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摘要：目的：探讨微生物检验培养基的质量控制方法。方法：通过对培养基的购置、储存、制备、性能测试、使用方面进行质量控制措施的分析。结果与结论：重视开展微生物培养基的质量控制，可提高微生物实验室检测工作的成效。
关键词：微生物检验；培养基；质量控制
微生物实验室检测的基础是培养基的质量，其质量的好坏关系到检测的可靠性和准确性，微生物培养基专业在研制开发领域有飞速的发展，但因在国内受生产工艺的设备落后的影响，对产品没有足够的分析方法，致使成品的培养基质量不等，对整体质量水平有一定的影响。本文通过对培养基的购置、储存、制备、性能测试、使用方面进行质量控制措施的分析，旨在提高微生物实验室检测工作的成效。
一、培养基的购置
培养基购置时尽量选择质量认证的生产厂家，要求供应商提供产品质控证书。使用前首先初步评估培养基的灭菌要求、外观、PH 值、批号、选择性等，做好质量控制实验，按照培养基的标签说明的贮藏条件进行保存。
二、培养基的储存
干粉培养基应在阴凉干燥处进行储存，避免阳光直射，应在6个月内使用完毕，注意防潮。对储存中的培养基应定期做好常规检查，如首次开封的日期、容器密闭情况、内容物的外观等，若发现培养基变质的迹象，应禁止使用。
三、培养基的制备
在对培养基进行称量时为防止交叉感染的发生应用专用的角匙，在复溶水时禁止使用铁锅或铜锅，防止培养基中混入金属离子，对微生物的生长造成影响。应采用玻璃，不锈钢或铝制品，配制用水应达到标准。应对含有琼脂粉的培养基浸泡数分钟后再进行加热溶解，在加热溶解培养基时要进行充分搅拌。用沸水浴对少量培养基进行加热，以免出现沸腾溢出和烧焦。一般的培养基会采用高压蒸汽灭菌，即湿热灭菌，时间通常为15min，度数为121℃，按照生产商提供的说明和国家规定的标准对含糖或特殊培养基进行灭菌。培养基配方要求的PH 是指消毒后或灭菌后的PH 值，应采用精密酸度计进行测量，温度在25℃以下。应以特殊的胶体表面测量电极对固体琼脂培养基进行测量。不同的微生物需要不同的PH值，在培养基使用时，若需要对培养基的PH 进行调整，应用1mol/LHCL 或1mol/NaOH 进行调整，为避免对培养基的渗透压造成影响，不能对PH 进行反复调整。在培养基灭菌和调整PH 值后，待其冷却到需要的温度时迅速倾注平皿并妥善贮存。
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四、培养基的性能测试
1、外观的观察控制培养基在制备好后一般都有相应的颜色，其标准为无浑浊、澄清、无沉淀。在使用前应观察培养基有无脱水和蒸发，颜色有无发生变化。
2、污染控制选取部分每批制备好的培养基进行无菌试验或污染测试，在确定没有微生物生长的情况下才可以使用。
3、性能测试
1）菌株测试选择具有其代表种的稳定特性并能对培养基的最佳性能进行有效证明的一套菌株进行测试，菌株的选择应参考《商业性微生物培养基质量检验规程》，以卫生行业制定标准。应是标准菌株，由国际/国家标准菌种保藏中心ATCC 确定。
2）定量测试方法一般采用改良后的Miles-Misra 方法。10倍递增稀释过夜培养物和测试的菌株，把参照平板和测试平板以区域来划分并进行标记，分别在对照平板和试验平板上标记好的区域滴一滴稀释液，从最高稀释度开始，在整个1/4 区域涂满稀释液，培养18h，温度在37℃。对比较容易计数的区域计数，对生长率进行计算，公式为生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数数值/参考培养基平板上得到的菌落总数的数值。目标菌的生长率在选择性培养基上应不低于0.1，目标菌在非选择性培养基上的生长率应不低于0.7。
3）半定量测试方法一般采用经过改进后的划线接种的方法。对平板进行A、B、C、D 四区的划分，共划16 条平行线，每条线间大概有0.5cm 的相隔，在有菌落生长的每条上划线记作1 分，在有一半菌落生长的线上记作0.5 分，在生长量少于划线的一半或没有菌落生长的记作0 分，把所有的分数进行相加得到生长的基数G。非目标菌的生长应完全或部分受抑制，目标菌在培养基上应以典型的生长来呈现，培养基可接受的生长指数为目标菌的生长指数G 大于6时。
4）定性测试方法一般用平板接种的方法进行接种的观察对测试菌培养物用接种环来采取，划平行直线在测试培养基的表面，对接种后的平板按着规定好的温度和时间进行培养，目标菌有典型的菌落大小、外观和形态，呈良好的生长态势，非目标菌应是无生长和微弱生长。
五、质量控制的要点
1、检验人员。微生物检验作为比较复杂的临床试验，主要为定性试验，存在较多的主观判断，无法彻底脱离手工等环节［1］。所以在实际的微生物检验中，工作人员应严格执行相关的规章制度，加强送检标本的查对工作。加强工作人员的专业理论知识培训和专业技术教育培训，而且应定期考核，进而来测试工作人员的检验能力和操作水平。除此之外工作人员还应加强继续教育，学习新的专业技术知识，掌握新型一起的使用和维护方法，进而来不断提升工作人员的检验水平。
2、培养基。购买的培养基，应满足以下质量要求：培养基应有生产日期、有效期。不定期检测培养基的PH 值。如果培养基存在指示剂，则应保持培养基出现的颜色，其pH 值应在规定范围内。正常情况下琼脂平板所倾注的体积为15ml。培养基应在无菌生长情况下才能应用，而且应在温度为36 摄氏度的培养箱中过夜，常常抽取5%－10%的培养基进行随机高压灭菌的无菌试验。在合理的温度下对培养基进行保存，在使用时应认真观察培养基，看其有无变质、是否过期。
总之，培养基是微生物检验过程中必不可少的关键因素，而我们则需通过严格产品的采购、规范其操作以及提高从业人员水平素质等手段进一步加强其培养基的质量控制，从而有效提高其微生物检验的准确性及质量。
参考文献：
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[2]王绥家，黄宏星.微生物实验室培养基的质量控制［J］．检验医学与临床，2011，8（20）：2557－2558．
[3]钟六珍，李建煌.微生物实验室的质量控制管理方法分析［J］．临床和实验医学杂志，2012，11（15）：1249－1250．
[4]景晓敏．微生物检验培养基质量控制探讨［J］．中国实用医药，2013，8（9）：250-251．
[5]陈先德，蒋淑宏．微生物检验中培养基的质量控制［J］.中国卫生标准管理，2015，6（15）：171-172．
论文作者:张蕾
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年第3期
论文发表时间:2018/4/17
标签：培养基论文; 微生物论文; 质量控制论文; 生长论文; 平板论文; 菌落论文; 方法论文; 《中国误诊学杂志》2018年第3期论文;