【摘要】 目的 探讨在乳腺癌中人类表皮生长因子受体HER－２/neu和拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)之间的关系,及其与临床病理因素之间的相关性. 方法 利用实时定量聚合酶链式反应(RQ－PCR)对９６例患者进行检测来评估基因扩增水平,采用免疫组织化学(IHC)微阵列(n＝ ７６)来检查基因扩增和蛋白质表达水平之间是否存在相互关系.结果 根据RQ－PCR或IHC微阵列取得的HER－２/neu基因状态,TOP２A 基因的扩增水平并不存在显著差异.结论 我们的研究结果表明乳腺癌中TOP２A 基因的扩增并不局限于带有HER－２/neu＋ 基因型的人,并且表明很大比例的HER－２/neu－ 基因型患者表现出具有高水平的TOP２A 基因. 【关键词】 乳腺癌;拓扑异构酶;表皮生长因子;TOP２A;HER－２/neu 【中图分类号】R７３７【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－１２５６－０１
自１９７５年以来,以蒽环类药物为基础的化疗方案与标准方案CMF相比更优越,但是仍有一些因素影响着化疗的效果[１].目前p５３,BRCA１,人表皮生长因子受体HER－２/neu,和拓扑异构酶II(TOP２A)已被作为蒽环类药物在乳腺癌中潜在的生物靶点来研究,特别是后两者,在研究中显示出各自重要的意义[２].一项对于四个大型III期临床试验的荟萃分析显示,与非蒽环类药物为基础的化疗方案相比[３],TOP２A 扩增的患者能从以蒽环类药物为基础的化疗方案中更为获益.通过这个方法来识别患者是否能从蒽环类药物为基础的化疗方案中获益,来避免患者使用蒽环类药物带来的不良反应.
１ 材料与方法
１．１ 一般资料 收集广西壮族自治区肿瘤医院乳腺外科２０１０ 年２ 月至２０１２年９月的乳腺浸润性导管癌患者９６例,全部为女性,均经过术后病理检测证实;年龄３０－８４岁,术前未接受过任何治疗. １．２ 方法１．２．１ 实时定量聚合酶链反应(RQ－PCR) 手术切除的乳腺肿瘤组织, 立即快速冷冻.以下实验由广州永诺生物科技有限公司完成.制备组织匀浆提取RNA.加入适量体积(２０－３０ul)的DEPC水溶解RNA,５８℃ 水浴１０分钟后取出２ul定量,测量buffer:１０mM TrisCl(pH７．８),根据定量结果进行逆转录.Hema９６００基因扩增仪进行扩增,Bio－Rad,MiniOpticon 检测RQ－PCR.１．２．２ 组织微阵列(TMA) 选１０ 名患者样本进行HER－２/neu以及TOP２A 免疫组化染色(按表１).HE 染色切片用来确定肿瘤区域.然后针对各病例,采用组织微阵列从单个蜡块中获取组织芯(直径０．６mm).最初的８２个病例中,只有７６名病例出现在阵列中,因为肿瘤块太薄或肿瘤区域太小或不能在肿瘤块上进行准确标记而剔除.TMA 中的切片被切成３．５~４μm,置于载玻片上.经组织微阵列仪来进行免疫染色.对TOP２A 评分,针对各病例情况,首先在２０倍放大镜下对癌细胞数量进行计数.若在２０倍镜下癌细胞并不清晰可见,则分成四个象限４０倍镜下进行计数,然后将这些象限进行相加,以便提供总细胞计数.然后再次采用２０倍或４０倍镜通过经过抗体处理的载玻片来对阳性细胞进行计数;阳性细胞占总细胞的百分比即为TOP２A 指数.
２ 结果
２．１ 实时定量聚合酶链反应(RQ－PCR) 在临床上分类为HER－２/neu ＋ 和HER－２/neu－ (p＝ ０．４７５)的患者中,TOP２A 的扩增水平无显著差异(图１).对此研究结果的调查发现,４８名HER－２/neu－ 患者中１４名(２９．１％)的TOP２A 水平高于第三个四分位数(记录:TOP２A ＞１．３３)(图２). 同样,４８名HER－２/neu＋ 患者中１１名(２２．９％)的TOP２A 水平退回到第一个四分位数(记录:TOP２A ＜０．６２),因此表明扩增水平低. 在ER＋ 和ER－ (p ＝ ０．１２５)或PR＋ 和PR－ (p ＝ ０．６８８)患者中,TOP２A 的扩增水平无显著差异.此外,内在亚型(p ＝ ０．５３６)中TOP２A 的扩增水平无差异,与DFS或OS或其他临床病理变量相关的TOP２A 也未发现差异. 图１:TOP２A(采用RQ－PCR确定)与HER－２/neu状态(采用IHC和FISH 确_______定)扩增水平之间的关系.在临床上分类为HER－２/neu＋ 和HER－２/neu－ 的患者中,TOP２A 的扩增水平无显著差异.图２:相对于HER－２/neu状态的TOP２A 水平.４８名HER－２/neu－患者中,１４名(２９．１％)的TOP２A 水平高于第三个四分位数.同样,１８名HER－２/neu＋ 患者中,１１名(２２．９％))的TOP２A 水平退回到第一个四分位数,因此表明扩增水平低.
２．２ 组织微阵列(TMA) 采用IHC和FISH 临床评估的HER－２/neu状态与TMA 评分(r＝ ０．６１４;p＝ ０．０００)确定的HER－２/neu状态之间呈显著相关.IHC和FISH 分类为HER－２/neu－ 的６０名患者中,TMA 评定１４名(２２．９％)被归类为TOP２A＋ (图３a).IHC和FISH 分类为HER－２/neu＋ 的１４ 名患者中,TMA 评定１０ 名被归类为TOP２A ＋ . 对比采用TMA 确定的HER－２/neu状态与TOP２A 状态时得到了类似结果,即５４ 名HER－２/neu０ 或１ ＋ 的患者中,１４ 名(２５．９％)被评为TOP２A＋ (图３B);其中８名患者被视作HER－ ２/neu３ ＋,７名患者被评为TOP２A＋ .图３:TMA 上评估的TOP２A 型基因以及TMA(B)上采用IHC 和FISH(A)评估的HER－２/neu型基因状态之间的关系.３ 讨论正如本文引言中所述,TOP２A mRNA、基因扩增和蛋白质表达水平之间的关系复杂.然而多次基于FISH 的分析审视了TOP２A 基因扩增与HER－２/neu基因扩增之间关系,分析指出TOP２A 基因扩增在不存在HER－２/neu基因扩增时极为罕见[３],在测量TOP２A mRNA 与蛋白质表达水平时,现有研究表明结果是矛盾的. 直到最近,对此类研究结果提出了重要异议,即TOP２A 蛋白质表达与采用FISH 测量的基因扩增不相关[８、９],但是未开展任何研究TOP２AmRNA 水平与蛋白质表达之间的关系.幸运地是,Braes等人[１０]近来证明,采用FISH 确定的TOP２A 扩增与采用IHC(p＝ ０．２８３)测量的蛋白表达不相关,相反,采用RQ－PCR 确定的TOP２A 水平与采用IHC(p ＝ ０．００１)确定的TOP２A 水平显著相关. 综上所述,TOP２ARNA 是一个强大的乳腺癌预后指标.本研究证实RQ－PCR是一种具有特别意义的TOP２A 评估技术.这表明之前未被认可的HER－２/neu－ 、TOP２A 扩增乳腺癌患者人群将会对蒽环类治疗敏感;更重要的是这表明HER－２/neu－ 、TOP２A 非扩增患者对蒽环类治疗不受益. 总之,本文的研究结果表明不存在HER－２/neu型基因时,很大一部分乳腺癌患者群体会扩增或过量表达出TOP２A 型基因.这些在采用了RQ－PCR评估基因扩增时证明有必要进一步研究HER－２/neu基因和TOP２A 基因之间的关系,否则这些生物标记与蒽环类化疗方案有效性之间存在的潜在重要关系不会达成一致. 参考文献[１] DeLenaM,BrambillaC,MorabitoAetal．Adriamycinplusvincristinecomparedtoandcombinedwithcyclophosphamide,methotrexate,and５－fluorouracilfor advanced breastcancer．Cancer １９７５;３５:１１０８[ －１１１５． ２] 杜跃耀,殷文瑾,陆劲松．DNA 拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)与乳腺癌蒽环类药物化疗敏感性的研究进展．复旦学报(医学版),２０１２mar,３９ (２),２０３－２０６． [３] ArriolaE,Rodriguez－PinillaSM,LambrosMBetal．TopoisomeraseIIαamplificationmaypredictbenefitfromadjuvantanthracyclinesin HER２positiveearlybreastcancer．BreastCancerResTreat２００７;１０６:１８１ – １８９．
论文作者:蒋奕１ 叶新青２,通讯作者 叶洪涛２ 姬逸男１ 唐玮１ 周
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/8
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