到45%（0～20min），乙腈在20～25min保持45%。以0.8mL?min-1为流速；40℃为柱温；230nm为检测波长；10μL为进样量。能完全分开9种化学药品，峰计理论板数（阿司匹林）大于5000。
2.3 考察
2.3.1 所呈线性关系
配制好对照品溶液，基于上述色谱条件分析。横、纵坐标分别为对照品浓度、峰面积，线性回归后发现，呈良好的线性关系。
2.3.2 精密度
取对照品混合溶液，连续6次进样(单独稀释阿司匹林为0.12mg?mL-1后进样)，0.4%～1.3%为化学药品峰面积RSD，0.03%～0.08%为保留色谱峰时的RSD。
2.3.3 检出限(LOD)和定量限(LOQ)
以3为信噪比作为LOD，10为信噪比作为LOQ，具体结果见表1。
表1 化学药品的LOD和LOQ（ng）
对比二者的保留时间后，发现仅某颗粒剂可能有添加对乙酰氨基酚。以240nm为波长，重新进样，基于两种波长，对照品与样品的峰面积比一样；利用HPLC-DAD检测，发现对照品与某颗粒剂的添加物DAD光谱相同，可知这些中成药中有加入对乙酰氨基酚。
然后，又采用联用液-质法加以确认，以乙腈为A流动相；水(0.1%甲酸)为 B，采用梯度洗脱， A在1.5分钟内从5%变为95%，以2mL?min-1为流速；条件：采用AB 4000型质谱仪，离子源、电喷雾，正离子检测，以25psi为雾化气压力，10L?min-1为干燥气流速，350℃为干燥气温，测定用一级全扫描及离子监测法，一级全扫描乙酰氨基酚（对照品）所得的质谱图中[M+H]+峰为m/z152，M+2峰为m/z153，离子峰为m/z110；离子监测对照品与供试品所得的色谱图，可见它们都在1.1min有色谱峰出现。一级全扫描供试品相应位置的峰，所得的质谱图与对照品的一样，可见供试品中的确有对乙酰氨基酚存在。
4 讨论
4.1 所选化学药品
本文所选的化学药品9种具有的作用都和清热解毒类中成药相似，而且较便宜、不法厂商很可能会对其进行非法添加。本文利用同一方法检测9种化学药品，可以使此类掺伪检出更方便快捷。
4.2 所选色谱条件
本文分别比较了等度洗脱以及梯度洗脱。通过这2种方式都能完全分离化学药品，但后者的分析时间更短、柱效更高、灵敏度也更高[4-5]。本文还考察了在分离时柱温的影响，即柱温比40℃小时，无法完全分开对照品8和9，所以将柱温最终定为40℃。
本文选择了220～280nm波长内的检测波长。为了兼顾含量不高药物(布洛芬和双氯芬酸钠)的基线平稳和检测灵敏度，将检测波长定为230nm。
4.3 对照品混合溶液的稳定性
因为在对照品混合溶液中，阿司匹林并不稳定，所以需要先进行对照品贮备液的配制，临用时才混合进样。如果需要定量，则要单独对阿司匹林对照品进行进样，以确保准确性。
5 结语
为了避免化学药品的非法添加，进一步提升中成药质量，将中药推向世界，则需要重点研究中成药的非法添加检测。而本文中的HPLC法能够针对用于清热解毒的中成药，同时检测9种非法添加化学药品。该法方法简单易操作、重复性好，能更简单、更系统地检出中成药掺伪。
参考文献
[1]徐硕,金鹏飞,徐巧玲,吕晓川,何笑荣.中药及保健品中非法添加化学药物的研究进展[J].中国新药杂志,2015,24(16):1843-1850.
[2]郭艳娟.中成药非法添加化学药物研究进展[J].天津药学,2014,26(04):52-55.
[3]安晓敏.中药感冒药中非法添加物检测方法的研究[D].河南中医学院,2014.
[4]何琳,王凌.色谱技术在检测中成药和保健食品中非法添加化学物质的应用研究进展[J].安徽医药,2011,15(10):1306-1309.
[5]洪卓安.探讨以某咳宁胶囊为阳性对照检验中成药品中非法添加化学药品的方法[J].广东科技,2010,19(04):76-77.
论文作者:吴丽琦
论文发表刊物:《科技新时代》2018年11期
论文发表时间:2019/1/11
标签：化学药品论文; 中成药论文; 色谱论文; 溶液论文; 清热解毒论文; 波长论文; 氨基论文; 《科技新时代》2018年11期论文;