摘要：目的：探讨胃幽门螺杆菌（Hp）感染患者胃粘膜活检快速尿素酶试验（RUT）在基层临床诊断应用中的价值，以指导基层临床工作。方法：选取在门诊2016年1月21日－2016年4月21日收治的有消化道症状的患者中，同时应用快速尿素酶试验法以及免疫组化法诊断胃粘膜幽门螺杆菌感染的有效病例共计2485人。规定快速尿素酶试验及免疫组化法均阳性为真阳性，两者均阴性为真阴性，快速尿素酶试验阳性而免疫组化法阴性为假阳性，快速尿素酶试验阴性而免疫组化法阳性为假阴性。结果：快速尿素酶实验阳性有效病例447人;快速尿素酶实验阴性有效病例2038人。其中：真阳性者有431例，真阳性率为96.4%，假阳性16例，假阳性率3.6%;真阴性者1882例，真阴性率92.3%，假阴性者156例，假阴性率7.7%。结论：快速尿素酶试验是临床应用最广泛的侵入性幽门螺杆菌检测方法之一，具有操作方便，检测快速，灵敏度以及阳性率较高等优点，适合于基层医院开展HP感染患者初筛。但单独应用快速尿素酶试验检测幽门螺杆菌，可能会受到患者用药史、胃镜下取材部位、实验条件等多方面影响，联合组织病理学检查如免疫组化法可进一步提高其诊断阳性率。
关键词：胃部；幽门螺杆菌；快速尿素酶试验；免疫组化法
前言：1983年Marshall和Warren成功地分离出幽门螺杆菌（H.pylori）。自此之后，Hp与上消化道疾病之间的关系受到消化界学者及微生物学家的广泛关注（1）。目前研究认为，幽门螺杆菌（Hp）感染与慢性胃炎、胃溃疡、胃腺癌、胃黏膜相关性淋巴瘤等之间存在较为密切的联系（2）。在胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌患者中Hp感染率约90%。世界卫生组织已把Hp列为第一类致癌因子，明确为胃癌的危险因子（3），并曾向世界各地发出通知，要求积极开展Hp检测工作。2014年年初，由全球40余位相关领域专家参加的“幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）胃炎全球共识”会议在日本京都召开，会议达成京都共识。共识认为，Hp胃炎应该被定义为一种感染性疾病，也是一种传染病。Hp感染者应该进行根除治疗（除非有抗衡因素）。根除Hp预防胃癌的研究分析结果显示，根除Hp可降低胃癌发生风险（4）。我国是一个人口大国，根据研究显示，我国Hp感染率可以达到50%，也就是说，有将近7亿人群感染Hp。幽门螺杆菌的尽早、正确检测对于治疗方案的制定以及对于抗Hp治疗疗效的评判至关重要。就基层单位而言，如何客观分析并选择一些简便易行的Hp检测方法对于指导临床诊疗工作非常有帮助。目前，已应用于临床的检测Hp的方法有：组织病理学检查、尿素酶试验、13C及14C呼气试验、血清抗体检查、细菌培养及分子生物学方法等。
本文从门诊2016年1月21日－2016年4月21日收治的有消化道症状的患者中，同时应用快速尿素酶试验法以及组织病理学检查中的免疫组化法诊断胃幽门螺杆菌感染，探讨应用快速尿素酶试验法（RUT）检测胃幽门螺杆菌感染在基层临床诊断应用中的价值，以指导基层临床工作。
1.一般资料
对消化内科门诊2016年1月21日－2016年4月21日收治的有消化道症状的2686名患者进行研究，其中有效病例2485人。他们临床上大多表现出腹胀、腹痛、反酸、呕逆以及呕血、黑便等。为探究这些患者的胃粘膜幽门螺杆菌感染情况以及快速尿素酶试验（RUT）在临床诊断胃幽门螺杆菌感染中的价值，故对这些患者分别予快速尿素酶试验法以及免疫组化法检测。所有患者均未服用各种抗生素，排除药物和出血等影响因素，且均了解研究情况，并自愿参与研究。
2.研究方法
2.1快速尿素酶试验（RUT）检测：活检组织快速尿素酶法检测采用三明市贝真生物科技有限公司生产的胃幽门螺杆菌检测试剂盒（脲酶法）。嘱患者清晨空腹进行胃镜检查，并在检查过程中，在内镜下取病变处黏膜胃窦黏膜组织1块，利用快速尿素酶诊断试剂盒进行检测。将黏膜组织加入含有酚红的尿素酶试剂之中，于10℃～30℃下静置5min后观察最终结果，组织周围出现红色或更深至紫色者判断为快速尿素酶试验阳性，黄色即颜色无变化者定为快速尿素酶试验阴性。
2.2免疫组化法：免疫组织化学法的染液采用从北京市中杉金桥公司购买的兔抗人幽门螺杆菌免疫组织化学多克隆抗体。取内镜下病变处粘膜，立即用10%甲醛固定，送组织病理学检查，然后进行包埋、切片、染色、水洗等操作。经镜检观察：标本形状海鸥型或者为S型也有为团块状、圆颗粒状，颜色为棕褐色。小灶阳性记为+，弥漫阳性记为+++，介于二者之间记为++。
3.结果（见表1）
快速尿素酶实验阳性有效病例447人，快速尿素酶实验阴性有效病例2038人。其中：真阳性者有431例，真阳性率为431/447=96.4%，假阳性16例，假阳性率为16/447=3.6%;真阴性者1882例，真阴性率为1882/2038=92.3%，假阴性者156例，假阴性率为156/2038=7.7%。
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表1.同时用两种方法检测幽门螺杆菌结果
免疫组化（+） 免疫组化（-）
尿素酶实验（+） 431 16
尿素酶实验（-） 156 1882
4.讨论
目前临床已经开展的Hp检测方法很多，常用的有：（1）细菌培养法。该方法是诊断Hp的“金标准”，几乎无假阳性产生，同时还可做药敏试验，并可对不同菌株作遗传因子研究。但是，该方法分离培养技术条件较高，且培养时间长，而且诊断敏感性差，还可有假阴性出现，所以在基层医院临床常规开展难度较大。（2）快速尿素酶试验（rapid urease test，RUT）原理是Hp富含的高活性尿素酶可分解尿素产生氨，使pH升高，指示剂颜色发生改变。尽管尿素酶并不只是Hp所特有，但胃内存在尿素酶是Hp存在的证据之一。通常在胃镜检查时，一般钳取近幽门处的胃窦黏膜活检标本置于RUT试剂中，5min后即可通过颜色变化判定结果。快速尿素酶试验方法使用简便、检测灵敏，能在短时间内迅速判断结果，且镜检完后就可及时针对结果进行治疗。因而在临床上，快速尿素酶试验法是侵入性检测中的首选方法。（3）组织病理学检查方法：一般将通过内镜钳取的活检标本立即用10%甲醛固定，然后经常规包埋、切片、染色、水洗等处理后将组织切片放在显微镜下可以进行幽门螺杆菌的结构及分布等观察，据此可以判断是否被幽门螺杆菌感染。常用的染色方法有改良Warthin-Starry银盐染色法、改良Giemsa染色法、HE染色法、Gimenez染色法、石炭酸复红染色法、免疫组化法等。免疫组化法同其他染色方法比，染色后Hp菌体与周围组织对比度最强，最易识别，具有快捷、准确、可靠等特点。总体上看，组织病理学检测方法敏感性、特异性较高，幽门螺杆菌的阳性检出率高等特点，临床常用此方法来进一步确诊幽门螺旋杆菌感染。但是，组织病理学检测，尤其是免疫组化法也具有高价格、染色时间比较长等局限（5），而且该检测方法的顺利的开展亦需要强大的病理科支持。基层医院往往未设置病理科，或病理科实力相对较弱，故在基层医院普遍开展难度很大。（4）13/14C呼气试验。感染Hp的患者口服同位素13C或14C标记的尿素胶囊，胃内Hp产生的尿素酶催化尿素水解成NH4+和H13CO3-或H14CO3-，后者吸收入血经肺以13CO2或14CO2形式呼出，收集呼气标本并测量13CO2或14CO2，根据绝对值或超基准值大小便可判断有无Hp的感染。13/14C呼气试验不需通过胃镜取材，不受胃内Hp灶性分布的限制，是追踪Hp治疗效果的可靠标准。但呼气试验也有其一定局限性。呼气试验阳性仅仅只能表明目前是否有Hp感染，而不能证明曾否感染过。非Hp尿素酶细菌可能造成假阳性，并且13C尿素呼气试验所需质谱仪较昂贵，单次检测费用也较高，难于在基层医院普及；而14C由于其放射性，不易被儿童和孕妇接受，故该方法在基层医院开展亦有很大难度。（5）抗体检测。Hp进入人体后会产生某些特异性抗体，通过这些抗体的检测可以间接证明是否存在Hp感染。目前已有很多成熟、便捷、效果较好的商品化血清抗体检测试剂盒。抗体检测不需通过内镜取材，具有简便、快速、灵敏度高、特异性强、无需专用仪器和设备、成本低等优点，适用于大批量的流行病学调查，但不宜作为疗效判断指标，因为Hp根除后抗体水平3个月才开始下降，6～12个月尚难消失。除此之外，目前还有粪便抗原检测、以及分子生物学方法如核酸杂交、PCR法等检测方法等，但这些方法距离临床普遍推广还有一段距离。
本研究观察的是基于尿素酶依赖的快速尿素酶试验。分析结果，总体上，快速尿素酶试验真阳性率以及真阴性率均较高，提示该方法结果可靠，灵敏度高。但仍存在一定的假阳性率以及假阴性率。分析原因：（1）快速尿素酶试验是依赖Hp的尿素酶，故仅在Hp活动性感染时呈阳性。（2）非Hp尿素酶细菌，如其他相似的螺杆菌、弧菌等干扰可能造成假阳性。（3）Hp胃内灶性分布及取材的限制可能造成假阴性。（4）服用质子泵抑制剂（PPI）等抑酸药物会影响HP检测结果。PPI治疗后Hp在胃内分布可发生改变。表现为胃窦尤其是幽门口附近Hp密度减小，而胃体部Hp密度增加。所以在证实Hp根除是否成功时应在多处取活检，尤其是应该胃窦和胃体同时取活检，以避免产生假阴性结果。（5）尿素酶实验颜色判断的视觉误差。
5.结语
作为Hp的一种临床常用的检测方法，快速尿素酶法具有操作方便、检测快速、灵敏度高，以及结果可靠、阳性率高等优点，而且检测费用相对较便宜，适合于基层医院开展Hp感染患者初筛。而且，在行快速尿素酶实验的同时，可以在胃镜下观察Hp胃炎程度，并可发现其他相关性病变如肠化、萎缩，甚至早癌等。发现病变可以及时行病理活检进一步确诊，甚至镜下治疗。但是，单独应用快速尿素酶试验检测Hp，可能会受到患者用药、胃镜下取材部位、实验条件等多方面影响，联合其他检测方法如13/14C呼气试验、血清抗体检测、组织病理学等检查方法，可进一步提高其诊断阳性率。建议在条件许可时，可以联合采用多种检测方法，合理进行分析。
参考文献：
[1]王桂月，胡家君.快速尿素酶和组织病理检测幽门螺杆菌的比较.实用医学杂志.2008（10）：1851.
[2]沃千红.快速尿素酶试验与组织学诊断幽门螺杆菌的结果比较.现代医药卫生.2005（10）：1212-1213.
[3]邵军丽，吴丰.幽门螺杆菌检测方法研究新进展.胃肠病学和肝病学杂志.2012（8）：691-694.
[4]刘文忠.“ 幽门螺杆菌胃炎京都全球共识” 解读.胃肠病学学.2015（8）：449-456.
[5]刘瑾.免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的效果影响对比.中国微生态学杂志.2015（6）：735-737.
论文作者:张文江
论文发表刊物:《健康世界》2016年第18期
论文发表时间:2016/10/24
标签：尿素论文; 幽门论文; 螺杆论文; 快速论文; 阴性论文; 阳性论文; 免疫论文; 《健康世界》2016年第18期论文;