（新邵县人民医院检验科 422900）
摘要：目的 分析多耐药铜绿假单胞菌抗药基因检测及对常用消毒剂的抗性。方法 从我院2016年5月~2017年5月接诊患者分泌物、血液、尿液、痰液中，分离出多耐药铜绿假单胞菌26株，实行回顾性分析。通过聚合酶链反应检测多耐药铜绿假单胞菌抗药基因，采用悬液定量杀菌试验，对耐药铜绿假单细胞菌基因，对于常用消毒剂的抗性。结果 26株铜绿假单胞菌中，阴性和阳性分别为17株、9株。250mg/L和500mg/L的聚维酮碘作用30s、1min、3min，500mg/L戊二醛作用3min、5min，500mg/L氨氯疫情尿酸作用1min、3min、5min的灭杀菌效果最理想，均为100%。结论 有效使用聚维酮碘、三氯异氰尿酸、戊二醛，可很好的抑制耐药铜绿假单细胞菌，具有重要的临床应用价值。
关键词：多耐药铜绿假单胞菌；抗药基因；消毒剂；抗性
医院感染中，铜绿假单细胞菌为常见的致病菌，而铜绿假单胞菌的出现，会导致患者出现皮肤软组织感染情况，进而引发肺炎、败血症等[1]。当前，因抗菌药物的滥用，导致这抑制病菌的耐药性增强，这对于临床治疗会构成较大的挑战。针对于此，本次研究对近年来分离的多耐药铜绿假单胞菌抗药基因实行检测，并对聚维酮碘、三氯异氰尿酸、戊二醛的抗性加以分析。
1.资料与方法
1.1一般资料
回顾性分析，我院2016年5月~2017年5月经接诊患者的分泌物、血液、尿液、痰液中，所提取的多耐药铜绿假单胞菌，共26株。经VITEK2-compact系统、API系统实行细菌的鉴定工作。
1.2方法
选择24h菌落群培养，经磷酸缓冲液实行细菌悬液制备操作，制备的浓度设置为1.2×108cfu/ml。然后，通过无菌硬水配置浓度不同的消毒液，以此提高杀菌效果。经Primer Premier5.0软件，按照Gen Bank耐药基因序列设计，引物的携带抗药基因主要包括：P1：5’-TAG CGA GGG CTT TAC TAA GC-3’、P2：5’ -ATT CGA GCC GAA CAC CG-3’。引物扩增后，长度为300bp。通过聚合酶链式反应，提取细菌DNA，反应条件（5min95°C预变性、20s94°C变性、20s55°C退火、30s75°C延伸。共计：35个循环、5min72°C延伸）。反应体系设置为：100ngDNA模板、5umol/L上游引物和下游引物均为4ul。其中5ul的2.5mmol/L 10×PRC Buffer；4ul的2.5mmol/L dNTP Mixture，通过无菌水补足溶液为50ul。最后，经EB染色方法，采取2%的琼脂糖凝胶电泳处理反应产物，在紫外灯下密切观察产物的情况。
1.3观察指标
结合消毒、灭菌评价方法和标准内容，实行悬液定量杀菌试验，观察多耐药铜绿假单胞菌抗药基因检测情况、常用消毒剂（聚维酮碘、三氯异氰尿酸、戊二醛）的抗性。
经S、I、R分别表示：敏感，即为细菌对抗菌药物的敏感性，表示常规剂量治疗有效；中等，即为细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量学浓度≥最低抑菌浓度MIC；耐药，即为细菌对特种抗菌药物产生耐药性，药物对于细菌最低抑菌浓度＞常规剂量血浓度。
1.4统计学处理
本文所有临床相关数据，均通过SPSS15.0统计学软件处理并分析，计数资料采取例数n表示，组间对比分别通过“均数差±”、“率%”的方式表达，利用t、X2进行检验。
2 结果
2.1 铜绿假单胞菌耐药情况分析
经16种抗菌药物，对26株铜绿假单胞菌作用情况实行分析，多耐药铜绿假单胞菌阴性17株，阳性9株，详见下表。
2.2 抗基因检测情况分析
编号P2、P12、P13铜绿假单胞菌扩增情况较强；编号为P6、P10、P11的铜绿假单胞菌，编号为P3、P4、P9、P14的铜绿假单胞菌，分别为扩增情况较弱、没有扩增情况。
2.3悬液定量杀菌试验情况分析
250mg/L聚维酮碘、500mg/L聚维酮碘作用30s、1min、3min，灭杀菌均为100%；125mg/L聚维碘酮作用1min、3min，灭杀率在99%~100%范围。
500mg/L戊二醛作用1min，灭杀率为99%~100%的范围；500mg/L戊二醛作用3min、5min，灭杀菌均为100%；250mg/L戊二醛作用1min，灭杀率范围为65%~99%。
125mg/L、250mg/L三氯异氰尿酸作3min和5min，灭杀菌率均为100%；125mg/L、250mg/L三氯异氰尿酸作用1min，灭杀菌率范围为99%~100%；500mg/L氨氯疫情尿酸作用1min、3min、5min，灭杀菌率均为100%。
3.讨论
不同环境下，均会产生铜绿假单胞菌，这一致病菌的生存能力较强。当前，因光谱抗生素、激素、免疫抑制剂的不规范使用，导致铜绿假单胞菌耐药性加强，院内感染率不断增长，这对于临床治疗无疑会加大难度[2—4]。细菌在低剂量消毒剂、亚致死低剂量消毒剂的作用下，就会发生抗药性[5]。ICU监护室的患者感染MDR菌株几率较大，且危险性明显高于其他科室，这和ICU患者自身免疫能力有关。同时，这一科室患者由于实行有创操作处理，所以易于使得这一致病菌在院内传播。为此，临床方面需合理使用抗菌药物，及时对细菌对于消毒剂的抗性进行分析、了解，以便通过适宜的消毒剂，做好消毒工作、隔离工作，以此降低交叉感染率[6]。
总而言之，临床工作中需严格参照消毒说明内容，合理使用消毒剂，以便切实做好医院感染菌消毒工作，防止产生滥用消毒剂情况。
参考文献
[1]邓晶荣，牟凤林，邵林等.多耐药铜绿假单胞菌抗药基因检测及对常用消毒剂的抗性分析[J].甘肃医药，2017，36（7）：562-564.
[2]司忠花，董玉俊，李玉.基层医院铜绿假单胞菌耐药性分析及耐药基因检测[J].中华医院感染学杂志，2017，27（1）：43-46.
[3]张福华，万言珍，陈佳红等.ICU铜绿假单胞菌耐药性和消毒剂-磺胺耐药基因的检测及分析[J].中华医院感染学杂志，2017，27（7）：1445-1447.
[4]司忠花，林文静，徐少全等.基层医院铜绿假单胞菌耐药基因检测[J].中华医院感染学杂志，2017，27（7）：1448-1451.
[5]李昕，刘周，姚杰等.合肥地区铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力基因检测分析[J].中华医院感染学杂志，2017，27（2）：251-254.
[6]税剑，邹明祥，王海晨等.铜绿假单胞菌临床分离株生物膜、群体感应相关基因及耐药性分析[J].临床检验杂志，2017，35（4）：254-257.
论文作者:李武连
论文发表刊物:《航空军医》2018年3期
论文发表时间:2018/4/13
标签：铜绿论文; 消毒剂论文; 胞菌论文; 基因论文; 抗药论文; 抗性论文; 耐药性论文; 《航空军医》2018年3期论文;