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【摘要】 目的：通过测定金银花中主要特征成分绿原酸含量评价金银花品质。方法：高效液相色谱法。采用C185柱（250mm×4.6mm），流动相为乙腈-1.0%冰醋酸溶液，0.45μm滤膜抽滤，流速为1.0ml/min，检测波长为242nm。结果：绿原酸进样量在0.2～1.0μg范围内与峰面积线性关系良好，精密度RSD为1.13%，平均回收率为101.2%。结论：高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量操作简便，结果准确，可用于对金银花品质的评价。
【关键词】高效液相色谱法；金银花；绿原酸；含量；测定
【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）06-0374-02
金银花具有清热解毒之功效，绿原酸是其中的主要特征成分，而且也是目前所发现的金银花中药理活性最强的物质。绿原酸是植物进行有氧呼吸过程中产生的苯丙素类化合物，经现代药理研究证实，这种化合物不仅能够抗病毒，而且可以止血、利肝利胆、抗氧化。因此，绿原酸含量是金银花品质评定的重要依据。通过提取绿原酸，并测定绿原酸含量，将为金银花药物开发与利用提供支持。本文将探讨采用高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸含量。
1．材料与方法
1.1 材料与仪器
材料：将采摘的金银花放置阴凉处，直至质量稳定。使用粉碎机将金银花粉碎，过40目筛，以备试验使用。
试剂：绿原酸对照品（批号110753-200413）由中国药品生物制品检定所提供；水为纯化水；乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
仪器：采用美国安捷伦公司生产的全自动液相色谱仪系统Aligent1100（四元梯度洗脱泵、二极管检测器、温柱箱等）；昆山市超声波仪器有限公司生产的超声波清洗器；梅特勒-托利多仪器上海有限公司生产的电子分析天平。
1.2 试验方法
1.2.1试样制备 将金银花粉末精确称取1.0g，放置在100ml量瓶中，加入50%甲醇10ml，放入超声清洗器中震荡，进行减压过滤，然后将滤液放置在25ml量瓶中定容。精确量取1ml定容液，加入50%甲醇，定容至10ml，经过0.45μm微孔滤膜后，将续滤液作为样品溶液。
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1.2.2对照品制备 精确称取绿原酸对照品10mg，使用50%甲醇定容至10ml量瓶，量瓶应选择棕色瓶，制备成1ml含1mg绿原酸的溶液，然后从中精确量取1ml溶液，放置在10ml棕色量瓶中，再用50%甲醇定容，得到对照品溶液，浓度为0.1mg/ml。
1.2.3色谱条件 色谱条件为C185（250mm×4.6mm）；流动相：乙腈-1.0%冰醋酸溶液，使用前以0.45μm滤膜抽滤；柱温25℃；检测波长242nm。
1.2.4样品测定 分别将绿原酸对照品溶液精确吸取5μL、10μL、15μL、20μL、25μL，逐一放入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定。
2．结果与分析
2.1 波长测定
将绿原酸对照品和供试品溶液在200～400nm范围内扫描，可见样品均在242nm处呈现最大吸收，测定检测波长为242nm。
2.2 线性关系
以绿原酸浓度作为纵坐标，以峰面积作为横坐标，进行线性回归分析，绘制标准曲线，得出回归方程为Y=30517.234X+4.433，r=0.9999，说明绿原酸进样量在0.2～1.0μg范围有较好的线性关系。
2.3 精密度试验
按照上述色谱条件，精确吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测定绿原酸峰面积，RSD值为1.13%，说明精密度较高。
2.4 稳定性试验
取同一批供试品溶液，分别在0h、2h、4h、8h、12h进样，测定绿原酸峰面积，结果显示稳定，RSD值为1.09%。
2.5 重复性试验
取同一批样品，按照上述方法制成5份供试品溶液，继续按照以上方法测定绿原酸含量的RSD，结果为1.10%，说明该方法测定成分含量的重复性较好。
2.6 回收率试验
取已知含量的金银花粉末，加入绿原酸对照品，制成供试品溶液，精确称取续滤液，分别放入9个棕色量瓶中，每3份为1组，进样测定，计算平均回收率为101.2%，RSD为1.08%（n=9）。
2.7 样品测定
分别选取3个不同批次的样品，按照供试品溶液制备方法制备，取供试品和对照品溶液，进样10μL，以峰面积计算绿原酸百分比含量，共进行3次试验，根据回归方程，得出绿原酸质量，最后计算出3个批次样品中绿原酸在金银花中的含量分别为2.49%、2.61%、2.53%。
3．讨论
金银花是常用的中药材之一，中国药典中指出绿原酸、异绿原酸、黄酮类化合物等是金银花的主要成分，金银花具有抗病毒、抗肿瘤的作用[1]，临床常用于呼吸、消化、生殖系统的治疗。金银花中绿原酸含量较高，绿原酸也是金银花中最具活性的成分之一，通过测定绿原酸含量可作为金银花品质的评价依据，金银花药材来源为干燥或初开的花蕾[2]。
中药质量的稳定均一性难以保证一直是中药现代化的障碍，实现中药质量控制的在线化将有效改变这一现状。由于金银花中绿原酸含量与其产地有着紧密关联，不同地区所产金银花品质有所区别。因此，对绿原酸含量的测定直接关系到中药原料的品质。根据绿原酸稳定性差的特点，其贮备液需在10℃以下保存，并使用棕色玻璃瓶。如果检测发现不同批次样品中绿原酸含量差异明显，说明生产过程中投料控制不严或是金银花产地、品质不同。采用紫外分光光度法检测绿原酸在金银花中的含量，试验过程虽然简单，但结果不够准确。本研究采用高效液相色谱法测定金银花中绿原酸含量，试验过程操作简便，试验结果准确，可作为金银花质量控制的重要参考。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[J].北京：化学工业出版社，2005：152-153．
[2] 肖文平，李娟.金银花中绿原酸的提取和含量测定[J].安徽农业科学，2011，39（35）,21675-21676，21694.
论文作者:高旭江,夏芸
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第6期供稿
论文发表时间:2015/6/29
标签：含量论文; 溶液论文; 色谱论文; 样品论文; 滤膜论文; 高效论文; 精确论文; 《医药前沿》2015年第6期供稿论文;