马志跃（通讯作者） 李彬 冯勇 余晓旭 樊建刚 何刚
（四川省人民医学科学院·四川省人民医院耳鼻咽喉头颈外科 四川 成都 610072）
【摘要】目的：观察鼻窦炎口服液对急性鼻-鼻窦炎（ARS）大鼠Galectin-9、Tim-3的影响。方法：24只健康SD大鼠随机分空白组、模型组、鼻窦炎口服液组，除空白组外，其余两组均建立ARS大鼠模型，造模成功后的第2天起开始给药，鼻窦炎口服液组以10ml/kg灌胃，空白组、模型组以5ml/kg无菌水灌胃，连续7d后处死，采样待检。HE染色观察鼻黏膜病理组织学变化；ELISA检测血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR检测鼻黏膜Galectin-9、Tim-3mRNA表达。结果：鼻窦炎口服液组可有效改善组织病理损伤；鼻窦炎口服液组较模型组明显将低IgE、IL-4含量及Galectin-9、Tim-3mRNA表达，明显升高IFN-γ含量（P＜0.01）。结论：鼻窦炎口服液可调节ARSGalectin-9、Tim-3表达。
【关键词】急性鼻-鼻窦炎；鼻窦炎口服液；半乳糖凝集素9；T细胞免疫球蛋白结构域分子3；大鼠
【中图分类号】R765.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）07-0041-02
Effect of Sinusitis Oral Liquid on expression of galectin-9 and its receptor Tim-3 in rats with acute rhinosinusitis
Ma Zhiyue(Corresponding Author),Li Bin,Feng Yong,Yu Xiaoxu,Fan Jiangang,He Gang.
Sichuan Academy of Medical Sciences,Sichuan People's Hospital,Chengdu,Sichuan 610072,China
【Abstract】Objective To observe the effect of sinusitis oral liquid on Galectin-9 and Tim-3 in acute rhinosinusitis (ARS) rats.Methods Twenty-four healthy SD rats were randomly divided into blank group,model group and sinusitis oral liquid group.The other two groups were established with ARS rat model except the blank group.The drug was administered on the 2nd day after successful modeling. The sinusitis oral liquid group was intragastrically administered at 10 ml/kg.The blank group and the model group were intragastrically administered with 5 ml/kg sterile water.After 7 days,the rats were sacrificed and sampled.The histopathological changes of nasal mucosa were detected by HE staining.The levels of serum IgE,IL-4 and INF-γ were detected by ELISA.The expressions of Galectin-9 and Tim-3 mRNA in nasal mucosa were detected by RT-PCR.Results The sinusitis oral liquid group could effectively improve the histopathological damage. The sinusitis oral liquid group were significantly increased the low IgE,IL-4 content,Galectin-9 and Tim-3 mRNA expression,and were significantly increased the IFN-γ content (P＜0.01).Conclusions Sinusitis oral liquid can regulate the expression of ARS Galectin-9 and Tim-3.
【Key words】Acute rhinosinusitis;Sinusitis oral liquid;Galectin-9;T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3;Rats
急性鼻-鼻窦炎（acute rhinosinusitis，ARS）临床表现为流脓涕、鼻塞、头昏等，严重影响患者日常生活[1]。Galectin-9/Tim-3已被证实可调控炎症反应[2]，因此，分子水平探讨Galectin-9、Tim-3与ARS发病关系，为预防和治疗ARS具有重要临床意义。鼻窦炎口服液已被证实对ARS具有有效性[3]。因此，本实验从鼻黏膜Galectin-9及其受体Tim-3为切入点，通过动物实验观察鼻窦炎口服液对ARS大鼠细胞因子及Galectin-9、Tim-3的影响，了解其对局部炎性病理改变的调节作用及机理，为临床研究提供理论依据。
1.资料与方法
1.1 实验动物与分组
24只健康SD大鼠，雌雄各半，200±10g，购于成都达硕实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（川）2015-030。实验动物随机分为空白组、模型组、鼻窦炎口服液组，每组8只，清洁级实验室饲养。
1.2 大鼠ARS模型构建
大鼠适应性喂养1周后，参考文献[4]报道的方法造ARS模型：腹腔注射10%水合氯醛（4.5ml/kg）麻醉，整个过程保持无菌操作。在大鼠右侧鼻腔用眼科镜置入修剪好的医用海绵，随即滴入0.1ml金黄色葡萄球菌悬液于医用海绵上，持续7d，造模后自由喂养，出现鼻塞、鼻腔可见黏脓性分泌物显示造模成功。
1.3 药物干预
大鼠造模成功后的第2天起开始给药，鼻窦炎口服液（重庆桐君阁药厂，批号：10090070）组以10ml/kg灌胃，空白组、模型组以5ml/kg无菌水灌胃，1次/d，连续7d。
1.4 样本采集
末次给药1h后，10%水合氯醛0.35g/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，离心取血清，4℃低温保存，待检测血清指标；剥离双侧鼻中隔黏膜，每只大鼠组织样本分成两份，一份于4%多聚甲醛固定，用于后续组织病理检测，另一份保存于-80℃，用于后续RT-PCR检测。
1.5 检测项目
将固定的鼻黏膜组织按常规方法制备石蜡切片，HE染色，镜检观察病理组织学变化；ELISA试剂盒（上海茁彩）检测大鼠血清IgE、IL-4、INF-γ含量；RT-PCR检测鼻黏膜Galectin-9、Tim-3mRNA表达。
1.6 统计学方法
运用SPSS20.0进行数据统计处理，计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，组间差异采用单因素方差分析，P＜0.05差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 病理组织观察
空白组鼻黏膜无炎症反应，模型组可见鼻黏膜水肿、充血，炎症细胞浸润，黏膜上皮坏死，鼻窦炎口服液组可见轻度水肿，炎症细胞明显减少，图1。
3.讨论
ARS多由上呼吸道感染引起，严重者易造成邻近组织、器官受累引发严重病变[1]。因此，寻找有效的治疗方案极为重要。本实验采用鼻窦炎口服液治疗ARS大鼠，病理组织考察结果表明，模型组鼻黏膜充血、黏膜上皮坏死，鼻窦炎口服液干预后炎症细胞明显减少，黏膜上皮轻度缺损，可明显减轻鼻黏膜病理损伤。
目前Th1/Th2细胞失衡被认为是发病核心，而INF-γ、IL-4分别是Th1、Th2的重要细胞因子。当Th1反应偏向Th2反应，则致IL-4分泌增加，INF-γ分泌减少，而IL-4进而上调免疫球蛋白（IgE），IgE是触发呼吸道变应性炎症的关键因素[5]。本实验结果显示模型组较空白组IgE、IL-4含量明显増加，INF-γ明显降低（P＜0.01），说明ARS发生了Th2的偏移。鼻窦炎口服液干预后IgE、IL-4含量较模型组明显降低，INF-γ含量明显增加（P＜0.01），说明鼻窦炎口服液能有效促进形成新的Th1为主的平衡。
Galectin-9-Tim-3在炎症调节中起重要作用。Galectin-9可诱导Th1极化并可阻止IgE抗原抗体复合物的形成。Tim-3可在活化的Thl细胞表面特异性表达，抑制Thl介导的细胞免疫[6]。同时，鼻黏膜局部Galectin-9、Tim-3表达与外周血IL-4、IFN-γ含量存在明显相关性，Galectin-9通过与Tim-3结合可抑制Th1免疫应答，诱导炎症因子产生，引起鼻腔黏膜水肿、鼻分泌物增加、上皮细胞损伤[7]。本实验结果显示Galectin-9、Tim-3 mRNA表达模型组明显高于空白组（P＜0.01），提示Galectin-9、Tim-3可能是导致鼻腔炎症表现的因素之一。鼻窦炎口服液干预后Galectin-9、Tim-3 mRNA表达较模型组明显降低（P＜0.01），说明鼻窦炎口服液可影响Galectin-9、Tim-3表达。
综上所述，鼻窦炎口服液可有效抑制Galectin-9、Tim-3表达，平衡细胞因子，提示Galectin-9/Tim-3参与ARS发展过程，Galectin-9/Tim-3可作为治疗ARS新的方向。
【参考文献】
[1]陈扬.菊花通圣汤治疗急性鼻窦炎（肺经风热型）的临床观察[J].中医耳鼻喉科学研究，2017(1):47-48.
[2]庞盼，李明，段亚楠，等.布鲁氏菌病患者血清中可溶性Tim-3/Galectin-9与相关细胞因子的变化[J].免疫学杂志，2017(1):54-58.
[3]黄剑英，朱立新，李红专.鼻窦炎口服液联合西药治疗急性鼻窦炎的临床观察[N].湖南中医药大学学报，2017，37(4):433-435.
[4]梁湘，贺广湘，闫鑫，等.β防御素2对大鼠急性鼻-鼻窦炎的抗炎防御作用研究[J].中国耳鼻咽喉头颈外科，2017，24(11):600-604.
[5]陈盼碧，宣锦，史林威，等.热敏灸对过敏性鼻炎大鼠血清IgE、IL-4含量的影响[J].中国现代医学杂志，2017，27(4):17-21.
[6] Madireddi S,Eun S Y,Mehta A K,et al.Regulatory T Cell-Mediated Suppression of Inflammation Induced by DR3 Signaling Is Dependent on Galectin-9[J].The Journal of Immunology,2017,199(8):2721-2728.
[7]顾广祥，夏强.Tim-3在诱导免疫耐受中的研究进展[J].微生物学免疫学进展，2017，45(4):70-74.
基金项目：四川省成都市科技局课题（2015-HM01-00172-SF）
论文作者:马志跃（通讯作者）,李彬,冯勇,余晓旭,樊建刚,何
论文发表刊物:《医药前沿》2019年7期
论文发表时间:2019/5/9
标签：鼻窦炎论文; 口服液论文; 大鼠论文; 模型论文; 炎症论文; 含量论文; 病理论文; 《医药前沿》2019年7期论文;