（德阳市人民医院 四川 德阳 618000）
【摘要】目的：探究食管鳞癌中IDO的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法：收集我院食管切除患者的肿瘤组织及其癌旁组织，用免疫组织化学法和荧光定量PCR法检测样本中的IDO、VEGF的m RNA、蛋白质的表达情况，分析IDO与肿瘤血管形成之间的关联。结果：检测样本中的VEGF和IDO水平显著盛高，与患者的肿瘤侵犯深度、TNM分期、淋巴结转移、分化程度相关（P<0.05）。结论：食管鳞癌中IDO的表达与肿瘤血管的形成有关。
【关键词】食管鳞癌；IDO；表达；肿瘤血管；相关
【中图分类号】R730 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）15-0070-02
Expression of IDO in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with tumor angiogenesis
Huang Lei, Wu Jianqiang, Han Bing.
Deyang People's Hospital, Sichuan Deyang,618000
【Abstract】Objective To investigate the expression of IDO in esophageal squamous cell carcinoma and its relationship with tumor angiogenesis. Methods Tumor tissues and cancer in our hospital from esophageal resection tissues by immunohistochemistry and fluorescence quantitative PCR method to detect the samples of IDO, VEGF m, RNA protein expression, correlation analysis between IDO and tumor angiogenesis.Results The levels of VEGF and IDO in the samples were significantly higher than those of the patients with tumor invasion depth, TNM stage,lymph node metastasis and differentiation (P<0.05).Conclusion The expression of IDO in esophageal squamous cell carcinoma is related to the formation of tumor vessels.
【Key words】 Esophageal squamous cell carcinoma; IDO; Expression; Tumor; Correlation
IDO是吲哚胺2,3-双加氧酶，它是在肝脏外部唯一一种可以催化色氨酸沿犬尿酸途径分解的限速酶。近些年来，随着科学技术的不断发展和进步，有研究发现IDO在多种肿瘤的出现以及侵袭中有着密不可分的关系[1]。但是目前国内仍缺乏对IDO在食管鳞癌患者体内蛋白表达、功能测定的更为深入的研究。因此，本研究将通过高校液相色谱法着重研究食管鳞癌患者外周血微环境中的色氨酸、犬尿氨酸的代谢情况来反应外周血各类免疫细胞中的IDO活性的改变。通过荧光定量PCR法探讨外周血单个细胞内IDO的mRNA的蛋白质表达的改变。为进一步了解外周血微环境中色氨酸代谢途径与食管鳞癌患者肿瘤血管的形成之间的关系，为寻求新的、有效的免疫抑制治疗策略提供可靠的依据。
1.资料与方法
1.一般资料
随机选择我院2015年9月—2016年10月间接收的实行肿瘤切除手术的患者50例，且这50例患者在病理学诊断中均确定为食管鳞癌。本组50例患者中，男性患者32例，女性患者18例，患者年龄35～80岁，患者平均年龄为（56.5±2.3）岁，所选患者在手术之前的3个月内均未进行过化疗和放疗。样本选择上面取每例患者食管鳞癌原发灶组织以及距离癌灶边缘3～5厘米之间的癌旁组织。在获取样本以后，立即将所取样本放置于液氮中，另取一部分的标本放置在零下80℃的超低温冰箱中进行储存，以便于今后提取RNA，再取一部分标本之余4%的中性甲醛中固定住，常规制作成蜡块对标本进行保存。根据国际抗癌联盟（UICC）第七版标准对食管鳞癌患者进行分期，患者可以分为：Ⅰ期患者10例（20%），Ⅱ期患者17例（35%）、Ⅲ期患者22例（45%）。根据世界卫生组织肿瘤病理学分级标准对本组50例患者进行分级：其中低分化患者12例（24%），中分化患者18例（36%），高分化患者20例（40%）。本次探究中的临床资料的收集、标本的获取均取得了患者及其家属的同意。
1.2 荧光定量PCR法检测IDO和VEGF m RNA蛋白质表达
使用TRIzol试剂直接一步对RNA进行提取，然后利用紫外分光光度计对RNA的浓度以及纯度进行测定，选择出D260/D230＞2.0和D260/D280＞1.8的两段RNA来用于此次探究中的分析工作。使用已经提取的1μg总RNA作为模板，将RNA反转录为cDNA，再用cDNA为模板扩增VEGF和IDO，而后就将扩增出的GAPDH作为对比参照物。PCR的总体系一共有20μl，c DNA的模板为1μl，在这之中基因的上下游的引物各为1μl，使用立即使用型霉Taq酶10μl和双蒸水7μl进行反应。
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1.3 PCR产物的分析
在2%的琼脂糖凝胶板加入8μl PCR产物进行电泳（电压120V，电流60mA,时间30分钟），使用gel-pro analysis 3.1系统对其进行照相扫描，而后进行吸光度值的分析工作。将目的基因的吸光度值和此次获得的吸光度值进行比较[2]，将结果作为目的基因mRNA的蛋白质相对表达水平。
1.4 利用免疫组织化学法对IDO及VEGF的表达情况进行测定
使用免疫组织化学SP二步法进行染色，结果由两位病例医师分别进行对结果进行判定。在基因的表达中VEGF和IDO两种基因均会表达在细胞胞质中，且是阳性并呈现为黄色染色颗粒。其中阳性的划分标准未，每张切片中阳性细胞占全片的比例和强度进行计分：一、≤5%为0分，＞5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分；二、重色强度记分：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，两者乘积为最终判定标准：0分表示阴性，≥1分为阳性，其中1～2分为阳性（+），3～4分为中等阳性（++），≥5分为强阳性（+++）[3]。
1.5 统计学方法
本次探究的统计学方法选用SPSS21.0统计软件，其中计量资料使用（x-±s）来进行表示，而基因阳性表达率指教的比较使用χ2检验，不同基因间的相关性分析运用Pearson检验，基因表达水平采用Wilcoxon符号秩检验，若是P＜0.05，则差异具备统计学意义，若是P＞0.05则差异不具备统计学意义，但是其具有可比性[4]。
2.结果
2.1 IDO和VEGFm RNA的表达水平
与旁癌组织相比，在食管鳞癌患者的组织中的IDOmRNA的表达水平和VEGF m RNA的表达水平均有了显著的提升。
2.2 IDO和VEGF两种基因在食管鳞癌和旁癌组织中的表达
IDO和VEGF两种基因的表达主要在细胞质中，个别的在细胞膜内和细胞核中也含有少量的表达，具体呈现为黄色染色颗粒。在旁癌组织中IDO表达率为38.25%，VEGF蛋白的阳性表达率为47.56%。在肿瘤组织中IDO的阳性表达率为65.34%，VEGF蛋白的阳性表达率为68.56%。肿瘤组织中的IDO、VEGF蛋白表达明显高于旁癌组织，其差异具备统计学意义（P＜0.05）。可以得出在肿瘤组织中IDO和VEGF蛋的阳性表达之间呈现正相关。
2.3 IDO、VEGF蛋白表达与患者临床病理特征的关系
通过对比分析，得出IDO、VEGF蛋白表达与患者的年龄、性别无关，但是和患者肿瘤侵犯深度、TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关。
3.讨论
食管鳞癌是目前临床上较为常见的一种消化道肿瘤，现在这种肿瘤的发病机制尚且不够明确，可能受到了多种因素的影响。
人体免疫的耐受性在肿瘤的发生、转移以及发展过程中均起到了至关重要的作用。而IDO基因介导出来的色氨酸代谢更是被认为是免疫抑制反应和众多外周耐受的内源性机制之一。IDO基因可以显著的抑制NK细胞和T细胞的活化、增殖，同时还可以诱导CD4+T细胞转变为Treg细胞，以及募集调节性T细胞。因此IDO基因广泛的存在于多种肿瘤引流区淋巴结合肿瘤组织中。因为IDO可以减弱人体抗肿瘤的免疫能力，同时帮助肿瘤逃避免疫系统的攻击，若是高水平的IDO更是可以帮助肿瘤向淋巴结转移。
研究结果显示IDO蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率显著高于旁癌组织，而且荧光定量分析结果显示在食管鳞癌患者的癌组织中的IDO基因的mRNA的表达水平也要显著高于患者的旁癌组织。
VEGF是管内皮生长因子，且是目前发现的最强的内皮细胞选择性促血管生成因子，几乎在所有的肿瘤中均有表达，其有助于促进肿瘤免疫细胞的迁徙、肿瘤新生血管的生成以及炎性因子的生成，它也在肿瘤的转移和发展过程中起着重要的作用。除此之外，VEGF还是唯一可以诱导肿瘤血管形成、刺激血管内皮细胞分裂增殖的细胞因子。研究结果显示，VEGF蛋白的表达在食管鳞癌癌组织中的表达率也显著高于旁癌组织。
通过此次探究可以得出在肿瘤组织中IDO和VEGF蛋的阳性表达之间呈现正相关，这个结果与结肠癌的试验结果是一致的，它的机制就是通过诱导，进而产生了Treg，促进了VEGF表达水平的提升，还可以通过VEGF的一个依赖机制促进新生儿血管的形成。另外得出IDO、VEGF蛋白表达与患者的年龄、性别无关，但是和患者肿瘤侵犯深度、TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关。这就说明了VEGF基因在食管鳞癌的侵袭和转移中有可能起到了非常重要的作用。
因此在今后的临床研究中需要对这两种基因进行进一步的研究，为食管鳞癌患者的靶向治疗和生物治疗提供可靠的参考依据。
【参考文献】
[1]董淑晓，訾力，亓健.原发性胃鳞癌的临床病理特点[J].中国临床医生，2011(11).
[2]周扬，高静，贾兴旺，向荣，田亚平.鳞癌相关抗原在鳞癌及相关良性疾病中的临床意义[J].标记免疫分析与临床，2010(03).
[3]崔永，常栋，吴炳群，段新春，侍管，龚民，王天佑食管鳞癌中上皮细胞黏附分子蛋白高表达与临床病理特征的关系[J].肿瘤防治研究，2015(09).
[4]邹玉凤，李旭丹，白信花，孙岩，王亦飞，武艳.肺硬化性血管瘤36例临床病理分析[J].中国实验诊断学，2015(09).
论文作者:黄磊,吴建强,韩冰
论文发表刊物:《医药前沿》2017年5月第15期
论文发表时间:2017/5/27
标签：肿瘤论文; 患者论文; 食管论文; 组织论文; 阳性论文; 基因论文; 血管论文; 《医药前沿》2017年5月第15期论文;