于文强, 孙秉中, 柴玉波, 赵忠良, 刘雪松[1]2003年在《不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较》文中进行了进一步梳理目的 :通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较 ,力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物 .方法 :采用细胞生长曲线、形态学及NBT(硝基四氮唑蓝 )还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能 ;细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡 .结果 :叁价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,且具有时间剂量依赖性 ,而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用 .结论 :叁价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物 ,可以老药新用 ,有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病 .
于文强[2]2001年在《锑剂治疗早幼粒细胞白血病的基础与临床研究》文中指出急性早幼粒细胞白血病（APL）具有特征性的染色体t（15；17）易位，使位于15号染色体上的早幼粒细胞白血病基因（PML）和17号染色体上的维甲酸受体基因α（RARα）发生并置形成PML-RARα融合基因，它几乎存在于所有的APL细胞中，成为早幼粒细胞白血病特有的分子生物学标志。与野生型的RARα相比，PML-RARα具有不同的反式激活功能，这种显性负突变与APL细胞的恶性增殖和分化受阻有关。与其他类型的白血病相比，急性早幼粒细胞白血病具有独特的临床、细胞形态学、细胞遗传学及分子生物学特征，死亡率极高。 自1986年以来，全反式维甲酸被广泛用于急性早幼粒细胞白血病的临床治疗，完全缓解率高达85～90％，被认为是应用诱导分化剂治疗人类肿瘤的成功范例。然而由维甲酸治疗引起的白细胞过高、维甲酸综合征及快速发展的耐药性，依然严重影响患者的长期存活。1992年，哈尔滨医科大学开始应用砷剂治疗早幼粒细胞白血病，缓解率为70％左右。最为有意义的是砷剂能够克服维甲酸的耐药性，为早幼粒白血病的治疗再添曙光，Science杂志1996年为此专门作了题为“古老疗法，再放异彩”的报道。随后，上海第二医科大学的陈竺等研究证实砷剂能够诱导白血病细胞凋亡，从理论上阐明了砷剂治疗白血病的机 博士研究生 于义强O）导帅 孙秉中教授 陈苏民教授 一 理。砷剂，即中药砒霜，毒性较强，临床应用副作用较大，不仅可以引起发热、 皮疹、蛋白尿和末梢神经病变以及呕吐和痉挛性腹痛，而且可以发生致命性的脑 病，导致患者死亡。因此、寻找新的诱导剂治疗白血病一直是血液病研究的重 点和热点。 锑剂是临床上治疗黑热病和血吸虫病的有效药物，它主要与生物体内蛋白 质的琉基 （S）结合，影响细胞的结构和功能，与砷剂在体内的作用机理相 似。有意思的是锑与化学元素砷属于同族元素，具有相似的化学性质。这有力 的提示锑剂有可能成为替代砷剂治疗早幼粒细胞白血病的有效药物。本项目首 先证实锑剂能够有效地诱导早幼粒细胞白血病凋亡；然后利用基于PCR的改良 消减杂交技术，筛选和克隆了锑剂作用相关基因，通过对其中己知基因的分析 反证了锑剂对早幼粒细胞白血病的凋亡诱导作用；依照生物信息学知识，通过 序列对比分析，确定了与锑剂作用相关的新基因74条，己被国际权威的 GenBank收录；最后，根据锑剂作用的特点，制定了临床应用锑剂治疗早幼粒 细胞白血病的可行性方案。通过本课题的研究，我们认为锑剂有希望成为继维 甲酸、砷剂之后又一治疗早幼粒细胞白血病的新药，而且毒副作用较前二者均 少。具体的实验结果如下： l、锑剂能够特异性地诱导早幼粒细胞白血病凋亡。 在 0．5—2 oumoljL的浓度范围，叁氧化二锑能够明显抑制 APL细胞株 NB4 细胞的增殖，使NB4细胞活率降低，这种作用具有时间剂量依赖性；形态学变 化表现为倒置显微镜下细胞大小不等，胞浆内颗粒增多：＊－G染色可见细胞中空 泡增多，细胞皱缩，部分细胞己坏死，胞膜破裂，胞浆溢出；电镜下可见细胞 出现空泡变性，染色质固缩，边集，并有凋亡小体出现，有的细胞己坏死；与 正常 NB4细胞相比，Hoechst 33258染色后凋亡的 N’B4细胞出现染色明显不均 匀，细胞染色质局限化，密集，染色增强等典型的凋亡特征；细胞周期分析显1’．－7’——一’二—一．二T二二 一＿”一．二一二．厂－－＿．＿．－． 示典型的凋亡细胞群，Zumow锑剂作用48和96 ，J’时后，凋亡的NB4细胞数 分别达到18．8％和351％；NB 4细胞基因组DNA电泳可见明显的DN A降解， 形成典型“梯形”条带；West．BIM证明＊－2蛋白参与了锑剂对APL的凋亡诱丫 导作用；同样浓度的锑剂对HL－60． K562、Jurkat、Hela细胞没有作用。所有 这些均表明叁氧化二锑在一定的浓度下能够特异性地诱导早幼粒细胞白血病细 胞凋亡。 2、锑剂的化学价位能够影响其凋亡诱导作用的发挥。 叁氧化二锑、叁硫化二锑和酒石酸锑钾能够诱导早幼粒细胞白血病凋亡， 一 第四军医大学西京医院血液内科西安710032 4 锑剂治疗早幼粒细胞白血病的基础与临床研究 一 而五价锑剂葡萄糖酸锑钠对APL细胞没有作用。细胞生长曲线、形态学和细胞 周期分析均证明了这一点。 3、锑剂、砷剂和维甲酸对早幼粒细胞白血病作用机制不同。 锑剂砷剂和维甲酸均能诱导APL细胞凋亡，但程度不同，锑剂、砷剂主要 诱导APL细胞凋亡，而维甲
兰勇飞[3]2017年在《锑剂治疗急性早幼粒细胞白血病的优势作用研究》文中认为目的：1)研究锑剂在治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)中的作用,探究锑剂对急性早幼粒细胞白血病相关蛋白的影响,进而证明锑剂具有治疗APL作用。2)通过探讨锑剂对PML突变体(例如A216V和L218P；砷剂耐药性突变体)的降解作用,发现具有更强降解PML突变体的锑化合物。方法：常规培养急性早幼粒细胞白血病NB4细胞后,使用叁氧化二锑(简称锑剂)或砷剂(阳性对照)暴露NB4细胞,通过MTT法,瑞氏-吉姆萨染料染色,流式细胞术,Western Blot,免疫荧光等方法检测NB4细胞的增值抑制,分化、凋亡等指标变化。使用免疫荧光法检测锑剂对核小体形成的影响。利用HEK293T或HeLa细胞,转染Flag-PML或Flag-PML-RARa基因,过表达PML或PML-RARa融合蛋白,研究锑剂(或砷剂)对PML蛋白的溶性改变和降解作用。主要以RIPA buffer和LDS buffer分别提取可溶上清蛋白(RIPA可溶部分)和不溶沉淀蛋白(RIPA不可溶部分)。使用Western Blot法分别检测PML和PML-RARa融合蛋白在RIPA可溶和不溶部分中的变化和后修饰变化。结果：1)锑剂对NB4细胞的作用结果；MTT和流式细胞术结果显示,锑剂的细胞毒性明显弱于砷剂,而且锑剂有较强的诱导NB4细胞CD11b的表达(早有粒细胞分化标志蛋白)。同时,还发现锑剂可使NB细胞核形态变化,证明锑剂具有较强的诱导NB4细胞分化作用。随着锑剂暴露浓度的增加,胞形态出现了凋亡的特征,证明锑剂具有一定的诱导细胞凋亡的作用。Western Blot和免疫荧光共聚焦结果显示,锑剂同样可导致PML-RARa融合蛋白的溶性发生改变,最终降解其蛋白融合蛋白；而且出现大颗粒状的PML核小体,并且与SUMO-1共定位于细胞核,提示锑剂可促使PML-RARα融合蛋白进入PML核小体,进而促进融合蛋白的降解,其作用类似于砷剂。2)锑剂对PML或PML-RARa过表达293T细胞体系实验结果；分别用不同浓度的锑剂或不同时间处理PML和PML-RARa过表达293T细胞,锑剂同样能够改变PML或PML-RARa融合蛋白的溶性改变,与NB4细胞实验结果相吻合。3)锑剂和PSO(锑化合物)对PML突变体的作用结果；锑剂和砷剂都无法诱导PML突变体(A216V或L218P)的溶性改变或降解,而新型锑化合物PSO具有较强的诱导PML突变体的溶性发生改变。结论：锑剂具有类似于砷剂诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的分化的作用,并且锑剂的细胞毒性远低于比砷剂。进一步证明锑剂同样能够诱导PML和PML-RARα融合蛋白的溶性改变和降解其融合蛋白。锑剂和砷剂对PML突变体无作用,而新型锑化合物PSO具有较强的诱导砷剂耐药型PML突变蛋白降解,从而证明锑剂作用的广泛性。
于文强, 孙秉中, 柴玉波, 赵忠良, 刘雪松[4]2002年在《叁氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究》文中进行了进一步梳理目的 研究锑剂叁氧化二锑 (Sb2 O3 )对早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的诱导作用 ,以寻求早幼粒细胞白血病治疗的新方法。方法 采用细胞生长曲线、形态学及硝基四氮唑蓝 (NBT)还原试验 ,判定NB4细胞的生长、分化及功能。采用细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果Sb2 O3 能诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,且具有时间、剂量依赖性。结论 Sb2 O3 能有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡 ,提示锑剂诱导细胞凋亡的疗法 ,有望成为临床治疗早幼粒细胞白血病的新方法
何志洁[5]2007年在《叁氯化锑对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究》文中进行了进一步梳理目前,诱发细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的新思路。近年来,我国学者利用砷剂对白血病细胞凋亡原理治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有关研究取得了重大进展,叁氧化二砷以及复方青黛片(主要成分为四硫化四砷)对APL治疗均有较高完全缓解率[1-2],因此细胞凋亡已成为白血病治疗的新思路,锑剂可用于黑热病的治疗[3],
杨丽萍[6]2007年在《叁氧化二锑对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖抑制的研究》文中研究表明目的:卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁妇女的健康。由于缺乏有效的早期诊断的方法,70%的卵巢癌患者被发现时已是晚期,卵巢癌也是死亡率最高的妇科恶性肿瘤。其主要的死亡原因在于复发和包括顺铂在内的化疗药耐药,在现有的治疗手段下五年存活率未见明显增高,且长期化疗导致病人耐药或毒副作用的发生。因此,寻找新的更有效的药物以进一步提高卵巢癌患者的生存时间和生活质量是非常必要的。锑剂应用于人类,历史悠久,主要用于治疗寄生虫病。上世纪60年代初期进行筛选合成抗癌化合物时发现数种锑类化合物有抗癌活性。但一直未进行深入的研究。近年来关于锑类化合物的抗癌活性重新引起人们的重视。有关学者研究发现微摩尔浓度的锑剂(叁氧化二锑)能显着抑制白血病细胞、恶性淋巴细胞生长,而对正常的淋巴细胞无影响,其机理为诱导细胞凋亡。于文强等通过研究不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较发现叁价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡,提示Sb2O3等叁价锑剂在未来的抗癌作用方面有广阔的应用前景。本试验用叁氧化二锑作用于体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3,观察其对卵巢癌细胞株增殖和凋亡的影响,初步探讨叁氧化二锑的作用效果,为其用于卵巢癌的治疗提供实验及理论依据。方法:1叁氧化二锑溶液的配制叁氧化二锑溶于稀盐酸中制成1.1mmol/L的贮备液,4℃闭光保存。临用前搅拌至少30min,以含10%FBS RPMI1640培养基分别稀释至25~6.25μmol/L,保存叁氧化二锑最多不超过3天。2细胞培养将处于对数生长期的卵巢癌细胞株SKOV3按照相应的浓度加入96孔板培养板于5%CO2、97%湿度、37℃的培养箱中培养24h后,设置空白对照组、高、中、低浓度组,每组加入等量培养液、不同浓度的叁氧化二锑溶液。分别培养24、48、72h。3细胞形态学观察倒置显微镜、Giemsa染色和透射电镜观察细胞形态学变化。4 DNA Ladder测定提取细胞DNA,用1.5%琼脂糖凝胶电泳进一步检测肿瘤细胞发生的DNA降解。5流式细胞分析采用流式细胞仪定量分析经不同浓度叁氧化二锑作用于卵巢癌细胞的凋亡率及其细胞周期特异性和蛋白bcl-2、bax的表达情况。结果:1采用MTT法检测细胞增殖抑制率,描绘生长柱状图可知经不同浓度叁氧化二锑处理后的SKOV3细胞生长缓慢,明显的生长抑制,并呈作用浓度和时间依赖性。而空白对照组细胞则生长正常2细胞形态学观察倒置相差显微镜观察,对照组细胞生长良好,细胞透明,密度较大,呈复层性生长,细胞呈梭形,胞质内颗粒较少,细胞核隐约可见。实验组细胞密度明显减少,细胞颗粒较多,细胞间隙模糊,飘浮细胞数量增加,存活细胞显着减少。经Giemsa染色后进行光镜观察,可见到细胞形态也出现明显的改变。对照组细胞形态饱满,细胞核染色均匀,核仁清晰可见;实验组细胞中出现细胞质浓缩,变圆,核仁染色不均,核染色质边聚,但未见凋亡小体。提示实验组细胞出现凋亡的形态学改变。透射电镜观察到空白对照组和不同浓度叁氧化二锑对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的超微结构形态学改变分别如下:空白对照组的正常肿瘤细胞形态:细胞形态呈多边形,核质比例失调,核大不规则,常染色质丰富异染色质少,核中央有一大而圆的核仁,细胞质内可见线粒体、粗面内质网,细胞表面的微绒毛减少;低浓度叁氧化二锑实验组的凋亡肿瘤细胞形态为细胞形态更加不规则,细胞膜皱缩,线粒体嵴部分融合或消失,粗面内质网扩张,有颗粒融合或脱颗粒现象,核膜局部向外突起,核染色质浓缩,体积缩小,电子密度增加,边聚于核膜下,厚薄不均,有的形成半月;中浓度叁氧化二锑实验组的凋亡肿瘤细胞形态除上述表现外,同时出现核浓缩,体积缩小,电子密度增高,部分核膜破碎形成核碎片;高浓度叁氧化二锑实验组的凋亡肿瘤细胞形态为部分核膜外层溶解、消失,线粒体嵴大部分融合消失,粗面内质网脱颗粒现象严重,核碎裂呈两大片,但未见典型的凋亡小体。提示叁氧化二锑对人卵巢癌SKOV3细胞有一定的诱导凋亡作用,且随着药物浓度的增大,细胞凋亡的形态学改变越明显。3细胞增殖抑制实验采用MTT法检测细胞增殖抑制情况。4 DNA Ladder测定提取对照组和实验组细胞DNA,经1.5%琼脂糖凝胶电泳显示实验组细胞DNA出现凋亡的特征性改变,即DNA呈梯度样降解并随作用浓度的增大,梯度样条带逐渐明显。而对照组细胞未出现凋亡的特征性改变。5细胞凋亡率变化流式细胞仪检测表明与对照组相比,不同浓度叁氧化二锑实验组细胞凋亡率升高明显(P<0.01),细胞周期的改变实验组细胞与对照组细胞相比随着药物浓度的增加,G0/G1期和S期细胞逐渐减少(P<0.01),而G2/M期细胞逐渐增加(P<0.01)。6 bcl-2与bax蛋白表达量经不同浓度的叁氧化二锑作用48h后,bcl-2蛋白表达量减少,bax蛋白表达量增加(P<0.01)。结论:1叁氧化二锑能抑制体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞的生长,并呈时间和剂量依赖性。2叁氧化二锑能诱导SKOV3细胞凋亡,诱导凋亡可能为其抑制细胞生长的机制之一。3细胞凋亡可能与下调bcl-2蛋白的表达,上调bax蛋白表达有关,这可能是其诱导SKOV3细胞凋亡的途径之一。4本研究为今后的实验和临床研究提供了初步的理论依据,同时表明叁氧化二锑在治疗卵巢癌方面有一定的应用前景。
郭光云[7]2004年在《酒石酸锑钾诱导胃癌细胞凋亡的研究》文中研究表明目的 探讨酒石酸锑钾(Potassium antimonyl tartrate，PAT)对人胃癌SGC-7901细胞株的作用及其机制，为PAT用于胃癌的临床治疗提供实验及理论依据。 方法 以体外培养的SGC-7901细胞为研究对象。应用MTT法检测不同浓度PAT对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用；用Hoechst 33 258染色荧光显微镜观察细胞核的形态变化、DNA末端原位标记染色法、AnnexinV／PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡；用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因蛋白的表达。所有数据应用SPSS10.0统计软件包进行统计分析，检验方法采用方差分析和t检验。 结果 5，10，20，40μmol／L PAT作用于SGC-7901细胞24～72 h后，细胞生长受到明显抑制，抑制作用呈时间和剂量依赖性(P＜0.01)。PAT作用72 h后SGC-7901细胞的生长抑制率分别为19.5％，38.4％，54.1％，66.6％；Hoechst 33 258染色后荧光显微镜观察对照组细胞所发荧光较弱，较均匀，而经PAT作用后的SGC-7901细胞核明显变小、固缩，并可见致密强荧光；AnnexinV-FITC／PI染色流式细胞仪检测可见，对照组细胞主要分布于第叁象限(AnnexinV-PI-)，PAT处理后第四象限细胞(AnnexinV+PI-)增加，代表早期凋亡细胞。经5，10，20μmol／LPAT处理24 h细胞凋亡率为3.4％，8.19％，12.9％，随着作用浓度增大，凋亡细胞的百分率也随着增加(P＜0.01)；TUNEL染色法观察到细胞核呈棕色着染的凋亡细胞，细胞凋亡指数随药物浓度增大而增加(P＜0.01)。5，10，20μmol／L PAT作用48 h后，Bax蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达减少(P＜0.05)。 结果 PAT能抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并诱导其凋亡，其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达有关。PAT有望作为一种新的凋亡诱导剂用于胃癌的治疗。
曾明, 张才云, 路嘉宏, 武红叶, 关岚[8]2005年在《叁氧化二锑对骨髓瘤细胞株KM3杀伤作用的实验研究》文中认为目的 研究叁氧化二锑 (Sb2 O3 )对骨髓瘤细胞株KM3的杀伤作用 ,为Sb2 O3 的抗癌作用提供理论依据。方法 采用台盼蓝拒染法、细胞培养液中骨髓瘤细胞释放的乳酸脱氢酶 (LDH)的检测和苏木素伊红染色法检查判别细胞活性和细胞形态学改变。结果 Sb2 O3 能显着抑制骨髓瘤细胞株KM3的活性 ,细胞存活率与Sb2 O3 的处理浓度呈负相关 (r =-0 92 1,P <0 0 1) ,并随着作用时间的延长细胞存活率降低 ;LDH与对照组有显着性差异 (P <0 0 1) ;Sb2 O3 处理可导致明显的细胞病理形态学改变。结论 Sb2 O3对骨髓瘤细胞株KM3有明显的杀伤作用 ,为Sb2 O3 等锑剂的抗癌性提供了新的依据。
佚名[9]2003年在《作者索引》文中认为第四军医大学学报(J Fourth Milit Med Unsv)2003年24卷索引AAdrian T.TINGB细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-KB的活化(19):1729一1732CClaus H.Schroder慢性乙肝病毒感染的诊断和治疗
吕文琼, 舒逸, 杨碧洁, 张航, 张佳[10]2019年在《造血干细胞Hdac3基因促进鼠淋巴细胞分化》文中提出目的 建立造血干细胞特异性Hdac3条件性敲除小鼠模型,探讨Hdac3基因对小鼠造血发育的影响。方法 Hdac3~(fl/fl)小鼠与Mx1-Cre小鼠杂交获得Hdac3~(fl/fl)Mx1-Cre小鼠,PCR鉴定小鼠基因型。连续注射poly(I:C),诱导Cre表达,得到造血干细胞Hdac3敲除鼠Hdac3~(fl/fl)Mx1-Cre~+(CKO)及对照组小鼠Hdac3~(+/+)Mx1-Cre~+(WT),Q-PCR分析Hdac3 mRNA表达水平。流式细胞术检测小鼠外周血淋巴细胞数量及比例。HE染色观察小鼠胸腺、脾脏形态学改变。流式细胞术检测小鼠外周血CD3~+、B220~+细胞比例。克隆形成实验分析小鼠造血干/祖(LSK)细胞的分化能力。结果 成功建立造血干细胞Hdac3~(fl/fl)Mx1-Cre~+(CKO)小鼠模型。与对照组相比,CKO小鼠外周血淋巴细胞绝对数量(P<0.001)及比例(P<0.01)均显着降低;细胞亚群分析显示,CKO小鼠外周血CD3~+淋巴细胞及B220~+淋巴细胞显着减少(P<0.01,P<0.001),CD11b~+髓系细胞比例显着增加(P<0.01)。HE染色结果显示,实验组鼠胸腺和脾淋巴细胞数减少。克隆形成实验显示,实验组小鼠粒系克隆数无差异,前B细胞样克隆缺失。结论 造血干细胞中Hdac3基因促进造血干细胞向淋巴细胞分化。
参考文献：
[1]. 不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较[J]. 于文强, 孙秉中, 柴玉波, 赵忠良, 刘雪松. 第四军医大学学报. 2003
[2]. 锑剂治疗早幼粒细胞白血病的基础与临床研究[D]. 于文强. 第四军医大学. 2001
[3]. 锑剂治疗急性早幼粒细胞白血病的优势作用研究[D]. 兰勇飞. 浙江大学. 2017
[4]. 叁氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究[J]. 于文强, 孙秉中, 柴玉波, 赵忠良, 刘雪松. 细胞与分子免疫学杂志. 2002
[5]. 叁氯化锑对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究[J]. 何志洁. 南京医科大学学报(自然科学版). 2007
[6]. 叁氧化二锑对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖抑制的研究[D]. 杨丽萍. 河北医科大学. 2007
[7]. 酒石酸锑钾诱导胃癌细胞凋亡的研究[D]. 郭光云. 武汉大学. 2004
[8]. 叁氧化二锑对骨髓瘤细胞株KM3杀伤作用的实验研究[J]. 曾明, 张才云, 路嘉宏, 武红叶, 关岚. 中国医师杂志. 2005
[9]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2003
[10]. 造血干细胞Hdac3基因促进鼠淋巴细胞分化[J]. 吕文琼, 舒逸, 杨碧洁, 张航, 张佳. 第叁军医大学学报. 2019
标签：肿瘤学论文; 粒细胞论文; 白血病论文; 细胞凋亡论文; 形态学论文; 对照组论文; 急性早幼粒细胞白血病论文; 氧化锑论文; dna提取论文; 癌症论文;