【摘要】目的：分析高危型HPV分型和蛋白表达于宫颈病变诊断的作用。方法：将我院纳入的宫颈疾病患者作为实践对象，观察不同类别患者检测结果。结果：HPV高危型阳性宫颈病变中，检验13种高危型亚型，表现出不同宫颈病变HPV分型结果一致。HPV阴性宫颈炎及宫颈癌组织中的P16蛋白表达阳性率具有明显差异。讨论：本次实践表示宫颈疾病病情加重，P16蛋白表达指标递增，HPV分型及p16蛋白检测能够判定宫颈疾病严重程度，对疾病诊断具有重要意义。
【关键词】高危型HPV分型；p16蛋白表达；宫颈病变；诊断
Clinical significance of High risk HPV typing and p16 protein expression in diagnosis of Cervical lesions
Li Chunxia
Sichuan Guang'an 638500, Sichuan Provincial Maternal and Child Health Hospital, Lishui County, Sichuan Province
Objective: to analyze the role of high-risk HPV typing and protein expression in the diagnosis of cervical lesions. Methods: the patients with cervical diseases included in our hospital were taken as the objects of practice, and the results of different types of patients were observed. Results among the high risk cervical lesions, 13 high risk subtypes showed the same HPV typing results in different cervical lesions. The positive rate of P16 protein expression was significantly different in HPV negative cervicitis and cervical cancer tissues. Discussion: this practice indicates that the increased expression of P16 protein in cervical diseases can determine the severity of cervical diseases by increasing HPV typing and p16 protein detection. It is of great significance for the diagnosis of diseases.
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）19-0001-02
宫颈癌为世界范围内女性典型疾病，为恶性肿瘤之一，具有高发病率及死亡率特点，使女性生命健康受到严重威胁。随着宫颈癌发病率的提升，患病人群日益年轻化。据统计每年约为50万女性患有宫颈癌，其中一半女性因此疾病死亡，多数发病人员为发展中国家女性。对宫颈癌发病因素进行分析，表现出一定复杂性，现代研究表示婚姻、家庭、避孕史等为致病因素，其中感染人乳头瘤病毒为最大致病机制。宫颈组织病变早期诊断及预防对疾病发展具有重要意义，经病毒学筛查后使得发达国家宫颈癌患者持续减少，反映出早期筛查并采取预防措施，能够有效组织宫颈病变的产生。临床不断研究中发现100多类HPV病毒，多数产生于宫颈癌患者病灶。本次研究将对HPV及p16蛋白在不同子宫病变的表达进行分析，明确对疾病诊断的意义。
1资料与方法
1.1一般资料
将我院纳入的宫颈类疾病患者作为实践对象，其中HPV（HSIL）患者80人，慢性宫颈炎患者40人，其中阴性及阳性各20人。前者作为本次研究的观察组，后者作为本次研究的对照组，将患者宫颈阴道镜活检病理组织行p16蛋白表达检测。
1.2方法
1.2.1样本采集
观察组及对照组患者阴道镜检测中，对病理组织进行采集，并保存于石蜡组织切片上，进行p16检测。
1.2.2HPV分型检测
以导流杂交法对样本HPV进行检测，其中检测分型为21种，低危型HPV为6/11/42/42/44，为4种亚型；高危型HPV为16/18/31/33、35/39/45/51/52/56/58/59/68，为13种亚型。我国常见亚型为cp8304/53/66三种。将患者样本DNA提取后，根据相关规定开展实践[1]。
1.2.3p16蛋白表达检测
以免疫组化法行检验，将福尔马林试剂应用宫颈组织固定中，随后利用石蜡保存，将石蜡中的标本在4um标准下切片，将脱蜡清理后，据试剂规定步骤操作。4um石蜡切片处理后，利用二甲苯及乙醇脱蜡PBS冲洗3次，加入定量二氧化二氢，防止产生氧化物酶，冲洗三次后，加入特异性一抗，在37℃环境中培育120min，再次冲洗3次，树胶封片后，观察结果。
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1.3观察指标
P16蛋白表达为细胞核或者细胞质的一种，若为阴性表示阳性细胞在5%以下；若为阳性表示阳性细胞在24%-50%间，若为强阳性则阳性细胞数大于50%。
1.4统计学方法
本次实践利用spss19.0统计学软件，计数资料利用卡方检验，若p<0.05，差异具有统计学意义。
2结果
2.1宫颈病变中的高危型HPV
将采集的HPV高危型样本行检测，观察到高危型病毒为HPV52、HPV31、HPV16、HPV58，占比分别为18%、16%、14%、14%；高危HSIL前几名的病毒类型为HPV16、HPV52、HPV58、HPV31，占比分别为17%、16%、14%、12%；宫颈患者高危病毒前几种为HPV16、HPV52、HPV18、HPV31，占比分别为15%、13%、12%、10%；HPV所有病毒中，前几位分别为HPV16、HPV52、HPV58、HPV31，占比分别为16.25%、15.12%、12.45%、11.77%，经卡方检测或，不同宫颈疾病的HPV分型结果一致，差异不具统计学意义。
2.2各类别的宫颈疾病中p16蛋白表达
采取免疫组化分析后，HPV阴性慢性宫颈炎中，p16蛋白表达阳性为5例，占比为25%，HPV高危阳性宫颈炎病变中，p16蛋白表达检测为12例，占比60%。HSIL患者阳性68例，占比为85%，宫颈癌阳性为20例，占比为100%，上述数据表示，各类宫颈疾病中，p16阳性结果存在差异，病情不断加重，p16蛋白表达增加，与疾病程度直接相关。
2.3高危HPV不同疾病类型与p16蛋白表达的相关性
对13种高危病毒进行分析，p16表达结果显示出，高危分型中，p16检测阳性率在80%以上的为9种，体现出检测指标高，阳性率在50%以上，120例患者中，115例样本表现出阳性，占据总数的95.8%，结果显示p16蛋白表达据HPV高危病毒分型具有较大联系。
3讨论
人类乳头瘤病毒感染为致病宫颈癌的主要诱因，对年轻人横断面进行研究，30岁以下及18岁以上年轻人群人类乳头瘤发病率达到20%左右。国际最新研究发现，宫颈癌为人类乳头瘤病毒感染疾病，经过不断感染后，子宫组织内瘤产生病变，逐渐形成浸润子宫癌，疾病发展为量变到质变的过程，最终形成病变[2]。宫颈上皮内瘤病变自低度鳞状上皮病变过渡到HSIL为缓慢发展过程。宫颈上皮自病变初始，发展至宫颈癌一般需要近10年时间，早期诊断宫颈癌病变并合理治疗能够防止宫颈癌的产生，使疾病的发病率及死亡率有效控制。现阶段对于宫颈病变诊断一般集中在相关病原体组织或者细胞表达中，比如病毒蛋白及DNA检测，病毒数量在宫颈疾病中具有实际意义。据相关研究显示，p16蛋白研究已经取得一定成效，但系统研究缺少，比如p16蛋白是否与HPV高危型有直接关联，是否对于不同疾病的表达具有差异性[3]。本次实践中观察到HPV高危分型与p16蛋白表达在不同宫颈疾病中显现出差异性。
宫颈组织病变早期诊断及预防对疾病发展具有重要意义，经病毒学筛查后使得发达国家宫颈癌患者持续减少，反映出早期筛查并采取预防措施，能够有效阻止宫颈病变的产生。相关研究显示，HPV为宫颈癌发病的重要诱因，在本次研究中阳性率在90%以上，HPV病毒无法培养，血清分析较为困难，所以DNA检测及分子检测成为诊断的主要方式，常用的为杂交捕获法及聚合酶链反应，在定量检测过程中，能够对超过10种的亚型有效分型，保障检测效率。本次研究中，采取导流杂交法对120例患者进行分析，患者疾病类型为HPV阴性宫颈炎及HPV高危阳性宫颈炎及宫颈癌[4]。结果显示出，HPV高危阳性样本中存在13种高危型，病毒数量最为的为HPV16、HPV52、HPV58、HPV31，与国际组织相关研究案例结果一致。分子方式较为敏感，能够有效对宫颈疾病病原体进行检测，无法做到微观评估。开发新的诊断方式对疾病控制具有重要意义，HPV感染上皮细胞组织为临床研究的重点，也是防治癌病的重点，尤其是宫颈癌，人们对HPV感染人类细胞肿瘤转化进行深入研究，能证明p16蛋白表达对HPV细胞转化有直接影响，该研究的发展为疾病诊断开辟新的渠道，能够显示诊断的准确性。以往研究中，p16蛋白被提取标志物，能够有效鉴别发育不完全的细胞组织，近期研究报告中验证p16蛋白在子宫上皮病变中数量表达增加，呈现出瘤变过程的正相关。本次研究中，对样本进行免疫化分析，表现出p16蛋白在不同宫颈疾病的差异性，在高危HPV蛋白样本中，所表现的结果强烈，随着患者病情的持续加重，p16蛋白表达增加，体现出HPV高危型分型与p16表达的相关性，说明本次实践结果可信度较高。
综上所述，本次实践患者，重要人类乳头瘤病毒为HPV16、HPV52、HPV58和HPV18，疾病在持续发展过程中，病毒感染程度持续增加，p16蛋白在HPV高危型宫颈病变中表达增加。两者在检测过程中都能够对宫颈疾病预防有显著效果，对后续治疗有实际意义。但本次实践患者数量较少，实践过程存在一定缺陷，在后续的实践中，应当对多数患者进行实践，使实践结果的准确度进一步提升。
参考文献
[1]李克红,丁杰,张苑平,江碧艳,王军,温达雄.高危型HPV感染对宫颈病变组织中P53蛋白表达的影响[J].中国医药科学,2018,8(11):110-112+187.
[2]胡春艳,朱根海,邢艾文,崔开颖,陈集敏,程范华.高危型HPV分型和p16蛋白表达在宫颈病变诊断中的临床意义[J].现代肿瘤医学,2018,26(10):1577-1581.
[3]张丽鸯,吕杰强.液基薄层细胞学联合高危型人乳头瘤病毒检测诊断宫颈癌及癌前病变的价值[J].中国妇幼保健,2017,32(15):3670-3672.
[4]赵海燕. 绝经后妇女宫颈高危HPV感染及宫颈病变的临床分析[D].吉林大学,2017.
论文作者:李春霞
论文发表刊物:《医师在线》2018年10月19期
论文发表时间:2019/3/14
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