季香云[1]2003年在《白僵菌固体发酵及对蔬菜害虫毒力的研究》文中进行了进一步梳理本文以白僵菌菌株Bb98为试验菌株，进行了杀虫谱、工业化固体培养料、载体、碳源、氮源对白僵菌生长和毒力的影响及白僵菌与化学农药的相容性研究，以求克服白僵菌作为生物农药的弱点，并为白僵菌大规模工业化生产奠定基础。 试验应用菌株Bb98和新分离菌株Bb01和Bb02，进行了杀虫谱和杀虫效果比较试验，结果表明，白僵菌对鞘翅目、鳞翅目、同翅目昆虫均有防效，其防效大小依次为鳞翅目＞同翅目＞鞘翅目。防治效果大小依次为小菜蛾、菜青虫、斜纹夜蛾、萝卜蚜、印度谷螟幼虫和玉米象成虫。从家蚕回接分离的Bb01菌株对家蚕效果优于原菌株Bb98。此外试验还表明：白僵菌对菜青虫幼虫的存活、化蛹、羽化都有一定的影响。 白僵菌固体培养料筛选试验证明：在培养过程中液体培养基接种量以固体培养料的30％为最佳。并筛选出A、B和J叁个最佳配方，从叁类土样选择来看，塘泥土＞菜园土＞污泥土，且加入一定量的土成分有抗污染作用。试验还对培养方法进行了改进，证明袋装培养的产孢量高于瓶装培养，可能和通气条件有关。同时还简化了生产方法，便于推广应用。 在载体筛选试验中，测定混合物中孢子萌发率、产孢量和菌落生长速度。通过系统聚类和方差分析，筛选出麦麸、锯末、硅藻土3号、硅藻土2号适宜作为白僵菌载体。 在菌药相容性试验中，研究了辛硫磷等8种蔬菜上常用的高效低毒化学农药对白僵菌菌丝生长量和孢子萌发的影响，结果表明：8种农药对白僵菌的菌丝生长和孢子萌发都有不同程度的抑制作用，均表现为浓度越高，抑制作用越强，并呈直线相关。结合两者考虑辛硫磷、敌杀死、Bt、抑太保、敌敌畏5种农药可以在一定的浓度范围内和白僵菌混用，混用后防治效果还需要进一步研究。 本试验以SDAY为基础培养基，分别选用11种氮源和7种碳源及16个不同的C：N进行了试验，氮源试验中动物性氮源的产孢量和毒力高于植物性氮源，牛肉膏为最佳，但无机氮不能被很好的利用。碳源试验表明：单糖、双糖、多糖的利用率和对害虫的毒力均有差别，其中以葡萄糖为最佳，但乙醇不能很好的被利用。碳氮比试验中，比例相同的各配方，各个指标并没有呈现明显的规律性，它的影响应该取决于各个配方当中碳源和氮源的具体含量。相关性分析表明，产孢量和毒力的相关性明显高于菌丝生长量和毒力的相关性。在试验中可以发现，菌丝的生长量和菌株的产孢量不呈规律性相关，同一菌株的不同处理中产孢量和菌株毒力具有明显的相关性。
王圆圆[2]2013年在《球孢白僵菌分生孢子田间生存潜能及与常用药剂的相容性研究》文中提出蔬菜在饮食文化中扮演着重要角色，为了防治蔬菜上的病虫害，经常大量使用化学药剂，易造成化学农药残留超标，阻碍蔬菜产业的迅速发展。因此研究可以完全替代或与亚致死剂量化学药剂可以复配的微生物农药，以提高防效，降低害虫抗药性，对提高蔬菜品质和促进农业的可持续发展具有重要意义。本论文选取实验室保存的萌发率高、产孢量高、产酶量大、抗紫外能力强，并且杀虫谱广、防效持久的虫生真菌——球孢白僵菌BD-B015菌株，研究室内快速获得高孢粉的制备技术，测定分生孢子的田间生存潜能，同时筛选出对甘蓝蚜和小菜蛾的高效药剂并测定药剂与该菌株的相容性，以期为蔬菜害虫的绿色防控提供科学依据。主要研究结果如下：1.基于实验室内球孢白僵菌的研究和利用需要，本试验利用液固双相发酵技术对菌株进行繁育，明确了快速高效制备球孢白僵菌孢子粉的条件为：球孢白僵菌BD-B015在液体发酵液中培养24h后，以20%的接种量接于固体发酵料（麦麸：麦糠=5：1）中，采用塑料封口膜对培养容器封口，6d后对固体培养料进行干燥分离，即可制得含水量为5.63%、萌发率为97.22%、含孢量为2.05×1011/g的高孢粉。2.通过测定不同月份球孢白僵菌BD-B015孢子粉在室内避光处、田间阳光直射处和田间遮阳处的孢子萌发率，结果表明：室内避光处的孢子萌发率一直维持在90%以上；田间阳光直射处的球孢白僵菌BD-B015孢子萌发率在5月、6月、7月、9月分别降至14.25%、4.88%、7.84%、19.77%；田间遮阳处的孢子萌发率均在50%以上；同时球孢白僵菌孢子过夜后的萌发率比前一天全天照射后的萌发率有所提高，但不会达到前一天最初的萌发率水平。故球孢白僵菌分生孢子在田间具有一定的生存潜能，且不同月份田间生存能力差异显着，同时经阳光照射后受损的球孢白僵菌孢子在黑暗条件下具有一定的自我修复能力。3.为筛选防治甘蓝蚜和小菜蛾的高效药剂，测定了常用药剂分别对甘蓝蚜和小菜蛾的室内毒力及田间防效，结果表明：40%氯虫·噻虫嗪WG对甘蓝蚜具有较强的毒力，LC50值为1.9355mg/L，对异色瓢虫2龄幼虫、异色瓢虫成虫和甘蓝蚜的选择性毒力比值分别为16.34和18.28，3～14d的田间防效一直维持在90%以上，速效性和持效性好；5%氯虫苯甲酰胺SC对小菜蛾的毒力最高，LC50值为0.9774mg/L，田间防治的速效性和持效性均较好，可作为防治小菜蛾的最佳药剂。4.通过测定9种蔬菜常用药剂对球孢白僵菌BD-B015孢子萌发、菌丝生长及产孢量的影响，结果表明各药剂对该菌株呈现不同程度的抑制作用，其中5%氯虫苯甲酰胺SC和40%氯虫·噻虫嗪WG与球孢白僵菌BD-B015的相容性较好，10%吡虫啉WP和20%啶虫脒WP在1/10推荐浓度下与其具有较好的相容性，故这4种药剂可在一定浓度下与该菌剂进行复配使用，而2%阿维菌素EC与该菌剂的相容性较差，两者最好单独使用或与其他药剂合理轮换使用。
李银平[3]2012年在《防治蓟马的白僵菌剂型及应用技术研究》文中认为西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是我国大陆的一种重要外来入侵害虫。烟蓟马Thrips tabaci Lindeman是一种世界性的重要农作物害虫。蓟马不但可以通过取食对蔬菜作物造成直接为害,还可以传播危险性病毒,造成更大的危害。随着蓟马抗药性的不断增强,生物防治越来越受到人们的重视。其中,球孢白僵菌(Beauveria bassiana)作为一类最常用的生防真菌,在蓟马的生物防治中发挥着重要作用。作者以西花蓟马和烟蓟马为研究对象,在室内,从大量球孢白僵菌菌株中初步筛选出对西花蓟马致病力强的菌株,并分别从菌株抗热性和产粉量、孢子粉质量指标叁个方面,对高毒力菌株进行评价；对球孢白僵菌悬乳剂和干悬乳剂的配方进行了室内优化筛选；通过田间试验,测定了球孢白僵菌悬乳剂对烟蓟马的控制作用。主要结果及结论如下：室内测定了大量球孢白僵菌菌株对西花蓟马的致病力,并评价了高毒力菌株的抗热性和产粉量及孢子粉质量指标。结果显示,抗热性：在较高温度下,高毒力SZ-26菌株不但具有较快的杀虫速度(在30。C下,LTso=1.561d；在34。C下,LTso=2.607d),而且导致试虫的死亡率较高(在30℃下,98.56%；在34℃下,95.31%)。产粉量及孢子粉质量指标：SZ-26菌株的产粉量(16.93mg·g-1)和有效产孢数(2.703×1015孢子·g-1)均显着高于其他3个菌株。因此,球孢白僵菌SZ-26菌株在西花蓟马的生物防治上具有极大的开发应用潜力。在本实验室初筛悬乳剂配方的基础上,进一步地对球孢白僵菌悬乳剂的乳化剂、分散剂及增黏剂的种类和用量进行优化。结果显示：悬乳剂的最佳配方为：3.5%乳化剂B,8.1%溶剂油B,1%分散剂C,0.065%增黏剂B,0.1%抗坏血酸,2%孢子粉,85.235%蒸馏水。并测定了悬乳剂的质量指标,所得乳液的质量指标为：乳白色的稳定乳液；析水量≤0.1%；无稠化或沉降现象出现；乳液的分散性良好；固体有效成分悬浮率为93.56%；pH为6；黏度为0.25Pa·s；低温稳定性合格；并与球孢白僵菌具有良好的生物相容性(孢子萌发率为92.4%)。对球孢白僵菌悬乳剂配方的优化筛选,为干悬乳剂配方的筛选工作奠定了基础。在悬乳剂配方筛选的基础上,本文首次研究了球孢白僵菌干悬乳剂的配方,并对其粉碎及溶解方式进行了筛选,同时,测定了干悬乳剂的质量指标、田间药害以及贮存稳定期。结果显示：干悬乳剂的最佳配方为：3.5%乳化剂B,8.1%溶剂油B,1%分散剂C,0.065%增黏剂B,0.1%抗坏血酸,2%孢子粉,0.00162%抗氧化剂,85.233%水溶性填料。干悬乳剂的最佳粉碎方式为高速万能粉碎机连续粉碎2min,重复粉碎3次。选择玻棒研磨搅拌法作为干悬乳剂的最佳溶解方式。干悬乳剂的各项质量指标为：为松散粉末颗粒,细度(过40目试验筛)为96.39%；含水量为2.36%；固体有效成分悬浮率为94.71%；pH为7；干悬乳剂所形成的悬乳液的分散性良好；并与球孢白僵菌具有良好的生物相容性。进而,对干悬乳剂的田间药害情况进行了测定,结果显示,在一定的温湿度(平均温度为23.5℃,平均湿度为70.2%)条件下,喷雾田间使用浓度(1×107孢子·ml-1)的干悬乳剂,不会引起供试幼苗(番茄、菜豆、黄瓜、辣椒、萝卜、棉花)产生药害症状。而干悬乳剂的贮存测试结果表明：在25℃贮存3个月后,干悬乳剂的孢子萌发率下降为70.13%,而在5℃下贮存5个月后,其孢子萌发率下降为69.93%。本文首次对球孢白僵菌干悬乳剂进行研究探索,对于克服虫生真菌制剂的贮存期问题具有重要的意义。分别于2011年5月和11月,应用球孢白僵菌悬乳剂进行田间喷雾防治烟蓟马。春季试验结果显示：球孢白僵菌悬乳剂对烟蓟马成虫的相对防效在喷雾后7d达到最高(86.98%),而对于烟蓟马若虫的相对防效在喷雾后3d达到最高(63.24%)。秋季试验结果显示：球孢白僵菌悬乳剂对烟蓟马成虫的相对防效在喷雾后7d达到最高(69.81%)。通过两次田间喷雾试验,说明了球孢白僵菌悬乳剂对烟蓟马具有良好的控制效果。
陆晴[4]2008年在《环境因素对球孢白僵菌HFW-05生长参数的影响及应用效果评价》文中研究指明球孢白僵菌(Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin)是国内外应用最广泛的昆虫病原真菌之一,能够侵染15个目149个科的700多种昆虫,并可引发昆虫流行病,在害虫生物防治上有具有广泛的应用前景和巨大的商业价值。本实验室筛选出一株对小菜蛾及烟粉虱具有较高杀虫活性的球孢白僵菌HFW-05,在前期工作基础上,本文对该菌株在不同环境下的生长及毒力情况进行研究。通过在基础培养基中添加14种碳源和11种氮源,明确了不同营养对HFW-05菌株的萌发率、生长速率、产孢量及胞外蛋白酶活性的影响。综合各项指标得出,最适碳源为蔗糖,产孢量和产酶量分别是1.61×10~8孢子/cm~2和117.38μg/(min·mL);最适氮源为豆柏粉,产孢量和产酶量分别是1.56×10~8孢子/cm~2和74.01μg/(min·mL)。培养基优化结果显示,碳源对孢子萌发率影响最大;无机盐对菌株生长速率和产孢量影响最大:从而获得最佳培养基组合为4%甘油+1%酵母浸膏+0.1%CaCl_2。明确了不同温度对HFW-05菌株生长与毒力的影响。结果表明,25℃培养有利于提高孢子萌发率及菌株产孢量;30℃培养有利于提高菌株产酶量,最适菌株生长的温度范围是25～30℃。生测实验表明,HFW-05菌株对小菜蛾的最佳致死温度范围为25～30℃。同时明确紫外照射对菌株各项生长参数的影响。结果显示,菌株在25℃下经紫外线1h处理后,萌发率可比对照增加12%,产孢量增加26%,表明适量紫外处理有利于菌株生长。测定了10种常用杀虫剂在3种浓度下对HFW-05菌株的萌发率、菌丝生长速率及产孢量等生长参数的影响。白僵菌在添加多杀菌素的培养基中萌发率可达97%以上;氟虫腈及菊酯类杀虫剂可促进菌株生长;菌株在低浓度氟虫腈的培养基中产孢量最大。采用低浓度杀虫剂与白僵菌混用测定对小菜蛾的毒力。实验表明,氟虫腈的杀虫速效性好,与菌株混用对试虫的死亡率可达98%以上;辛硫磷、灭多威和灭幼脲与该菌混用表现为拮抗作用,其他杀虫剂均表现为毒力相加作用。通过对小菜蛾和烟粉虱的生物测定及田间药效试验,明确了HFW-05菌株对靶标害虫在不同环境下毒力的变化及田间防治效果。HFW-05菌株在室内对小菜蛾2龄幼虫的LC_(50)值为8.026×10~5孢子/mL,对烟粉虱1龄若虫的LC_(50)值为5.469×10~6孢子/mL,毒力随虫龄增长而降低,发挥毒力效果的最佳虫龄为小菜蛾2龄以下幼虫及烟粉虱1龄若虫。通过HFW-05菌株在田间防治小菜蛾幼虫、烟粉虱成虫的小区试验,明确了该菌株的田间使用量、使用方法及防治效果。浓度为7.5×10~7孢子/mL的菌悬液对小菜蛾及烟粉虱的7d防治效果分别为87.93%和93.19%,可有效控制两种害虫对作物的危害。
李永利[5]2012年在《球孢白僵菌可湿性粉剂的研制及土壤环境对其宿存的影响》文中指出球孢白僵菌(Beauveria bassiana)BD-B015菌株是本实验室筛选出的一株对甜菜夜蛾具有较高毒力的虫生真菌,该菌株产孢量高、产酶量大、抗紫外能力强,并且具有广谱杀虫活性。已明确其液体培养和固体发酵的最佳条件,为使这一虫生真菌资源能够尽快应用于农业生产,本文对菌株BD-B015进行了深入研究,对其可湿性粉剂的配方进行筛选,对制剂的各项指标进行检测,同时对菌株BD-B015的孢子粉在不同土壤环境下的宿存情况进行了研究。主要研究结果如下:1.本试验通过液固双相发酵获得白僵菌BD-B015分生孢子,对其各项指标进行检测,其孢子粉的含孢量为1.35×1011孢子/g、萌发率为98.70%、含水量为9.11%,均已达到国家标准要求。对白僵菌分生孢子粉的可湿性粉剂的配方进行了研究,通过载体对白僵菌孢子粉萌发率、菌落生长速率、产孢量影响的试验,得出最适载体为高岭土;分析润湿剂与白僵菌的相容性和润湿时间,得出拉开粉最为适宜;分析分散剂与白僵菌的相容性和分散时间,得出HK-2302适宜作为可湿性粉剂的分散剂。故经筛选初步得出白僵菌可湿性粉剂的配方为:孢子粉30%,载体高岭土60%,润湿剂拉开粉5%,分散剂HK-2302 5%。2.对本试验筛选得到的白僵菌可湿性粉剂各项指标进行检测,其含孢量为400亿孢子/g,润湿时间为69s,有效成分悬浮率94.6%,干燥减重1.7%,细度为98.4%,均已达到国家标准要求。使用该制剂进行盆栽试验,结果表明对甜菜夜蛾有良好的防治效果,100倍、200倍稀释液对甜菜夜蛾120h的防治效果分别达到96.49%和81.05%,通过观察发现该制剂对供试作物没有药害现象。3.研究白僵菌孢子粉在不同土壤温度、土壤含水量、土壤质地及微生物存在环境下的宿存情况,结果表明,白僵菌能够在不同土壤条件下宿存,但宿存量有明显差异。白僵菌在25℃时,短期内宿存量最高,而通过白僵菌在不同温度土壤中长期的宿存情况可以看出,高温条件下白僵菌宿存量下降最快,不利于白僵菌的宿存,低温条件下白僵菌的宿存量能够维持在较高水平,对白僵菌的宿存最为有利;土壤含水量低于或高于15%都不利于白僵菌的宿存,并且含水量越高,白僵菌的宿存量下降越快;当土壤微生物存在时,前期能够抑制白僵菌的生长,后期又具有一定的促进作用;白僵菌在不同土壤质地的宿存情况表明,壤土比沙土更有利于白僵菌的宿存。
田甜[6]2009年在《飞蝗优良绿僵菌、白僵菌菌株的筛选及应用性研究》文中研究表明本研究于2007年~2008年3月~11月份利用黄粉虫诱集法,对保定地区土壤中绿僵菌和白僵菌资源进行调查研究。对分离获得的绿僵菌菌株和白僵菌菌株进行初步筛选。通过混合毒力测定方法,选出10株具有较高致病力的绿僵菌和7株较高毒力的白僵菌菌株。17株菌株对东亚飞蝗3龄蝗蝻的僵虫率在20.00%~100.00%之间,绿僵菌僵虫率从大到小依次为(M6-448,M5-110)>M7-335>M6-301>M7-220>M7-358>M6-073>M6-038>M6-322>M3-158;白僵菌僵虫率从大到小为B4-001>B9-071>B6-330>B3-123>B7-095>B4-064>B6-056;致死中时在2.95d~11.96d之间,绿僵菌致死中时从小到大依次为:M6-448<M5-110<M7-335<M6-301<M3-158<M7-358<M6-073<M6-322<M7-220<M6-038;白僵菌致死中时从小到大为B4-001<B9-071<B3-123<B6-056<B6-330<B4-064<B7-095。在初筛获得的17株菌株的基础上,通过抗紫外能力、抗旱力、耐低温能力、耐高温活性等指标的测定,对它们在多种条件下的性状进行了比较,并结合毒力测定的结果,以M6-448,M5-110,M7-335,B4-001为研究对象,对东亚飞蝗不同龄期蝗蝻及成虫进行生物测定,筛选出一株对东亚飞蝗具有高毒力且性状优良的金龟子绿僵菌菌株M6-448。试验用筛选出的菌株M6-448进行液固双相发酵研究,采用通用旋转组合设计方案,以产孢量为指标,选取最佳的发酵培养基配方。结果表明:在所选范围内最适合金龟子绿僵菌M6-448的发酵培养的培养基组成为:玉米粉20g,麦麸30g,麦壳1g,豆粉4.5g,碎米0.2g。通过对发酵条件的研究确定了其主要的发酵条件,即温度25℃,培养10天。试验表明,不同基质对绿僵菌生物量影响显着,营养成份复杂的基质有利于绿僵菌孢子的产生和总的生物量的提高。选高毒力金龟子绿僵菌菌株M6-448发酵菌粉,进行田间罩笼试验,金龟子绿僵菌水剂浓度分别为(108,109,1010)个/mL孢子,农药对照为稀释2000倍的4.5%高效氯氰菊酯,施药后10d,浓度为(108,109,1010)个/mL孢子的菌剂处理区虫口减退率分别为66.3%,76.3%,93.8%;稀释2000倍的4.5%高效氯氰菊酯农药处理区虫口减退率为96.3%。结果表明M6-448在今后防治东亚飞蝗方面具有较大的开发潜力。
李一玉[7]2014年在《球孢白僵菌Bb025对朱砂叶螨实验种群的控制作用研究》文中提出朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus (Boisduval)是世界性的农业害螨,由于化学药剂大量的使用造成该螨对多种农药产生了抗药性,而应用天敌、虫生真菌等生物防治则不仅可以有效的延缓抗药性的产生,而且具有对环境友好、持续控害效果好等诸多优点,因此选择合理的生物防治方法来对其进行有效的防治越来越受到重视和关注。为此,本研究利用扫描电镜观察了对其具有较高致病力的球孢白僵菌菌株Beauveria bassiana Bb025分生孢子在朱砂叶螨成螨体表的侵染过程；研究了不同温湿度条件球孢白僵菌对朱砂叶螨致病力；筛选了与该菌株相容性较好的化学杀螨剂,评价了菌药联合控螨的效果。主要结果如下：1、利用扫描电镜观察了球孢白僵菌Beauveria bassiana Bb025菌株分生孢子对朱砂叶螨雌成螨的侵染过程。结果表明：在朱砂叶螨接种球孢白僵菌后,在螨躯体背部、腹部、腹肛板、足、螨体表的刚毛及刚毛孔等部位都观察到有分生孢子的附着。球孢白僵菌在朱砂叶螨体表主要以芽管和菌丝入侵,入侵部位主要为体表凹陷及刚毛毛孔处,在接种后36h可以明显观察到入侵现象,接种后120h可以观察到菌丝形成网状结构包被整个螨体。2、测定了球孢白僵菌Bb025在不同温湿度条件下对朱砂叶螨雌成螨的致病力,旨在明确温湿度对球孢白僵菌Bb025致病力的影响,为应用球孢白僵菌防控朱砂叶螨进行生产实践提供参考。试验设置了19℃22℃25℃28℃、31℃5个温度水平,(55±5)%RH,(75±5)%RH,(95±5)%RH叁个湿度水平,1×108、2×107、4×106、8×105、1.6×105个/mL五个浓度梯度的球孢白僵菌孢子悬浮液采用喷雾法接种侵染朱砂叶螨雌成螨及卵,逐日记录朱砂叶螨雌成螨的死亡率及卵孵化率。试验结果表明：温度为25℃和28℃时球孢白僵菌对朱砂叶螨雌成螨及卵的致死率都显着高于其他温度处理,19。C的低温最不利于白僵菌对朱砂叶螨的侵染；在所设置的湿度范围内,在25℃处理条件下,湿度越高,球孢白僵菌Bb025对朱砂叶螨的致病力越强,越有利于该菌株对朱砂叶螨的侵染。3、测定了哒螨灵、甲氰菊酯、噻螨酮、炔螨特、阿维菌素、叁氯杀螨醇等6种常用杀螨剂对球孢白僵菌Bb025菌丝生长、产孢量及孢子萌发的影响,以期明确杀螨剂与球孢白僵菌Bb025的相容性,为杀螨剂与球孢白僵菌协同应用控制害螨提供理论依据。结果表明,各药剂在不同浓度处理下对球孢白僵菌菌丝生长、产孢量、孢子萌发的影响存在着显着性差异,其中阿维菌素与球孢白僵菌的相容性最差,在低浓度处理条件下对菌丝生长、产孢量、孢子萌发的抑制率都达到了60%以上。而甲氰菊酯、叁氯杀螨醇、哒螨灵这叁种药剂在低浓度条件下对球孢白僵菌菌丝生长有轻微的促进作用,对产孢量的抑制率也显着低于其他几种药剂,且在高浓度条件下对球孢白僵菌孢子萌发的抑制率为18.76%、14.50%、8.31%,显着低于其他药剂,表现出与球孢白僵菌Bb025较好的相容性,是菌药协同应用可供选择的对象。4、应用喷雾法测定球孢白僵菌Bb025与低剂量的哒螨灵对朱砂叶螨雌成螨及卵的毒力。球孢白僵菌孢子浓设置为1×107、l×106、1×105个/mL,哒螨灵的浓度设置为0.1、0.5、2.5μg/mL,分别为推荐使用浓度的0.2%、1%和5%。结果表明,随着球孢白僵菌孢子浓度的增加和哒螨灵剂量的增加,朱砂叶螨雌成螨死亡率呈现明显的上升趋势,且致死所需的时间也明显缩短,两者的互作表现了良好的增效作用。在白僵菌孢子和哒螨灵的协同处理下,朱砂叶螨卵的孵化率也受到了明显的抑制,当球孢白僵菌孢子浓度为1×107个／mL与2.5μg/mL的哒螨灵互作处理朱砂叶螨卵时,其致死率达到了82.22%,与单菌处理差异达到显着水平,表明在杀螨卵方面,添加低剂量的哒螨灵对球孢白僵菌孢子的致病力也有较好的增效作用。
王利军[8]2010年在《马铃薯甲虫的虫生真菌分离及其生防菌的筛选鉴定》文中研究指明马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata (Say);是重要的外来入侵物种和检疫性害虫,国外已开发出多杀菌素等防治马铃薯甲虫的生物杀虫剂,但由于马铃薯甲虫传入我国不久,对其致病微生物的研究国内尚未见报道。因此本研究从新疆马铃薯甲虫发生地采集感病成虫样品,在室内分离昆虫病原菌,并经致病性测定筛选出2个强致病白僵菌菌株,用形态及分子生物学技术鉴定强致病菌,并研究它们的培养特性,最后进行温室盆栽和大田试验测定这2个菌株的防治效果。马铃薯甲虫病原菌的分离：从新疆大量采集感病马铃薯甲虫,采用常规昆虫真菌分离法从虫体上分离纯化后获得47个真菌菌株,初步形态学鉴定分别属于白僵菌(Beauveria)、轮枝菌(Verticillium)、镰刀菌(Fusarium)、青霉(Penicillim)、木霉(Trichoderma)和曲霉(Aspergillus)属等。不同菌株对家蚕的致病性测定：用真菌悬浮液(浓度：1.05×109个／mL)接种家蚕2龄幼虫,结果表明有36个菌株对家蚕有不同程度的致病性,其中白僵菌30株、轮枝菌3株、镰刀菌2株和木霉1株,白僵菌菌株中MJ-07的致病力最强,接种后11d的累积死亡率达到95.6%,致死中时(LT50)为7.5d；轮枝菌MJ-20接种后11d的累积死亡率和LT50分别为61.5%和9.1d；镰刀菌MJ-27和木霉MJ-32的致病力较弱,其接种11d的累积死亡率仅为8.6～11.0%。本试验结果为进一步到新疆进行马铃薯甲虫致病性测定奠定了基础,同时也为今后有关地区在应用病原菌控制马铃薯甲虫时注意保证养蚕业的安全提出了警示。真菌菌株对马铃薯甲虫的致病性：用家蚕初步筛选获得的36个菌株的分生孢子悬浮液(浓度：1.1×109个／mL)分别接种马铃薯甲虫2龄幼虫后观察,它们都具有不同程度的致病力。轮枝菌(Verticillium)、镰刀菌(Fusarium)和木霉(Trichoderma)菌株的致病力比较弱,接菌9d后的虫体累计死亡率(LR9d)只有4.3～11.3%。多数白僵菌(Beauveria)菌株的致病力都较强,其中有5株白僵菌(MJ-01、MJ-03、MJ-07、MJ-08、MJ-09)的致病力非常强,LR9d达到82.3～93.3%,致死中时(LT50)和致死中浓度(LC50)分别为6.71～7.53d和4.53×106～5.89×107mL-1。选择致病力最强的MJ-07和MJ-09菌株作进一步试验,观察它们对成虫和各龄幼虫的致病性。结果表明,MJ-07菌株对1龄、2龄幼虫和成虫的致病性都很强,接菌后5d初见虫体死亡,LR9d分别为100%、93.4%和98.0%；而对3龄和4龄幼虫的致病性相对较弱,LR9d各为70.0%和43.3%；死亡的虫体缩小,后期产生大量分生孢子完全包被虫体。MJ-09对1龄和2龄幼虫的致病性很强,接菌后5d始见虫体死亡,LR9d分别达100%和90.0%；而对3龄和4龄幼虫和成虫的致病性较弱,接种后7d才开始见虫体死亡,LR9d分别只有63.3%、33.0%和13.3%；刚死亡的虫体完全变黑,后期产生的分生孢子量不如MJ-07致死的虫体产孢量大,不能完全包被虫体。本研究结果认为,MJ-07和MJ-09是马铃薯甲虫的强致病力菌株,在马铃薯甲虫的生物控制中将具有潜在的开发应用价值。菌株MJ-07和MJ-09对马铃薯甲虫的控制效果测定：通过前期室内致病性试验,选致病性最强的2株白僵菌(MJ-07和MJ-09)进行室内盆栽和田间防效试验。1.室内盆栽结果表明,2个菌株对1龄和2龄幼虫的致死率显着高于3龄幼虫,喷施MJ-07菌悬液15d后的各龄幼虫的死亡率分别为65.5%、61.8%和30%；而喷施MJ-09菌悬液15d后的死亡率分别为62.3%、57.2%和25%。2.选择1龄和2龄CPB幼虫进行田间试验,喷施MJ-07菌悬液15d后的死虫率分别为45%和41.6%；喷施MJ-09菌悬液15d后的死虫率分别为40.2%和38.3%；作为对照白僵菌制剂的致死率仅有30%,2个菌株的田间致病性高于对照白僵菌制剂,表现出很好的害虫控制效果。白僵菌形态学和分子生物学鉴定：在SDAY培养基上培养菌落呈茸毛状,MJ-07培养初期多呈白色且菌落较厚,MJ-09菌落淡黄色,背面无色,或淡黄色。气生菌丝透明、光滑、薄壁,分枝较少且较纤细,宽1.8～2.8μm；分生孢子梗着生在菌丝上,粗1-2μm,产孢细胞常着生于短的并稍有膨大的柄细胞上,常呈浓密的菌丛,基部多为球形、近球形至梭形膨大；产孢轴较长,呈“之”字形弯曲。分生孢子单孢、壁薄、透明、光滑,多为球形、近球形,直径2～3×2～2.5μm。采用真菌通用引物对(ITS4和ITS5),通过聚合酶链式反应(PCR)分别对菌株MJ-07和MJ-09的核糖体DNA内转录间隔区(rDNA ITS)的特异性扩增,得到了长度分别为581bp和537bp的特异性片段(GenBank登录号分别为GU233851和GU989641),Blast比对后结合形态学特征鉴定它们的无性时期均为球孢白僵菌(Beauveria bassiana),有性时期为球孢虫草菌(Cordyceps bassiana)。白僵菌菌株主要培养特性：在供试的8种培养基中,SDAY培养基最适MJ-07和MJ-09菌株生长,其产孢强度也最大；6个温度处理中最适生长温度为25℃,孢子萌发最适温度25～28℃；菌株在供试的9种碳源和9种氮源中,对葡萄糖和蔗糖2种碳源及胰蛋白胨和酵母浸膏2种氮源利用最好；菌株在全光照条件下菌丝生长最好及产孢量最大；分生孢子的致死条件为55℃处理10min；紫外光照射对分生孢子萌发有显着影响,照射60min时,24h内没有孢子萌发；分生孢子在2%葡萄糖+1%蛋白胨培养基中萌发最早。5种常用马铃薯甲虫杀虫剂对MJ-07和MJ-09生长产孢的试验结果显示,5种供试杀虫剂对2个菌株的菌落生长和孢子萌发均有不同程度的抑制作用。其中高效氯氟氰菊酯和吡虫啉对2个菌株的抑制作用较小,对MJ-07的孢子萌发抑制率分别为9.5%和13.5%,对MJ-09孢子萌发率分别为10.9%和13.3％；而灭多威、啶虫脒、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对2个菌株均有较强的抑制效果。因此在田间应用时应注意杀虫剂对白僵菌的抑制作用。虫生真菌(entomogenous fungi)是自然界广泛分布的一类珍贵的生物资源。随着科学技术的发展和绿色植保方针的提出,生物防治在马铃薯甲虫的综合治理中发挥重要的作用,本研究中筛选鉴定的2个白僵菌菌株具有明显的应用潜力,安全有效的马铃薯甲虫真菌杀虫剂将来会被研制出来并广泛应用于马铃薯甲虫的控制实践。
齐永霞[9]2011年在《白僵菌和绿僵菌在植物根际的定殖及对几种土传植物病原真菌的抑制作用研究》文中指出虫生真菌是昆虫的重要自然调节因素，在农、林、卫生害虫生物防治方面发挥了重要作用。金龟子绿僵菌和球孢白僵菌是两类重要的昆虫病原真菌，可寄生多种昆虫，在害虫生物防治中得到广泛的应用。本文通过形态学鉴定、分子标记等方法研究了分离自涡阳、萧县、蒙城叁个地区玉米根际土壤的白僵菌，以球孢白僵菌和金龟子绿僵菌为研究对象，探讨了虫生真菌对多菌灵的敏感性，虫生真菌在植物根际的定殖能力，虫生真菌对土传植物病原真菌的抑制作用及不同碳、氮营养对虫生真菌生物学特性和抑菌活性的影响。主要研究结果如下：1.通过白僵菌选择性培养基从采自安徽省涡阳、萧县、蒙城叁个地区的玉米根际土壤中共分离到39个白僵菌菌株，经培养特点、形态特征及rDNA ITS鉴定分离的菌株均为球孢白僵菌（Beauveria bassiana），且不同菌株间的菌落生长直径和分生孢子产生量存在显着差异。2.通过ISSR-PCR分子标记技术对分离自玉米根际的球孢白僵菌的遗传多样性进行了研究。从40个引物中共筛选出11个多态性高、稳定性好的引物用于正式的扩增分析，在37个菌株中共扩增出83条谱带，其中多态性条带占69条，多态性百分率为83.13﹪。平均每引物扩增条带在7.5条。群体的多态位点百分率（PPL）是83.13﹪，Nei基因多样性指数（H）为0.3169，Shannon信息指数（I）为0.4657。结果表明，分离自安徽省涡阳、萧县、蒙城叁个不同地区的球孢白僵菌具有较高的遗传多样性。3.通过菌丝生长抑制率法测定了球孢白僵菌（B. bassiana）和金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）对多菌灵的敏感性。发现球孢白僵菌和金龟子绿僵菌不同菌株对多菌灵的敏感性存在一定的差异。在供试的球孢白僵菌菌株中，菌株GY~(-1)7的EC_(50)值最大，GY-6的EC_(50)值最小。在供试的金龟子绿僵菌菌株中，Ma55菌株的EC_(50)值最小，对多菌灵的敏感性最强，其次是Ma27菌株，Ma10菌株的EC_(50)值最高。4.在含多菌灵平板上，通过贴接菌丝块法和涂分生孢子法定向筛选获得了球孢白僵菌和金龟子绿僵菌抗多菌灵菌株，并测定了不同抗性菌株对多菌灵的抗性水平。测定结果表明，在球孢白僵菌抗多菌灵菌株中，BC-4菌株的EC_(50)值最大，其EC_(50)值为258.7711，对多菌灵的抗性水平最高，达到242.11，BC-3菌株的EC_(50)值最小，其EC_(50)值为18.6311，抗性水平最低。在金龟子绿僵菌抗多菌灵菌株中，MC-2菌株的EC_(50)值最大，其EC_(50)值为397.0643，对多菌灵的抗性水平达到102.35；MC-4菌株的EC_(50)值最小，其EC_(50)值为149.5440。研究了球孢白僵菌和金龟子绿僵菌抗多菌灵菌株的菌丝生长速率和产孢能力的差异，发现球孢白僵菌和金龟子绿僵菌不同抗性菌株间的菌丝生长速率和产孢能力均存在一定的差异，抗性菌株的生长速率均比对照敏感菌株（亲本菌株）小，产孢能力均比对照敏感菌株要强，但不同菌株间存在一定的差异，在球孢白僵菌抗性菌株中，BC-4菌株的分生孢子产生量最大，在金龟子绿僵菌抗性菌株中，MC-2菌株的分生孢子产生量最大。5.采用分生孢子悬浮液蘸根法研究了球孢白僵菌抗多菌灵菌株BC-8菌株和金龟子绿僵菌抗多菌灵菌株MC-2菌株在植物根际的定殖能力及对根际微生物的影响。结果显示，BC-8菌株和MC-2菌株均可以在玉米、棉花外根际和根表定殖，但在玉米、棉花根内未分离到供试菌株。BC-8菌株和MC-2菌株对植物根际微生物的数量都有一定程度的影响，尤其以前期影响较为明显，随着时间的推移，影响减弱。6.在实验室条件下，研究了金龟子绿僵菌和球孢白僵菌对几种土传植物病原真菌的拮抗作用及其机制。对峙培养结果表明，金龟子绿僵菌和球孢白僵菌对供试的植物病原真菌均有抑制作用，其中绿僵菌以Ma55的制效果最好，白僵菌以Bb2092的效果最好。在培养基中加入Ma55和Bb2092不同浓度的分生孢子悬浮液，当浓度为106cfu·mL~(-1)时，对植物病原真菌菌丝生长具有明显的抑制作用。Ma55和Bb2092液体振荡培养获得的无菌发酵液对供试的植物病原真菌菌丝生长都有较好的的抑制作用，对植物病原真菌的分生孢子（菌核）产生及分生孢子（菌核）萌发也都有一定的抑制作用。显微镜观察未发现金龟子绿僵菌和球孢白僵菌与植物病原真菌菌丝间有重寄生现象。上述结果显示，虫生真菌对供试植物病原真菌的拮抗机制主要是营养竞争、空间竞争及抗生作用。7.研究了不同碳源和氮源对球孢白僵菌和金龟子绿僵菌菌丝生长、分生孢子产生量、菌丝生物量及其次生代谢产物的抑菌活性。结果表明，虫生真菌对单糖、双糖、多糖等碳营养及有机氮和无机氮等氮营养均能够利用，但利用程度存在一定差异。代谢液的抑菌活性实验结果表明，不同处理获得的球孢白僵菌发酵液对供试的5种镰刀菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用，在碳源发酵液中，甘油的抑菌效果最好，乳糖的抑菌效果最差。在氮源发酵液中，硫酸铵的抑菌效果最好，脲的抑菌效果最差；不同处理获得的金龟子绿僵菌代谢液对植物病原真菌菌丝生长均有较好的抑制作用，在碳源发酵液中，白砂糖的抑菌效果最好，乳糖的抑菌效果最差。在氮源发酵液中，蛋白胨的抑菌效果最好，脲的抑菌效果最差。
李华祥[10]2012年在《高产孢白僵菌的发酵与茶叶病害虫防治》文中提出假眼单胞小绿叶蝉是我国目前头号茶树害虫，严重影响着茶叶的产量和质量。对该小绿叶蝉，茶农主要以化学农药防治为主，导致茶叶农残严重超标，既破坏了生态环境、危害人类健康，又严重阻碍了中国茶业的出口贸易和发展。本研究所用球孢白僵菌YP9，经多次田间试验验证，对茶小绿叶蝉田间防治效果显着，有利于生产有机茶和发展中国茶业，有巨大的开发价值和良好的应用前景。本论文主要研究内容如下：（1）为了实现工业化大规模生产，我们对该白僵菌固态发酵条件进行了优化。以产孢量为指标，获得以下最优发酵条件。培养基含水量：初始含水量为65%，发酵至48h将含水量调为68%；翻料：发酵至20h和40h时分别翻料，其余时间不翻料；通气：0~48h（适应期）和108~168h（稳定期）不通气，48~108h（快速生长期）按1:2通气比通气；发酵温度：0~48h为25oC，48~108h为24oC，108~168h为28oC。在上述优化条件下，该白僵菌固态发酵产孢量达1.8×1010孢子/g干重以上，比优化前提高了约360%，已达到工业化生产水平（1.6×1010孢子/g干重），为其实现工业化大规模生产奠定了基础。（2）通过添加热保护剂，提高白僵菌孢子的抗热性，有利于孢子制剂的制备、保藏及应用。因此，我们对孢子热保护剂进行了筛选和优化。首先从33种物质中筛选出6种糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖及甘露醇），再应用响应面分析法进一步筛选和优化。各物质添加浓度的优化结果如下：葡萄糖0.262g/mL，乳糖0.276g/mL，甘露醇0.243g/mL。在验证实验中，添加上述保护剂后，热处理后的孢子萌发率平均值为72.29%（对照组的孢子萌发率仅为4.57%），与拟合方程的预测值72.28%非常接近，说明该优化方法合理、优化结果可靠，且该保护剂对白僵菌孢子热保护效果显着。（3）通过对影响白僵菌孢子萌发的相关因素进行优化，得出以下球孢白僵YP9的田间应用条件：使用2%麸皮浸出液（自然pH）作为促进孢子萌发的营养液；在麸皮浸出液中添加微量（0.5g/L）的Mg2+和Ca2+；孢子悬浮液喷洒浓度为5×107孢子/mL；选择气温在25oC左右（23oC~28oC）且喷洒后12h以内气温不高于37oC、光照时间不超过3h的时间段进行喷洒（晴天通常选择傍晚，阴天则可全天进行）。在上述应用条件下，经无锡、昆明及杭州多次田间试验验证，该白僵菌对小绿叶蝉的田间防效与目前茶农常用化学农药的防效相当，说明该白僵菌具有巨大的开发价值和良好的应用前景。
参考文献：
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[3]. 防治蓟马的白僵菌剂型及应用技术研究[D]. 李银平. 中国农业科学院. 2012
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[5]. 球孢白僵菌可湿性粉剂的研制及土壤环境对其宿存的影响[D]. 李永利. 河北农业大学. 2012
[6]. 飞蝗优良绿僵菌、白僵菌菌株的筛选及应用性研究[D]. 田甜. 河北农业大学. 2009
[7]. 球孢白僵菌Bb025对朱砂叶螨实验种群的控制作用研究[D]. 李一玉. 西南大学. 2014
[8]. 马铃薯甲虫的虫生真菌分离及其生防菌的筛选鉴定[D]. 王利军. 西南大学. 2010
[9]. 白僵菌和绿僵菌在植物根际的定殖及对几种土传植物病原真菌的抑制作用研究[D]. 齐永霞. 安徽农业大学. 2011
[10]. 高产孢白僵菌的发酵与茶叶病害虫防治[D]. 李华祥. 江南大学. 2012