（辽宁省肿瘤医院肿瘤内科，辽宁 沈阳 110042）
中图分类号 R735 文献标志码 A 文章编号 1008-0408（2015）2-0074-02
摘 要 目的：探讨VEGFR2和MMP-2在胃癌组织中的表达，分析二者与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测VEGFR2和MMP-2蛋白在90例胃癌及配对癌旁正常组织中的表达情况。结果: VEGFR2蛋白在胃癌组织(23.3%, 21/90)中的阳性表达率显著低于正常胃黏膜(87.8％, 79/90)，P<0.001。MMP-2蛋白在胃癌组织(81.1%, 73/90)中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜(24.4％, 22/90)，P<0.001。VEGFR2在胃癌组织中的表达与胃癌的组织学分型、浸润深度及淋巴结转移密切相关，P<0.05。MMP-2在胃癌组织中的表达与胃癌浸润深度及淋巴结相关，P<0.05。VEGFR2与MMP-2蛋白表达均与胃癌患者的性别、年龄及肿瘤大小无显著关联，P>0.05。在90例胃癌组织中VEGFR2与MMP-2蛋白表达呈显著负相关,（rk=-0.472，P<0.001）。结论：VEGFR2的失活及MMP-2的过表达可能在胃癌的发生、发展中起着重要作用。
关键词 胃癌；窖蛋白-1；基质金属蛋白酶-2
胃癌是一种常见的恶性肿瘤，因其早期诊断率低，进展期治疗效果不佳，一直严重威胁着人类的生命健康。胃癌的发生、发展是一个多因素、多步骤、多基因参与的复杂病理过程，此过程中，有癌基因的突变和活化、抑癌基因的丢失或表达失调以及凋亡调节机制紊乱等遗传学改变[1]。因此，寻找与胃癌的发生、发展相关的基因并解释它们之间的联系，将有助于阐明胃癌的发生机制, 为阻断胃癌的发生发展过程提供理论依据和分子靶位。
窖蛋白(caveolin)是分子量为21～24kD 的整合膜蛋白，是胞膜窖(caveolae)的标志性结构分子。窖蛋白-1(VEGFR2，VEGFR2)是其成员之一，研究发现VEGFR2可以通过与多种转录因子相互作用，调节相关基因的表达而抑制肿瘤发生，因此被认为是一个候选的抑癌基因[2-3]。基质金属蛋白酶（MMPs）是一类高度保守的依赖锌离子的内切蛋白水解酶家族，能够降解细胞外基质，促进肿瘤细胞突破基底膜和细胞外基质构成的屏障，侵袭周围组织[4]。MMP-2是MMPs家族重要成员，研究发现MMP-2过表达与人类多种恶性肿瘤的侵袭转移潜能及预后密切相关[4,5]。本研究应用免疫组化方法分别对胃癌及其配对正常胃组织中VEGFR2和 MMP-2 的表达进行检测，分析两者在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源与收集
收集辽宁省肿瘤医院2007年1月至2009年6月肿瘤外科手术切除的90例胃癌标本及其配对远癌正常胃黏膜。90例胃癌患者中，男54例，女36例，年龄28～79岁，中位年龄55岁。按分化程度分类，分化型 (乳头状腺癌及高、 中分化管状腺癌 )39例 ,未分化型 (低分化管状腺癌、 印戒细胞癌、 粘液腺癌及未分化癌 )51例。术后病理证实：侵及粘膜及粘膜下层27例，侵及肌层及浆膜层63例；有淋巴结转移59例，无淋巴结转移31例。标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，作4μm厚切片。所有患者术前均未接受放、化疗。
1.2 实验试剂
兔抗人VEGFR2多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，工作浓度1：300。鼠抗人MMP-2单克隆抗体（即用型），免疫组化检测试剂盒和DAB 显色试剂盒均购自福建迈新试剂公司。
1.3 实验方法及结果判定
采用免疫组织化学SP法检测VEGFR2及MMP-2在正常胃黏膜及胃癌组织中的表达。操作步骤依据产品说明书进行，每组实验均以0.01mol/LPBS 代替第一抗体作为阴性对照。VEGFR2与MMP-2均定位于细胞质内，二者均以出现清晰棕黄色颗粒为阳性细胞。采用双盲法对每张切片在高倍镜下计数10个视野，以染色强度分别计0～3分，无染色为0分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，再以阳性细胞所占有百分比评分，阴性为0分，阳性细胞≤25%为1分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，≥76%为4 分。两项得分相加，0分为“-”，1～2分为“+”，3～4分为“++”，5～6分为“+++”，0分为阴性，1～6分为阳性。
1.4 统计学分析
采用χ²检验和Spearman等级相关分析，采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理。P<0.05视为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 VEGFR2与MMP-2蛋白在正常胃黏膜及胃癌中的表达
VEGFR2与MMP-2蛋白阳性信号均分布在细胞浆中。VEGFR2蛋白在胃癌组织(23.3%, 21/90)中的阳性表达率显著低于正常胃黏膜(87.8％, 79/90)，P<0.001。MMP-2蛋白在胃癌组织(81.1%, 73/90)中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜(24.4％, 22/90)，P<0.001。见表1。
2.2 VEGFR2与MMP-2蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系
VEGFR2在胃癌组织中的表达与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关。VEGFR2蛋白在分化型（41.0%）、浸润粘膜层粘膜下层（44.4%）及无淋巴结转移胃癌组（45.2%）中表达的阳性率分别显著高于低分化型（9.8%）、浸润肌层浆膜层（14.3%）及伴淋巴结转移组（11.9%，P<0.05）。MMP-2在胃癌组织中的表达与胃癌浸润深度及淋巴结相关，其中MMP-2蛋白在浸润肌层浆膜层（88.9%）和伴淋巴结转移胃癌组（89.8%）中的阳性表达率分别显著高于其在浸润粘膜层粘膜下层（63.0%）和无淋巴结转移胃癌组中的阳性表达率（64.5%，P<0.05）。VEGFR2与MMP-2蛋白表达均与胃癌患者的性别、年龄及胃癌肿瘤大小无显著关联（P>0.05）。见表2。表2 VEGFR2与MMP-2蛋白表达与胃癌临床病理因素的关系
3 讨论
人VEGFR2基因定位于染色体7q31.1，VEGFR2蛋白由178个氨基酸组成，分子量21-24KD。VEGFR2是胞膜窖(caveolae)的主要结构成分，其不仅在维持胞膜窖的形态、结构和功能方面起重要作用，而且还具有其他多种生物学功能，如参与胞吞、胞内运输、胆固醇运输、脂类稳定。另外，VEGFR2尚能通过磷酸化/去磷酸化途径与多种信号分子相互作用，在肿瘤细胞增殖、侵袭转移和凋亡中发挥调控作用[2,3]，其在肿瘤研究中的重要价值也越来越受到学者们的关注。Gao等[6]采用组织微阵列技术在完全相同的实验条件下，研究发现VEGFR2在非癌粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌的演变过程中的表达呈下调趋势，而且VEGFR2在胃癌组织中的表达与Lauren分型及淋巴结转移相关。杨育生等[7]研究也发现VEGFR2在正常胃粘膜，不典型增生胃黏膜，胃癌组织中的阳性表达率依次降低，VEGFR2蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移及有无脉管侵犯组内的表达率有统计学差异。本研究结果与其相符，发现VEGFR2的阳性表达率在远癌正常胃黏膜中显著高于胃癌组织， VEGFR2蛋白在分化型、浸润粘膜层粘膜下层及无淋巴结转移胃癌组中表达的阳性率分别显著高于低分化型、浸润肌层浆膜层及伴淋巴结转移组，提示VEGFR2的表达下调可能参与了胃黏膜的癌变及胃癌进展过程，对VEGFR2进行深入研究有望在胃癌发生发展机制的研究中发挥作用。
MMP-2是MMPs家族的一个重要成员，相对分子质量为72KD，活化的MMP-2能水解细胞基底膜及细胞外基质中的Ⅳ型、Ⅴ型胶原和纤维连接蛋白成分，促使肿瘤细胞破坏基底膜屏障，促进肿瘤细胞侵袭生长和侵入小血管和淋巴管发生转移[4,5]。我们研究也发现MMP-2蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜，MMP-2在浸润肌层浆膜层和伴淋巴结转移胃癌组中的阳性表达率分别显著高于其在浸润粘膜层粘膜下层和无淋巴结转移胃癌组中的阳性表达率，提示MMP-2可能参与了胃癌的侵袭转移过程。
本研究发现在90例胃癌组织中VEGFR2与MMP-2蛋白表达呈负相关，与杨等的研究一致，提示VEGFR2的缺失与MMP-2过表达可协同参与了胃癌发生及侵袭转移的病理过程。
综上，VEGFR2和MMP-2可能在胃癌的发生及侵袭转移过程中发挥重要作用，二者有望成为胃癌临床预后判断中有价值的分子标志物。但二者与胃癌发生发展的确切关系，及其在此过程中的相互作用尚需进一步深入研究。
参考文献
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[6]Gao X, Sun Y, Huang L, et al. Down regulation of VEGFR2in gastric carcinoma and its clinical biological significance[J]. Ai Zheng, 2014, 24 (3) :311-316.
[7]杨育生, 刘斌, 邢传平, 等. 胃癌组织中VEGFR2，nm23及MMP-2的表达及其意义[J]. 世界华人消化杂志, 2014, 15(5) :1725-1730.
作者简介：
李远航（1973—？） 男 职称：副主任医师 博士 所在单位：辽宁省肿瘤医院肿瘤内科
白维君（1962—？） 女 职称：主任医师 博士 所在单位：辽宁省肿瘤医院肿瘤内科
张建国（1975—？） 男 职称：副主任医师 硕士 所在单位：辽宁省肿瘤医院肿瘤内科
论文作者:李远航（通讯作者）,白维君,张建国
论文发表刊物:《中国药房》2015年12月第26卷第S2期供稿
论文发表时间:2016/3/4
标签：胃癌论文; 淋巴结论文; 蛋白论文; 组织论文; 阳性论文; 粘膜论文; 肿瘤论文; 《中国药房》2015年12月第26卷第S2期供稿论文;