袁林1 张华素2
（1达州市中心医院 四川 达州 635000）
（2达州市药品检验所 四川 达州 635000）
【摘要】 目的：利用HPLC测定溴茄口服溶液中颠茄酊的含量。方法：采用Agilent XDB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm），以乙腈-磷酸盐缓冲液（12：88）为流动相；流速为1ml/min，柱温为35℃，检测波长为210nm。结果：硫酸阿托品在102.6ng～2052ng范围内线性关系良好；平均回收率（n=6）为99.94%。结论：该方法为溴茄口服溶液的质量控制提供实验依据，该方法具有准确、专属性、重现性好的特点。
【关键词】溴茄口服溶液；颠茄酊；硫酸阿托品；HPLC
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）14-0053-02
Content determination of belladonna tincture from tribromide and belladonna oral solution Yuan lin .The Central Hospital of Dazhou, Sichuan, Dazhou, 635000,China; Zhang Huasu. Institute for Drug Control in Dazhou , Sichuan, Dazhou, 635000,China
【Abstract】 Objective The content of belladonna tincture in tribromide and belladonna oral solution was determined by HPLC. Method Agilent XDB-C18 (4.6mmx150mm,5μm)was used a mobile phase of acetonitrile-phosphate buffer solution(12:88),the flow rate was 1.0ml/min,the column temperature was 35℃,detection was done at λ=210nm. Results There was good linear relationship at the ranges of 102.6ng-2052ng.The average recoveries(n=6) were 99.94%.Conclusion This method provide experimental base for the quality control of tribromide and belladonna oral solution and it is accurate,good specificity and reproducibility.
【Key words】Tribromide and belladonna oral solution;Belladonna tincture;Atropine sulfate;HPLC
溴茄口服溶液原质量标准为四川省食品药品监督管理局标准(SZBH20080097),标准中仅收载了溴化钠、溴化钾、溴化铵总量的含量测定，未对颠茄酊含量进行控制，颠茄酊中主要成分硫酸阿托品有明显的毒副作用，用量超过5mg时，即产生中毒［1］，因此必需增加对颠茄酊的含量控制。我们参照中国药典2010年版及其他相关制剂中对颠茄酊含量测定方法，采用HPLC法测定含量，通过对色谱条件的优化、筛选，以及分析方法的验证试验，确立了颠茄酊含量测定方法。
1.仪器与试药
安捷伦1260 高效液相色谱仪 （G1315D二极管阵列检测器）；CP-225D 电子天平；202-1E135 电热恒温干燥箱；样品（溴茄口服溶液）由达州市中心医院提供（批号：130325，130406，130517）；颠茄酊由广州星群药业股份有限公司提供（批号：GS30004）；对照品硫酸阿托品由中国药品生物制品检定所提供（批号：100040－2010）；乙腈，甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件［2］
色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（取6.8g磷酸二氢钾溶于1000ml水中，加入10ml三乙胺，用磷酸调节pH值至3.5）（12：88）；流速：1ml/min；柱温：35℃；检测波长：210nm。
2.2 溶液制备
样品溶液的制备：精密量取溴茄口服溶液50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相定容至10ml，摇匀，滤过，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱；对照品溶液的制备：精密称取120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品适量，加流动相制成每1ml约含0.075mg的对照品溶液，同法测定；空白溶液的制备：精密量取溴茄口服溶液空白样品50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相定容至10ml，摇匀，滤过，作为空白样品溶液，精密量取空白溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱。
2.3 方法学考察
测定波长的选择：照《中国药典》2010年版一部颠茄流浸膏的含量测定，用二极管阵列检测器，以硫酸阿托品对照液和样品液在200～300nm的波长范围内扫描，结果样品与对照品均在210nm的波长处有最大吸收。
专属性试验：精密量取溴茄口服溶液空白样品50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相定容至10ml容量瓶中，摇匀，滤过，精密量取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；见附图1。精密量取溴茄口服溶液50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相定容至10ml，摇匀，滤过，精密量取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；见附图2。
线性范围试验：精密称取硫酸阿托品对照品（105℃干燥3h）适量，加流动相使溶解并制成100ml含0.5mg～10mg的一系列溶液，取该系列标准溶液各20ul注入液相色谱仪进样分析，以对照品溶液浓度m为横坐标，峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程A=1.125m+7.0387（n=6），R2=1.0000。结果表明硫酸阿托品对照品溶液在102.6ng～2052ng范围内，对照品浓度与主峰面积呈良好的线形关系。
回收率试验：取同一批溴茄口服溶液6份各50ml，分别加入硫酸阿托品对照品（0.0812mg/ml）10ml，混匀。按含量测定方法制备样品液，依法测定含量并计算回收率，结果在该色谱条件下，溴茄口服溶液中生物碱（以硫酸阿托品计）含量测定的回收率平均为99.94%，6份的相对标准偏差(RSD）为0.69%；由此表明此方法的准确度良好。
重复性试验：精密量取溴茄口服溶液50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相使溶解并转移至10ml量瓶中，再加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；考察其重复性，峰面积RSD为1.22%，试验结果表明该HPLC方法的重复性较好。
精密度试验：分别取硫酸阿托品对照品溶液和供试品溶液各20ul，连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积的相对标准偏差。结果表明对照品溶液和供试品溶液连续6次进样的峰面积相对标准偏差（RSD）分别为0.68%和0.49%，均小于1.0%，说明本方法精密度较好
稳定性考察试验：精密量取溴茄口服溶液50ml置水浴上蒸干，残渣加流动相使溶解并转移至10ml量瓶中，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为稳定性考察用供试品溶液，分别于第0h、4h、8h、14h、24h时取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，分别测定峰面积，峰面积RSD为0.96%，结果表明供试品溶液在24小时内较为稳定，能够满足检测的要求。
耐用性试验：液相色谱法中典型的变动因素有：流动相组成比例和不同厂家的色谱柱等，其研究结果是不同色谱柱耐用性实验结果RSD为1.10%，不同流动相组成比例耐用性实验结果RSD为1.39%。
范围试验：按溴茄口服溶液中浓度的80%～120%（按处方量计算）含量测定考查。精密量取颠茄酊（GS30004）原料药2ml，2.5ml，3.0ml，按含量测定方法制备样品液，依法测定含量并计算。《中国药典》2010年版一部颠茄酊项下规定每1ml颠茄酊含莨菪碱应为0.28mg～0.32mg，溴茄口服溶液中投料50ml颠茄酊至1000ml，即100ml溴茄口服溶液中含莨菪碱应为1.40mg～1.60mg。
2.4 样品含量测定
将3批溴茄口服溶液样品作含量测定，按含量测定方法制备样品液，依法测定含量并计算，结果见表1。
3.讨论
中国药典一部采用滴定法测定颠茄酊中生物碱（以莨菪碱计）的含量，专属性较差，本法采用液相色谱法测定，专属性较高。用本法测得颠茄酊（批号：GS30004，其生物碱含量以莨菪碱计为0.28 mg/ml）5.0ml中含生物碱以硫酸阿托品计为1.30mg。由于：一、被测定物是颠茄酊中的一个成分，若按±5%投料及配制计量偏差计算，其理论最低限度可为1.24mg/100ml，最高限度可为1.58mg/100ml；二、被测成分有明显的毒副作用，应严格控制上限。故将限度调整为100ml溴茄口服溶液中含生物碱以硫酸阿托品(C17H25NO7S)计应为1.10mg～1.50mg。方法学验证试验结果表明本品含量测定方法准确、可靠，可纳入本品质量标准。
【参考文献】
[1]陈学谦,金有豫,汤光.新编药物学［M］.第15版.人民卫生出版社,2003:308.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药科技出版社,2010:397.
论文作者:袁林1,张华素2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第14期供稿
论文发表时间:2015/7/31
标签：溶液论文; 颠茄论文; 阿托品论文; 含量论文; 精密论文; 色谱论文; 硫酸论文; 《医药前沿》2015年第14期供稿论文;