（贵州省毕节市食品药品检验所 贵州 毕节 551700）
【摘要】 目的：建立测定喘嗽宁片中苦杏仁苷含量的高效液相色谱法。方法：用Diamonsil C18（5μm，200×4.6mm）色谱柱，流动相为甲醇-水（20:80），检测波长为218nm，流速1.0mL/min。结果：苦杏仁苷进样量在0.06016～0.96256μg(r=1.0000)范围内与峰面积积分值具有良好线性关系,平均回收率为99.1%，RSD为1.2%（n=6）。结论：该方法专属性强、灵敏、操作简便，可用于喘嗽宁片中苦杏仁苷的含量测定。
【关键词】喘嗽宁片；苦杏仁苷；高效液相色谱法；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）19-0377-02
喘嗽宁片[1]由白果100g、苦杏仁160g、地龙160g、桑白皮160g、陈皮160g、黄芩160g、白前160g、苦参160g、甘草160g、茯苓270g等组成，具有清热平喘，止咳化痰的功效，用于支气管哮喘，喘息型支气管炎，肺气肿，肺心病早期。原质量标准[1]中，对主药苦杏仁既无定性也无定量分析。为确保该制剂的疗效，更好地控制其质量，本试验以高效液相色谱法（HPLC）测定苦杏仁的有效成分苦杏仁苷的含量，现报道如下。
1.仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1260型高效液相色谱仪（四元泵、柱温箱、DAD二极管阵列检测器、自动进样器）及色谱数据工作站；AY120型电子天平（SHIMADZU，感量0.1mg)；MSE3.6p-0CE-DM型电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司，感量0.001mg]；洁康PS-100超声波清洗器。
1.2 试药
苦杏仁苷对照品（中国食品药品检定研究院,批号: 110820-201305，含量：85.8%）；喘嗽宁片同一生产厂家3个批号：120904、130601、130602；甲醇为色谱纯, 水为重蒸馏水；其余试剂为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
Diamonsil C18（5μm，200×4.6mm）色谱柱。流动相：甲醇-水（20∶80）；检测波长：218nm；流速为1.0mL/min；进样量：10μL；柱温30℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取苦杏仁苷对照品14.608mg, 置50mL量瓶中，加甲醇约30mL，超声5分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含苦杏仁苷0.2507mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液3mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含0.03008mg苦杏仁苷的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方制备工艺以十分之一的处方量制得不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.4 色谱行为与系统适应性实验
分别取2.2与2.3项下制备的对照品、供试品、阴性对照溶液，按照2.1项下的色谱条件进样，如图1所示，阴性对照溶液无干扰。理论板数按苦杏仁苷峰计算不低于7000[2]。
2.5 线性关系考察
分别精密吸取2.2项下对照品溶液（0.03008mg/mL）2,4,8,16,32μL，按2.1项下的色谱条件进样，测定苦杏仁苷峰面积，以峰面积积分值（A）作为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=5.4773×102X-1.6833，r=1.0000，结果表明苦杏仁苷进样量在0.06016～0.96256μg范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。
2.6 稳定性实验
将2.3项下的供试品溶液室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12小时测定，记录峰面积，结果RSD为：0.5%（n=7），可见供试品溶液在室温下12小时内稳定。
2.7 精密度实验
精密量取2.2对照品溶液，按2.1色谱条件重复进样6次，记录峰面积，RSD为1.1%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.8 重复性实验
取同一批号（130601）的样品6份，按供试品溶液制备方法及试验条件测定，结果苦杏仁苷平均含量为4.87mg/g，RSD为0.8%（n=6），表明本法重复性良好。
2.9 加样回收率实验
取已知含量的样品（4.87mg/g，批号：130601）六份，分别为0.2686g、0.2638g、0.2677g、0.2613g、0.2604g、0.2567g。按照2.3项下制备，至“置具塞锥形瓶中”该步骤，分别精密加入对照品贮备液5mL，再精密加入甲醇20mL，从“称定重量，加热回流30分钟”开始，同法处理即得。按2.1色谱条件进样。记录色谱图，计算回收率，结果见表1。
2.10 样品含量的测定
取3个批号（120904,130601,130602）的样品，按供试品溶液制备方法及试验条件测定，结果苦杏仁苷平均含量分别为4.04，4.87，4.73mg/g。
3.讨论
3.1 苦杏仁具有降气、止咳、平喘的功效，用于咳嗽气喘，胸满痰多[2]，是喘嗽宁片中的主药之一。为控制该制剂的质量，确保其疗效，故研究其中苦杏仁苷的含量测定方法。
3.2 文献[2-5]中报道了苦杏仁苷的3种提取方法和4种提取溶剂的比较，本试验过程中，就供试品的提取方法和提取溶剂进行了比对，发现超声处理30分钟的提取率约只有加热回流30分钟的80%（由于喘嗽宁片的制备工艺是水煎煮提取，成药中油脂成分少，而先索氏提取去油脂再加热回流提取的方法相对前两种繁琐，所以未比较此提取方法），而甲醇的提取率优于乙醇、70%乙醇和50%甲醇，且杂质较少，易于过滤。最后比较了以甲醇为溶剂分别加热回流提取10、20、30、40分钟，得知加热回流30分钟供试品中苦杏仁苷含量不再增加，故确定此方法来提取供试品。
3.3 文献[2-5]中报道了3种流动相，分别是乙腈-0.1％磷酸溶液(8:92)、甲醇-0.1％磷酸溶液(20:80)和甲醇-水(20:80)。本试验中进行了比较，以甲醇-水(20：80)为流动相时，苦杏仁苷峰理论板数高，分离良好，出峰时间适宜，且易于配制，故选其作为流动相。
3.4 文献[2][4][5]中报道，可以207、218nm作为苦杏仁苷的测定波长，本试验在207nm波长下，阴性对照溶液的苦杏仁苷峰附近有干扰，而在218nm却无干扰，且样品溶液中苦杏仁苷峰分离良好，所以选218nm作为测定波长。
3.5 本试验中，对比了供试品溶液不同的提取方法、提取溶剂、提取时间和色谱条件，结果表明此方法提取简单、完全、专属性强，可作为喘嗽宁片中苦杏仁苷的含量测定方法。
【参考文献】
[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂[M]．第十九册，1998．205．
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国中国药典(一部)[S].北京，2010:187-188．
[3]杨慈海,刘冬梅,钟戈锐.高效液相色谱法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷含量[J].中国药业, 2015,24(9):51-52．
[4]邓祖磊,宋雅彤.高效液相色谱法测定止咳宁嗽胶囊中苦杏仁苷含量[J].中国药业, 2013,22(2):19-20．
[5]李 翔,刘皈阳,马建丽,等.HPLC法测定克咳胶囊中苦杏仁苷含量[J].中国药师,2013,16(7):1010-1011．
图1
*
论文作者:吴朦俊,肖英
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第19期
论文发表时间:2016/7/27
标签：苦杏仁论文; 溶液论文; 色谱论文; 甲醇论文; 精密论文; 含量论文; 高效论文; 《医药前沿》2016年7月第19期论文;