（1济南大学 山东省医学科学院 医学与生命科学学院 山东 济南 250200）
（2山东大学附属山东省肿瘤医院外科五病区 山东 济南 250117）
【摘要】目的：探讨Notch1、IGF-1在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）不同基因状态下的表达及临床意义。方法：采用免疫组化SP法分别对38例EGFR野生组、47例EGFR突变组进行Notch1、IGF-1的蛋白表达检测。结果：Notch1、IGF-1在NSCLC中EGFR突变组的阳性表达率分别为59.6％、78.7％，均明显高于EGFR野生组，差异具有统计学意义（P<0.05）；Notch1与IGF-1在两组中阳性表达均呈正相关（P<0.05）。结论：Notch1与IGF-1在NSCLC各组中均表达上调，提示在NSCLC靶向药物的敏感性检测中可能起重要作用；Notch1信号高表达间接揭示为EGFR-TKIs耐药的重要因素。
【关键词】Notch1；IGF-1；非小细胞肺癌；EGFR-TKIs耐药
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）11-0101-03
Expressions and clinical significance?of Notch1 and IGF-1 in Different EGFR Gene status of Non-small Cell Lung Cancer
Tian Xufeng1, Yan Jiao1, Yang Wenfeng1.2
【Abstract】Objective To investigate the expressions of Notch-1 and IGF-1 in Different EGFR Gene status of NSCLC and their clinical significance. Methods Immunochemistry SP method was used to detect the expression of Notch1 and IGF-1 in 38 cases of EGFR wild group and 47 cases of EGFR mutant group. Results The positive expression rates of Notch1 and IGF-1 in EGFR mutant group were 59.6% and 78.7% respectively, which were significantly higher than those in EGFR wild group, (P<0.05). Meanwhile, the correlation between Notch-1 expression and IGF-1 expression was statistically significant in both groups (P<0.05). Conclusion Notch1 and IGF-1 were upregulated in NSCLC, suggesting that they may play an important role in the sensitivity test of NSCLC targeting drugs. The high expression of Notch1 signal indirectly reveals an important factor for EGFR-TKIs resistance.
【Keywords】 Notch1;IGF-1;NSCLC;EGFR-TKIs resistance
目前肺癌已成为最常见的恶性肿瘤，居全球癌症死因首位[1]。其中，约80～85%为非小细胞肺癌，且对放、化疗不敏感，手术虽然是有效的治疗方式，但因就诊时患者多为肺癌晚期而失去手术机会。近年来，肿瘤分子靶向治疗成为研究热点，且众多研究表明[2-4]，EGFR-TKI在晚期NSCLC治疗中具有重要意义，但其耐药问题也成为限制其疗效的瓶颈，而有研究证实[5]IGF-1的表达与NSCLC分子靶向治疗中的EGFR-TKI耐药密切相关。目前关于Notch1与IGF-1在EGFR不同基因状态下的表达及二者之间的耐药作用机制的研究较少。因此，本研究对Notch1与IGF-1在非小细胞肺癌EGFR不同基因状态下的表达及在在NSCLC发生发展中两者之间的作用机制进行研究，以期为精准个体化的靶向药物治疗提供参考依据。
1.对象
1.1 标本来源及处理
标本选自2015年1月到2015年12月期间山东省肿瘤医院胸外科手术切除后经病理证实的NSCLC的病理标本85例，EGFR突变组47例、EGFR野生组38例。标本离体后，生理盐水漂洗后经10%福尔马林固定后制成石蜡切块，作免疫组织化学SP染色。
1.2 病例纳入和排除标准
纳入标准：（1）标本为外科手术切除的肺部肿瘤组织，经病理学诊断为非小细胞肺癌；（2）患者入院术前均未经过放疗、化疗、分子靶向、中药治疗等治疗。排除标准：（1）诊断为肺小细胞癌和良性病变者；（2）病理分级不明确者；（3）患者经充分知情同意，排斥本研究且拒绝签署知情同意书。
2.方法
2.1 研究方法
采用便利抽样，以病例回顾的研究方法,在征得相关部门的同意并签署科研保密协议后，查阅电子病历并采用自行设计的调查表对患者临床病理资料进行横断面调查，内容包括：患者的一般资料、主要诊断及病理类型、EGFR基因状态、临床分期及有无淋巴转移等。
2.2 结果判断
Notch-1和IGF-1均以在细胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性表现，显微镜下观察并计数阳性着色细胞数[6-7]。其表达以细胞着色的百分比和强度进行判断[8]：(-)为细胞无着色, (±)为<10%的胞浆或胞膜上微弱染色, (+)10%～90%的胞浆或胞膜上中度或强染色,(++)为>90%的胞浆或胞膜上强染色。其中, (-)～ (±) 判断为阴性表达, (+)～(++) 判断为阳性表达。
2.3 统计学方法
所有数据均由Epidata3.1双人录入并采用SPASS22.0软件进行分析。EGFR不同基因状态组的组间差异比较采用卡方检验；Notch1与IGF-1的蛋白表达及其临床病理参数的比较用等级资料的秩和检验；Notch1与IGF-1之间阳性表达的关系采用Spearman相关性检验。以上均以P<0.05为差异有统计学意义。
3.结果
3.1 患者一般资料
男性38例，约占45.9%，女性47例，约占55.3%，年龄（41～83）岁，平均（60±8.85）岁；85例NSCLC中腺癌53例，鳞癌32例；淋巴转移30例，无淋巴转移55例；1期45例，2期16例，3期23例，4期1例。详见表1。
3.2 EGFR野生组与EGFR突变组中Notch1、IGF1的表达情况
表1 两组Notch1、IGF1的表达情况
4.讨论
EGFR基因状态与分子靶向药物疗效关系密切，研究其耐药机制具有重要的临床意义。已有研究表明[9]，沉默IGF-1R表达可抑制其下游PI3K/AKT和ERK/MAPK信号通路的传导，并且可逆转EMT对EGFR-TKIs的获得性耐药。目前对于Notch1在NSCLC患者EGFR-TKIs耐药中的作用机制研究较少，但鉴于Eliasz[10]等研究发现在乏氧的肿瘤微环境下，肺腺癌中Notch-1的促肿瘤生存的功能是通过激活胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）来发挥作用的。本研究将分别检测EGFR野生组、EGFR突变组中Notch1、IGF-1基因表达情况，分析两者之间相关性并进一步探讨EGFR-TKIs耐药机制。
本研究检测了47例EGFR突变型非小细胞肺癌组织和38例EGFR野生型肺癌组织中Notch1、IGF-1的蛋白表达，结果发现EGFR突变组的阳性表达率分别为59.6％、78.7％，均明显高于EGFR野生组的阳性表达率（26.3%、21.1%）；NSCLC中Notch1、IGF-1的表达均与临床分期、淋巴结转移有关，与性别、年龄无关；
杨波[11]等研究发现Notch-1 mRNA在NSCLC中阳性表达率明显高于正常肺组织；Notch-1 mRNA在鳞癌与腺癌中阳性表达率无明显差异；Notch-1 mRNA在有淋巴结转移的NSCLC组织中阳性表达率明显高于无淋巴结转移。
Eliasz[14]等研究发现抑制Notch1信号通路可导致IGF-1表达减少。染色质免疫沉淀反应实验表明Notch1直接监管 IGF-1R启动子。在人类肺腺癌细胞注入老鼠体内的实验中证实肿瘤缺氧区域的Notch-1、IGF-1R和pAkt-1共同高表达。Medyouf [12]等研究表明IGF1R是Notch1靶标，并且需要Notch1信号传导以在T-ALL细胞中维持高水平的IGF1R表达。IGF-1通路是生长因子通路中一条重要的明显通路[13]，也是目前肺癌非手术治疗的研究热点，多项研究表明IGF-1异常与肺癌发生发展有关[14]。本研究发现Notch1与IGF-1在NSCLC中阳性表达呈正相关，提示Notch1和IGF-1信号通路可能并非两条独立的促肿瘤通路，两者之间存在重要的交互作用。
5.小结
综上，Notch1、IGF-1与NSCLC发生发展密切相关，且在EGFR不同基因状态下的肺癌组织中阳性表达均具有相关性。多项研究表明IGF-1与EGFR-TKIs耐药相关，但Notch1与EGFR-TKIs耐药机制的研究较少。本研究通过分析Notch1与IGF-1分相关性表达，间接揭示了Notch1高表达可能是EGFR-TKIs耐药的重要因素。希望为晚期非小细胞肺癌的分子靶向药物治疗提供新思路，也为多靶点药物研究提供一个可行方向。
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基金项目：山东省自然科学基金项目（编号：ZR2011HL028）
论文作者:田绪锋1,焦言1,杨文锋1.2（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2017年4月第11期
论文发表时间:2017/4/28
标签：肺癌论文; 细胞论文; 阳性论文; 靶向论文; 基因论文; 组织论文; 突变论文; 《医药前沿》2017年4月第11期论文;