聂克[1]2000年在《脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及黄芪的调控作用研究》文中进行了进一步梳理胃泌素以其重要而广泛的生理作用成为研究得最多的胃肠激素，并被最早应用于中医领域的研究。胃泌素除具有传统的促进胃酸分泌作用外，还是胃肠道和其他组织的生长因子，现在更倾向于认为刺激生长是胃肠道胃泌素的最重要功能。已有的资料表明，胃泌素与脾虚证关系密切，脾虚病理过程中胃泌素水平处于紊乱状态。我们在国内首次建立了大鼠胃壁细胞分离方法，建立了壁细胞胃泌素受体放射配基结合法，尝试从壁细胞表面胃泌素受体、胞内第二信使水平入手探讨脾虚证的本质以及益气健脾中药的细胞水平的作用机制。1.大鼠胃壁细胞分离方法的建立 利用Pronase-EDTA消化翻转的大鼠胃袋以游离胃粘膜细胞，利用Percoll线性密度梯度作为介质以富集壁细胞，所得壁细胞纯度在65％以上，台盼蓝排除法测得细胞活率大于92％。首次在国内分离到纯度较高的大鼠胃壁细胞，为壁细胞相关研究提供了较理想的实验工具。2.大鼠壁细胞胃泌素受体放射配基结合法的建立与方法学考察 以~(125)I-[Leu~(15)]-gastrin17-I为标记配基，以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备，在国内首次建立了大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验 歪克：脾出大鼠同区蛔胞同泌月受体及中殇黄苗的词控作用研究方法．反应体系总体积为 200ul，37T恒温水陇荡孵育 30min．yX 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基．经 L i gand浮序进行非线性拟合，Scatchard作困求出胃泌素受体结合饨Bmax回4．4604 x 10－“M，Ld吕1．249x 10－‘M．单点法求出特异结合位点数 703．＂ites／cell．细胞浓度在0．25刁 x 10七 ＊／L范围内，与标记配基特异性结合容量成正比．同一样品特异结合量测定方法变异系数为7．04儿符合受体结合实验方法学要求。竞争抑制实验证明“订Gastrin与大鼠胃壁细胞受体制备结合特异性良好。3．m大瓦＠细胞胃况受体及黄茂的调节作用船 利用我们建丘的壁细胞胃泌素受体放射配基结合法，研究发现大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌十受体结合容量明显低于正常（P硼．01）；经中药黄芭治疗后，胃泌素受体结合位点数显天回升，与模型组比较有非常显著差异（P北．01）。椎测胃泌素受体可能参与了脾虚证的病理过程，调节胃泌素受体结合容量可能是中药黄氏发挥健脾益气作用的细胞水平的新机制。4．m大鼠羹k砧浆游离匆离子水早o茂的调节作用研大 采用Fura刁／AM ＆光分光先度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下胞内第H信使钙离子水平（［Ca“］i），尝试从胞内信使水平阐释脾虚证的本质以及健脾益气方药的作用机理．研究发现，大黄脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下［CS‘”］i 明显低于正常大鼠（P＜0．01），胃泌素刺激后K‘”＊升高幅度亦明显低于正常组＊d．01）和模型组Od．01八 黄蔑治疗组大鼠静息状态下壁细胞［Ca‘“］i 比模型组略有升高，但无统计学意义O刊．05厂 这可能与我们造模程度较重有关．胃泌素刺激下黄蔑治疗组壁细胞K‘“D明显升高，其数值及升高幅度明显高于模型组O＜0．05， 一2 一 广州中医药大学2000届博士学位论文 P刊．01人 其升高幅度与正常组比较无明显差异＊＞O．05L腑大鼠胃壁 细胞静息状态下和胃泌素刺漱下Ka‘”D aP显低于正常大鼠，说明在脾虚 证的病理过程中壁细胞功能处于一种低代谢状态，推测胞内钙库容量可 能降低，而且壁细胞表面胃泌素受体结合位点数下调或／和功能下降，不 能正常介导胞外信号。健脾益气中药黄茁能够使低下的胞内代谢水平有 一定程度恢复，胞内钙库客量有一定增大，并能使胃泌素受体数上调和／ 或功能加强，这可能是黄蔑健脾益气作用的一个细胞水平的新机制。 综合文献资料和我们的研究结果，我们推测壁细胞胃泌素受体可能 参与了脾虚证的病理过程，脾虚证很可能是一种胃泌素受体相关性疾病； 调节壁细胞胃泌素受体及胞内第二信使水平，可能是黄蔑发挥益气健脾 作用的细胞水平的新机制。我们设想，通过进一步的临床和实验研究， 有可能通过受体调节开辟一个治疗脾胃病证的新的途径和方法，同时也 会为从中药中开发受体激动剂和桔抗剂提供新的思路．这对于中医药理 论的发展和指导临床实践，以及中药的现代化都将会产生深远影响．
张根水, 王汝俊[2]2002年在《脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察》文中提出目的 :观察脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数的变化以及中药黄芪注射液对其的调控作用。方法 :脾虚模型采用利血平方法 ,治疗组给予黄芪注射液 ;大鼠胃黏膜壁细胞分离与纯化采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化 ;壁细胞胃泌素受体结合位点数 (sites cell)的检测采用放射配基结合方法。结果 :利血平脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数为 2 71 2± 91 8,明显低于正常组 (6 19 1± 30 4 5 ,P <0 0 5 )。中药黄芪注射液对其有显著上调作用 (5 45 2± 2 0 5 3,P<0 0 1)。结论 :利血平脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数下降 ,中药黄芪注射液对其有明显上调作用 ,胃泌素受体与脾虚证关系密切。
黄可儿, 李燕舞, 王汝俊, 王建华[3]2006年在《黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究》文中研究指明观察黄芪总苷(AST)对脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数变化的调控作用。【方法】SD大鼠采用胃饲大黄液(10g／kg)方法复制脾虚模型;采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化法分离与纯化大鼠胃粘膜壁细胞;按10、 20、30 g／L设AST低、中、高剂量组,在每2mL脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST20μL体外孵育,并设正常对照组与模型组;采用放射配基结合法检测壁细胞胃泌素受体结合位点数。【结果】模型组壁细胞胃泌素受体结合位点数下降,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0．05);AST高剂量组可上调胃泌素受体结合位点数,与模型组比较具有显著性差异 (P<0．05)。【结论】黄芪总苷可增加脾虚模型大鼠因脾虚而降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数,可能是黄芪发挥益气健脾作用的主要有效成分(部位)。
张根水[4]2001年在《脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体信号传递与中药作用研究》文中认为前言和目的 胃泌素受体及其受体后信号传递是国际胃肠病学界研究的热点，国内从八十年代初开始将胃泌素与中医脾虚证结合起来研究，但直到九十年代才将其深入到受体及受体后信号传递水平。赵军宁、聂克博士的研究初步表明脾虚证胃泌素受体及受体后信号传递系统功能低下，以下研究是在此基础上进一步延伸，观察脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数、钙调素（CaM）和钙/钙调素依赖性蛋白激酶（Ca~(2+)/CaM-PK）活性的变化，以及中药黄芪注射液对其的调整作用。研究中医脾虚证在胃泌素受体及其受体后信号传递上的表现，目的以探讨脾虚证与胃泌素受体及其受体后信号传递的关系。 方法 ①用大黄和利血平两种方法复制脾虚证模型，治疗组动物给予黄芪注射液治疗。②胃泌素受体研究采用经典的放射配基结合法；③CaM活性观察采用北京刘景生在国内首先建立的PDE法；④根据Ca~(2+)/CaM-PK活性与特异性底物磷酸化成正比而研究其活性。 结果 ①两种脾虚模型组动物外观体征与中医脾虚证临床所见较为吻合，治疗组外观体征也有不同程度的改善。②利血平脾虚组胃泌素受体结合位点数（sites/cell）下调至271.2±91.8，明显低于正常组（619.1±304.5，P＜0.05）。中药黄芪注射液对其有显著上调作用（545.2±205.3，P＜0.01）。③正常大鼠胃壁细胞内钙调素活性（ng/mg Pr）为16.99±8.57，而大黄和利血平脾虚模型其活性明显（P＜0.05、P＜0.01） 广州中臣药大学硕士研究生毕业怆文下降至8．20fi．N和6．45L2．38，经黄蔑注射液治疗后钙调素活性上升分别达12．76t4．29、m．73f4．42，与各自模型组比较有明显升高（P＜0．05），与正常组比较差异无显著性（P＞0刀5人④大黄、利血平脾虚大鼠胃壁细胞内 Ca》／CaMPK 11活性…mol／mi…分别为 40．41土 18．32、34．10 t9．03，均明显低于正常组77．56土14．90（P＜0．of），中药黄蔑注射液对其有明显上调作用，大黄、利血平模型黄蔑治疗后分别达 64．83土 15刀9、53刁5士5．83，己明显高于各自模型组（P＜0刀5）。 的相色 结合以前赵军了、聂克博士的研究结果，课题组在脾虚大鼠壁细胞上初步观察了胃泌素受体、CaZ”、CaM、Ca‘”／CaM－PK等多项指柯，得到了比较一致的结呆。初步可以肯定胃泌素受体及受体后信号传递的功能下调是脾虚证的一个重要病理表现，对该信号传递系统的调整为益气健脾中药发挥药理作用的重要机理之一。
李燕舞[5]2005年在《补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号传导调控研究》文中提出胃肠激素受体及受体后信号转导与调控是在分子水平对复杂机体中单个细胞内及细胞间相互交流信号的研究,是当今生命科学研究的前沿课题。业已证实,脾虚证与胃泌素关系密切,脾虚大鼠胃粘膜及壁细胞胃泌素受体结合容量显著降低,不少调理脾胃方药对胃泌素及胃泌素受体有显著的调节作用,脾虚证很可能是胃泌素受体相关性疾病。本次实验研究应用放射配基结合法与跨膜信息转导机理研究新技术,系统研究脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体表达方式与磷酯酰肌醇通路信号转导规律变化以及益气健脾方药党参、白术、补中益气汤的调控作用,对于探讨脾虚证与胃泌素受体的关系,阐明脾虚证病理机转规律及健脾方药药理作用均有重要意义。 1大鼠胃壁细胞的分离纯化 细胞分离的方法通常有两种:机械分离法和酶分离法。不同种属的动物及不同类型的蛋白水解酶对细胞分离效果影响迥异,胶原酶能够成功分离狗、豚鼠、兔胃的黏膜细胞,而链酶蛋白酶(Pronase)对分离大鼠胃黏膜细胞很有效,这种酶具有广泛的消化作用,与EDTA联合使用作用更加突出。本次实验采用Pronase-EDTA酶消化法分离大鼠胃壁细胞。脱颈椎处死大鼠,取胃制作翻转胃袋并注入消化酶溶液。经过消化90分钟——分散50分钟——离心收集来完成大鼠胃粘膜细胞的分离过程。大鼠胃壁细胞的纯化采用40%和60%percoll非连续密度梯度离心法。结果:即时分离的胃粘膜细胞活度经台盼兰排除实验鉴定可达到90%以上,HE染色鉴别壁细胞纯度达到70%,在0～4℃环境下22h后细胞活度仍可达70%～80%左右。大鼠壁细胞分离及纯化方法步骤明确,操作熟练,在本实验室条件下可达到较稳定的结果。 2补脾方药对脾虚大鼠壁细胞超微结构的影响
梅武轩[6]2008年在《胃黏膜壁细胞及胃泌素受体与中医药的相关研究》文中认为就近年来国内外对胃黏膜壁细胞及胃泌素受体与中医药的相关研究作一简述,认为目前有关研究多局限在实验研究阶段,且以动物实验为多,需要深入进行疾病模型的研究和临床研究,并发掘中医药优势,通过调节壁细胞相关功能及受体表达来达到改善胃黏膜病理变化的作用。
李军伟[7]2009年在《肺表面活性物质和SlgA在中药黄芪、党参、桔梗归经方面的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:基于“证-药效-药性”模式,通过观察归肺经的黄芪、党参、桔梗,不归肺经的丹参对肺气虚动物模型肺表面活性物质和分泌性免疫球蛋白含量影响的可能性差异,探讨中药归经现象。方法:以肺气虚大鼠模型为研究对象,观察黄芪、党参、桔梗、丹参对“肺主宣发肃降”的指标—肺表面活性物质水平、肺主卫气指标—分泌性免疫球蛋白的影响,以及肺朝百脉的指标—血清NO水平的影响,探讨中药不同功效与特定的物质基础的相关性。结果:桔梗对“肺主宣发肃降”的指标—肺表面活性物质影响较大;黄芪、党参对分泌性免疫球蛋白的作用明显优于桔梗;丹参在对肺朝百脉的指标—血清NO含量的影响上占优势,但与黄芪、党参差异无显著性;基于统计结果和粘膜免疫的考虑,肺与大肠相表里与粘膜的主要免疫分子SIgA有一定的相关性。说明中药不同的功效对应肺内不同的物质基础。丹参在肺朝百脉的功能意义上也归肺经。结论:基于“证-药效-药性”模式,依据中药功效的深入理解结合现代肺生理研究探讨归经的物质基础,是一种切实可行的思路和方法。
参考文献：
[1]. 脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及黄芪的调控作用研究[D]. 聂克. 广州中医药大学. 2000
[2]. 脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察[J]. 张根水, 王汝俊. 中国中医基础医学杂志. 2002
[3]. 黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究[J]. 黄可儿, 李燕舞, 王汝俊, 王建华. 广州中医药大学学报. 2006
[4]. 脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体信号传递与中药作用研究[D]. 张根水. 广州中医药大学. 2001
[5]. 补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号传导调控研究[D]. 李燕舞. 广州中医药大学. 2005
[6]. 胃黏膜壁细胞及胃泌素受体与中医药的相关研究[J]. 梅武轩. 中华中医药学刊. 2008
[7]. 肺表面活性物质和SlgA在中药黄芪、党参、桔梗归经方面的实验研究[D]. 李军伟. 山东中医药大学. 2009