黄埔出入境检验检疫局国家酒类检测重点实验室（广东） 广东广州 510700
摘要：通过配有示差折光检测器的高效液相色谱仪检测葡萄酒中果糖、葡萄糖的含量。在色谱柱为氨基柱，流动相为乙腈+一级水=76+24，流速为0.8mL/min，检测池温度为40℃的检测条件下，果糖、葡萄糖均呈良好的线性关系，其检出限分别为0.10g/L、0.16g/L，定量限分别为0.37g/L、0.50g/L，回收率范围分别为90.81%~97.96%、90.40%~97.96%，精密度良好。
关键词：高效液相色谱；果糖；葡萄糖；葡萄酒；示差折光检测器
葡萄酒中含糖量是葡萄酒酿造工艺中发酵后剩余的糖，是判断葡萄酒类型的重要指标，也是改进葡萄酒酿造工艺的重要因素[1]。目前，检测葡萄酒的含糖量主要是用斐林试剂滴定法测定酒中的总糖和还原糖，还原性糖包括果糖和葡萄糖。斐林试剂滴定法不能对果糖、葡萄糖分别定量，且斐林试剂需要现用现配，有一定的局限性。本方法采用高效液相色谱法，具有简便、准确、可大批量检测的优点，适用于葡萄酒中果糖和葡萄糖的检测。
1.材料和方法
1.1仪器和设备
LC-20A高效液相色谱仪配示差折光检测器（RID-10A），日本岛津；固相萃取装置，安谱；真空泵，恒奥；电子天平，梅特勒-托利多。
1.2试剂
果糖标准品（纯度99.0%），葡萄糖标准品（纯度99.0%），一级水，色谱纯乙腈，C18固相萃取柱（6mL，500mg）。
1.3方法
1.3.1标准曲线的配制
1.3.1.1 果糖、葡萄糖混合标准溶液：分别准确称取0.500g果糖标准品（纯度99.0%），葡萄糖标准品（纯度99.0%）至同一个25mL容量瓶中，用一级水定容至刻度后摇匀，配制得到20.0mg/mL果糖、葡萄糖混合标准溶液。
1.3.1.2 果糖、葡萄糖混合标准工作曲线：将20.0mg/mL果糖、葡萄糖混合标准溶液用一级稀释，配成浓度分别为0.1、2.0、4.0、6.0、10.0mg/mL混合标准工作曲线，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液进样检测。
1.3.2葡萄酒样品的制备：准确量取20.0mL均匀葡萄酒样品，根据需要决定稀释倍数。样品稀释液过预活化的C18固相萃取柱（活化方法：用5mL甲醇和5mL一级水活化），弃去初始流出的滤液大概4~6mL，再收集滤液2mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液进样检测。
1.3.3色谱条件：示差折光检测器，氨基色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），检测池温度40℃，流动相为乙腈+一级水=76+24[2]，流速为0.8mL/min，进样量为20μL。图1为果糖、葡萄糖标准品的色谱图。
1.3.4检出限和定量限
由于没有找到阴性的葡萄酒样品，所以本方法果糖、葡萄糖、蔗糖的的检出限和定量限是通过计算获得。选取具有代表性的葡萄酒样品，按上述样品前处理方法处理后，上机得到各葡萄酒样品噪音的平均值(N值)，取3倍N值比标准物质的峰高所相对应的浓度为检出限，取10倍N值比标准物质的峰高所相对应的浓度为定量限。
1.3.5回收率和精密度
在15%乙醇水溶液的模拟空白样品中添加适当浓度，检验回收率。选取干型、半干/半甜、甜型葡萄酒三类葡萄酒品种，重复进样6次，计算精密度。
2.结果和讨论
2.1标准曲线：在配制的浓度梯度的每个浓度点重复进样检测2次，数据记录及处理。以峰面积对进样浓度（mg/mL）进行线性回归，绘制标准曲线。果糖的线性方程为y=194110.1x-8034.11，R=0.9999；葡萄糖的线性方程为y=188923.8x-7747.11，R=0.9999。结果证明果糖、葡萄糖在0.1~10g/L的检测范围内线性良好，满足检测需求。
2.2检出限：选取干型葡萄酒、半干/半甜葡萄酒、甜型葡萄酒三种具有代表性的葡萄酒样品，按上述样品前处理方法处理后，上机得到各葡萄酒样品噪音的平均值N值=314。分别以果糖、葡萄糖、蔗糖的峰高为y轴，浓度为x轴绘制标准曲线，根据检出限的峰高为3N，定量限的峰高为10N，得到的果糖、葡萄糖、蔗糖的检出限分别为0.10g/L、0.16g/L，定量限分别为0.37g/L、0.50g/L。
2.3回收率和精密度
2.3.1回收率：在模拟空白样品中添加果糖浓度分别为0.37g/L、3.7g/L、10g/L，葡萄糖浓度分别为0.50g/L、5.0g/L、10g/L，每个浓度重复进样6次，检验回收率。经试验得，果糖的回收率范围为90.81%~97.96%，葡萄糖的回收率范围为90.40%~97.96%，RSDR为0.269%~0.932%，方法的准确度较高。
2.3.2精密度：选取干型葡萄酒、半干/半甜葡萄酒、甜型葡萄酒三种具有代表性的葡萄酒样品，重复进样6次，检验精密度。经试验得，RSDr为1.257%~5.051%，方法的重复性精密度良好。
3.结论
综上所述，在色谱柱为氨基柱，流动相为乙腈+一级水=76+24，流速为0.8mL/min，检测池温度为40℃的检测条件下，果糖和葡萄糖均呈良好的线性关系，葡萄酒样品检测的重复性和精密度均满足检测需求。试验证明，该方法可适用于日常葡萄酒中果糖和葡萄糖含量的检测。
参考文献：
[1]葛宝坤，杨爽，俞子萱，等.直接稀释-液相色谱法快速测定葡萄酒中的甘油和糖[J].食品研究和开发，2014，35(8):79-81
[2]田艳铃，王浩，刘艳琴，等.HPLC示差折光分析法测定饮料中果糖、葡萄糖、蔗糖含量[J].中国食品添加剂，2006(6)：187-189
论文作者:陈琼华
论文发表刊物:《基层建设》2017年6期
论文发表时间:2017/6/27
标签：果糖论文; 葡萄糖论文; 葡萄酒论文; 样品论文; 回收率论文; 标准论文; 精密度论文; 《基层建设》2017年6期论文;