Zhou Juncai
The 96605th Troops Hospital of the PLA，Tonghua，Jilin 134001
Abstract Objective To investigate the preparation of cell paraffin block from hydrothorax and ascites，and its application value in diagnosis. Methods hydrothorax and ascites were centrifuged with 300ml centrifugal cup，and cell sediments were collected to form cell paraffin block，HE and immunohistochemical staining were performed after slicing. Results After slicing，HE staining microscopy showed that the cells were evenly distributed，abundant in number， closer to the histological section，and could have obvious histological structure. The staining effect was bright and the contrast was good. Compared with the traditional smear，the positive detection rate was higher. The positive signals of immunohistochemical staining were accurately located and clearly contrasted. Conclusion Cell paraffin block section can provide more diagnostic information than traditional smear；it is very helpful for the positive detection rate，differential diagnosis and guiding clinical rational selection of treatment options for malignant hydrothorax and ascites tumors；This method is simple，convenient and fast. It is suitable for all hospitals with pathological departments. It can be used as routine cytopathology examination of hydrothorax and ascites together with traditional smears，and it is worth popularizing.
Key Words cell paraffin block； cytopathology； immnohistochemistry
[摘要]：目的 探讨胸腹水细胞沉渣石蜡包埋技术的方法及其在诊疗中的应用价值。方法 用300ml大容量离心杯离心归集胸腹水细胞沉渣，石蜡包埋制成细胞蜡块，切片后行HE和免疫组化染色。结果 切片后HE染色镜下见细胞分布均匀，数量充足，形态更接近组织学切片，可出现明显的组织学结构；染色效果鲜艳，对比度良好；相对于传统涂片阳性检出率更高。免疫组化染色阳性信号定位准确，对比清晰。结论 细胞蜡块切片较传统涂片能提供更多的诊断信息；对胸腹水恶性肿瘤的阳性检出率、鉴别诊断、指导临床合理选择治疗方案帮助非常大；本方法简易、方便、快捷，适用于设置病理科的所有医院，可与传统涂片一起作为胸腹水细胞病理学检查的常规，值得推广。
[关键词]：细胞蜡块；细胞病理学；免疫组化
对于胸腹水患者，特别是大部分患者无外科活检或手术指针时，细胞病理学诊断显得尤为重要，是诊断恶性胸腹水的首选方法[1]。细胞病理学诊断通常是传统离心后涂片显微镜下观察，但传统涂片存在背景复杂，细胞厚薄不均、重叠，染色效果欠佳，阅片面积大、耗时，阳性检出率低，无法重复制片等缺点。细胞沉渣石蜡包埋切片不仅弥补了传统涂片的缺点，且可结合形态学、免疫细胞化学、分子病理学等诊断技术的联合应用，致使阳性检出率大大提高，同时还可用于判断肿瘤细胞的来源部位、分型、分期及评估预后等，为临床诊治提供重要依据[2，3]。近3年来，我们探索、总结出一套已定型的细胞蜡块制备方法，该方法简易、快捷，所获得的细胞数量大，无需加入特殊材料等优点。因此，我科已把胸腹水细胞沉渣石蜡包埋切片与涂片一起作为细胞病理学检查的常规。现将此方法与应用介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料 收集2016年12月—2019年7月我院病理科存档的胸水或腹水样本90例。
1.2 方法 送检的胸腹水标本通常是较多的，很少在50ml以下，因此我们用300ml大容量离心杯离心归集细胞。标本在250ml以下时全部置于一个离心杯中；250—500ml时均等分置于两个离心杯中；500ml以上时置于4℃冰箱10分钟，弃去上层部分，留取下层部分500ml均等分置于两个离心杯中。2500r/min离心10min，弃去上清液；若标本为红细胞较多的血性胸腹水，可加入适量的红细胞裂解液继续离心10 min。包埋盒中铺垫显微镜擦镜纸，用小钢匙刮取离心杯中较干稠部分的细胞沉渣置于包埋盒中的擦镜纸上，包裹后合盖，放置于95%乙醇液中固定硬化；离心杯中剩余细胞沉渣混匀后常规涂片。获得的细胞块盒无需单独脱水处理，与当天取材的组织标本一起在全自动组织脱水处理仪中进行常规脱水处理即可。脱水处理后细胞块按常规步骤进行石蜡包埋、切片及HE染色或免疫组化染色。
2 结果
这种大容量离心后获取的细胞沉渣数量大，足够石蜡包埋制成细胞蜡块。切片后HE染色镜下见细胞分布均匀，数量充足，且面积相对涂片更为集中，能清楚的观察细胞的排列方式，形态更接近组织学切片，可出现明显的组织学结构；细胞形态保存良好，无重叠、皱缩或变性，染色效果鲜艳，对比度良好（图1）。炎细胞多的肿瘤性胸腹水，常规涂片或许找不到肿瘤细胞，但细胞蜡块切片能清晰显示出肿瘤细胞。以1例卵巢癌伴腹水病例为例，涂片中见大量中性粒细胞，未见肿瘤细胞（图2）；细胞蜡块切片中腺癌细胞清晰可见（图3）。免疫组化染色阳性信号定位准确，对比清晰。以1例黏液型支气管肺泡癌伴胸水病例为例，细胞蜡块切片中癌细胞CK7细胞质阳性（图4）、P-gp（多药耐药基因蛋白）细胞膜和细胞质阳性（图5）——提示对多种化疗药物产生耐药；以1例肺腺癌伴胸水病例为例，细胞蜡块切片中癌细胞TTF-1细胞核阳性（图6）。
3 讨论
胸腹水是临床常见病症，病因多样、复杂，判断其性质对疾病的诊断、治疗和预后有重要意义。胸腹水的性质判断是细胞病理学诊断，常用的方法是传统细胞涂片。传统涂片方法虽简单、方便、快捷，对设备要求低，成本低廉。但传统人工涂片有偏差，细胞厚薄不均匀、重叠，易被炎性渗出物、红细胞等干扰物所覆盖，染色效果欠佳，致阳性检出率低；阅片面积大，耗时；无法重复制片等缺点。
我们将细胞沉渣包埋切片技术应用于胸腹水脱落细胞制片和诊断中，与传统涂片相比较：细胞多且集中，保存良好，无皱缩和变性，能清楚的观察细胞的排列方式，形态更接近组织学切片，可出现明显的组织学结构，能提供更多的诊断信息；不会出现涂片厚薄不一，细胞重叠、成团，结构不清，染色欠佳等现象而影响诊断；HE染色和免疫组化染色颜色鲜艳，定位准确，背景清晰干净，阳性结果明显，成功率高，容易让医师做出明确诊断；阅片面积小，省时；更重要的是对于恶性胸腹水传统涂片是一次性的，仅提供恶性肿瘤的诊断，对于原发灶的寻找没有帮助，但细胞蜡块可长期保存并反复、连续切片，进行后续各种病理检测，如特殊染色和免疫组化染色、分子病理检测等，不仅可以定性诊断，还可以追踪肿瘤细胞来源、分型、临床分期、评估预后、复发等，还可以检测肿瘤细胞对化疗药物的耐药物性和敏感性，以及检测肿瘤细胞分子靶向治疗基因突变位点，对胸腹水恶性肿瘤的阳性检出率、鉴别诊断、指导临床合理选用化疗药物和选择分子靶向治疗药物帮助非常大[2，3]。
目前国内外使用较多的脱落细胞蜡块制备方法主要有琼脂包埋法、蛋清法、血浆凝血块法[2]，还有冷冻胶水托法[4]等，虽然这些方法能得到较为满意的细胞蜡块，但各方法都较为繁琐。琼脂法成本较高，制作复杂，加热融化琼脂的温度不好控制；蛋清和血浆凝血酶不易得到且含蛋白质免疫染色易产生背景等缺点，推广受到限制[2]；冷冻胶水托法对于一些还没有开展术中快速冷冻切片病理诊断的中小型医院病理科也是不合适的。我们这种大容量离心直接包埋法相对以上所述方法具有以下优势：制作过程简易、方便、快捷；所归集的细胞数量大，便于包裹和包埋；成本低；无需加入特殊支撑剂和加热等，更利于细胞抗原及酶活性的保存，更适于后续免疫组化、分子病理等检测工作的进行；本方法适用于设置病理科的所有医院。但也应注意，对于肿瘤细胞成分较少或分化较差的病例，细胞蜡块切片必须与涂片相结合，我们在检测工作中就遇到过有些肿瘤细胞仅较多地出现在涂片，细胞切片中仅有很少的、难以判断的肿瘤细胞，因此二者相互补充对于诊断非常重要。所以本方法可与传统涂片一起作为胸腹水细胞病理学检查的常规，值得推广。
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参考文献
1．马博文.浆膜腔积液细胞病理学诊断[M] .北京：人民军医出版社，2006：1-17.
2．虞红珍，吴强.浆膜腔积液细胞学检查中制片技术应用的现状与进展[J] .临床与实验病理学杂志，2014，30（4）：434-436.
3．张丽华，王雪晴，王国庆，等.细胞蜡块在晚期腺癌诊断和肺腺癌个体化治疗中的应用价值[J] .临床与实验病理学杂志，2014，30（2）：166-170.
4．陈 晶，江 炜，李 雷????.改良快速胸水及腹水脱落细胞块制备的体会[J] .临床与实验病理学杂志，2014，30（9）：1057-1058.
论文作者:周俊才,
论文发表刊物:《医师在线》2020年3期
论文发表时间:2020/4/7
标签：细胞论文; 涂片论文; 胸腹论文; 切片论文; 阳性论文; 沉渣论文; 病理学论文; 《医师在线》2020年3期论文;