高良辉[1]2000年在《同种异体大鼠肝细胞移植治疗90%肝叶切除术诱导的急性肝功能衰竭》文中研究说明目的：通过同种异体大鼠肝细胞脾内移植，探讨肝细胞移植（HT）治疗90％肝叶切除术诱导的急性肝功能衰竭（ALF）的作用及肝细胞移植时间的不同对治疗ALF的影响。 方法：参照Seglen的两步灌注法略有改动，大鼠肝细胞分离和纯化后移植给切除90％肝叶的大鼠。 结果：肝细胞产量为2.8×10~8个/克肝组织，胎盘蓝拒染法测得肝细胞活率为95％，术前3天经脾移植1千万个新鲜分离的肝细胞，可显著提高大鼠对ALF的抵抗力；其存活率显著高于手术同时行HT组及单纯行90％肝叶切除术组；组织学检查显示肝细胞在脾内保持正常的形态结构、生存良好；血清TBiL、SGPT及SGOT检测，移植组与对照组具显著性统计学差异。 结论：术前经脾HT对外科性ALF具明显疗效，HT有可能成为临床上治疗终未性肝病的一种有效手段。
管文贤[2]1999年在《1. XJ-1器官保存液的研制及TLSF_（JM）对大鼠肝、心移植急性排斥反应防治作用的实验研究 2. 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察》文中研究表明无论是肝脏移植还是心脏移植，目前都已成为治疗中末期肝病和心脏器质性病变的唯一有效手段，至今临床肝脏或心脏移植全球累计总例数都已逾6万例，并且移植疗效良好。而我国在肝、心移植领域与国外还存在巨大的差异，因此加强这一领域的研究是极其必要的。本研究的选题正是基于这样的出发点，围绕大鼠肝脏和心脏移植的模型进行了有关器官保存和免疫抑制治疗的研究；还对1例临床活体肝移植患者作了长期的随访观察，并就免疫监测与免疫抑制治疗的方法作了初步的探讨。 第一部分 有关大鼠肝脏和心脏移植模型的建立 研究一：“三袖套”法大鼠原位肝移植模型的建立 目的：在国内现有条件下探讨“三袖套”法大鼠原位肝移植的可行性。方法：以SD大鼠为对象，通过自制血管袖套、手术牵开器，按Miyata法复制大鼠原位肝移植模型。结果：经60余次预试验后行正式试验18次，术中死亡5例，术后4h内死亡4例，24h存活率50％，1周存活率11.1％。术后早期死亡原因主要为气胸、血管套接失败、出血。结论：现有实验条件下“三袖套”法原位肝移植模型难以获得稳定的长期生存率，不适合慢性实验研究。
张金卷[3]2004年在《肝干细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭的实验研究》文中研究指明背景 目前原位肝移植是治疗暴发性肝功能衰竭公认有效的方法，但严重供体短缺及费用昂贵等问题限制了其广泛应用，有些患者甚至在等待供体过程中死亡，因此迫切需要一种方法能够暂时替代补充衰竭肝脏的功能，使病人能“桥接”肝移植或自行再生恢复，肝细胞移植作为治疗暴发性肝功能衰竭的一种选择在各种动物模型及临床应用中得到广泛证实，与原位肝移植比较具有创伤小、安全简单、一肝多用、抗原性低等优点，但移植的肝细胞增殖困难及供体缺乏等问题严重困扰着肝细胞移植的发展；肝干细胞即目前所谓的肝卵圆细胞，因其强大的增殖能力及向肝细胞和胆管上皮细胞等多种组织分化潜能，作为肝细胞移植理想的细胞来源已成为研究热点，但利用肝脏来源的肝干细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭目前尚未见报道。中医中药在肝病治疗过程中积累了丰富的经验，近年来许多学者从天然中药中发现多种方剂和中药科属对肝损伤有很好的保护作用，茵陈汤具有利胆、保肝褪黄、抗炎抗菌等作用，已广泛应用于临床治疗各种肝炎。本课题分为三部分：第一部分在建立大鼠肝干细胞增殖模型的基础上分离、纯化大鼠肝干细胞，并移植治疗暴发性肝功能衰竭大鼠模型；第二部分将分离、纯化的人胎儿肝干细胞异种移植治疗SCID小鼠暴发性肝功能衰竭模型；目的是探索肝细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭的可行性、有效性及可能的作用机理，为肝干细胞移植应用于临床治疗各种终末期肝病打下坚实基础。第三部分利用加味茵陈汤治疗暴发性肝功能衰竭大鼠模型，并以含中药血清作用于肝细胞体外损伤模型，从不同水平探索本组方的保肝、降酶及促进肝细胞再生作用，以更好的应用于临床，而且为进一步研究中药对肝干细胞的影响奠定基础。天津医科大学博士学位论文产r户r，与口I、弟一首1、力、肝干细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭大鼠的实验研究 目的建立成年大鼠肝千细胞增殖模型，进一步进行肝干细胞的分离、纯化和鉴定，并移植治疗大鼠暴发性肝功能衰竭模型，以探索肝干细胞移植治疗一暴发性肝功能衰竭的可行性及有效性。方法为确定建立大鼠肝+细胞增殖模型的最佳给药剂量和时间雄性，将健康成年Wista:大鼠按二乙酞氨基荀给予剂量不同随机分为5组(5、10、15、20、25mg/kg B.W.)，按各自剂量每天一次连续灌胃处理给予二乙酞氨基菊，第5天行标准的2/3肝切除术 (手术当天不给予)，术后按术前各自剂量继续给予一乙酞氨基菊，观察动物耐受性，并于术后3、7、11、14天取病理标本，光镜及电镜下观察肝干细胞增殖情况，并进行SABC免疫组织化学染色以进一步鉴定是否符合肝厂「细胞的表型特点，并与单纯给予二乙酞氨基菊组及单纯肝切除手术组进行对照:选择15mg爪9 B.W.剂量每天一次连续灌胃处理给予二乙酞氨基菊，第5天行2/3月十切除术，术后按相同剂量继续给予11天，建立雄性大鼠肝干细胞增殖模型，以此模型为供体，利用改进的Seg】en胶原酶原位灌注及Percoll密度梯度离心分离、纯化大鼠肝干细胞，在倒置显微镜、电镜下观察细胞特点，免疫组织化学染色鉴定肝干细胞细胞标志，如甲胎蛋白、细胞角蛋白18和19、白蛋白及白细胞共同抗原，纯化的肝干细胞以DMEM培养液调整浓度lx一0621刀一于CO:培养箱培养(37OC，5%COZ)培养;雌性wista:大鼠随机分为治疗组(A组)和对照组(B组)，10%D一氨基半乳糖(1200mg/kgB.w.)腹腔一次注射诱导暴发性肝功能衰竭大鼠模型，给药24h后取培养24}:细胞悬液0.4 ml(l护细胞/ml)于肝脏中叶注射移植，对照组注射相同体积培养液，于移植前及移植后24、48、72h及lw取血测定肝功能指标如血氨、天津医科大学博士学位论文ALT、AST、TBIL，并采取肝脏标本进行病理检查，于移植后lw、Zw及4w取雌性受体原位(注射部位)、邻位(距注射部位!.SCm)川一脏组织应用PCR方法进行性别决定因子(sry)基因分析，以鉴定移植后雌性受体开卜朋一组织足否存在雄性供体肝干细胞。结果二乙酞氨基荀剂量巧mg/kgB.w.连续灌胃4天，第5天行2/3肝部分切除，后继续给予相同剂量]l天能建立较理想的仕卜「细胞增殖模型，病理切片HE染色可见汇管区及中央静脉周围大量增菊的嗜碱性小细胞，电镜下观察此种细胞具有卵圆形细胞核、细胞质少而淡、核/浆比例较大等特点，免疫组化染色证实甲胎蛋白、细胞角蛋白18和一l]9染色阳性，白蛋白及白细胞共同抗原染色阴性;以此模型为供体进行丹卜干细胞分离，所得细胞悬液经Perco”梯度离心后分为3层，在倒置显微镜下观察不同层面细胞特点，选择最底层(l .0709/m卜1 .1 10 g/]nl)细胞，特点为细胞体积较小，约为正常肝细胞1/2一1/5大小，大小不等，电镜下观察细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起，特点同肝干细胞模型片卜组织内增殖细胞，表现为原始幼稚未分化细胞的特点，免疫组化表明新分离的细胞与肝干细胞增殖模型内增殖细胞表现相同的细胞表型特点，培养2一3w内可见克隆样增殖结构形成，且细胞表面标志免疫组化染色特征无改变:平均细胞产量:(5.10士0.40)xlo6，Trypanblue拒染实验细胞活性率94.300，0土一590;0。)]{二厂细胞移植后A组(肝干细胞移植组
吴均政[4]2011年在《门静脉动脉化及腔门静脉转位术对大鼠肝切除后再生的实验研究》文中认为【目的】1、建立新的、可行的、重复性好、稳定的大鼠门静脉动脉化及腔门静脉转位模型,为研究门静脉不同灌流方式对肝脏再生的影响提供动物模型。2、探讨门静脉动脉化及腔门静脉转位术对大鼠40%肝切除后肝脏再生的影响并评价门静脉两种灌流方式对肝脏的再生作用。【方法】1、建立大鼠门静脉动脉化动物模型:以袖套法为基础,采用同种异体血管套入式缝合及袖套的方法建立大鼠门静脉动脉化模型40例。切除左肾,将左肾动脉与门静脉残端通过同种异体血管连接,左肾静脉借助袖套与肠系膜上静脉连接。术后观察外周血肝功能变化、肝脏病理改变、体重变化、术后生存率及MRI血管成像。2、建立大鼠腔门静脉转位动物模型:以袖套法为基础建立大鼠腔门静脉转位动物模型40例,在右肾静脉水平离断下腔静脉,在门静脉第1属支处离断门静脉,左肾静脉借袖套与门静脉连接,下腔静脉借双头袖套与肠系膜上静脉连接。术后观察外周血肝功能变化、肝脏病理改变、体重变化、术后生存率及MRI血管成像。3、建立40%肝切除后的大鼠门静脉动脉化及腔门静脉转位模型:在上述两种模型的基础上切除大鼠40%肝脏(左叶+乳头叶)。取100只SD大鼠,随机取90只大鼠,随机分为三组,每组30只。A组:门静脉动脉化联合40%肝切除组,B组:腔门静脉转位联合40%肝切除组,C组:对照组:行左肾及40%肝切除组。另取10只作40%肝切除后预计的剩余肝平均重量。在术后第3、7、14天,共3个时间点,每个时间点随机取10只作以下指标观察:门静脉压力、肝功能测定、残肝再生功能的评估、肝脏HE染色、Ki-67、TUNEL免疫组化染色、电镜观察。4、统计学处理:计量资料以均数±标准差(x±s)表示,使用SPSS 18.0统计软件包进行统计学分析,计量资料经正态性检验,符合正态分布计量资料采用t检验或单因素方差分析,两两比较用LSD程序进行,以P<0.05差异有统计学意义。【结果】1、大鼠门静脉动脉化模型及腔门静脉转位模型的评价两种模型均造模成功。门静脉动脉化模型组造模成功率97.5%(39/40),腔门静脉转位模型组造模成功率95%(38/40),造模成功的大鼠均存活至术后2月。术后1个月,两模型组、假手术组白蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和胆碱酯酶、体重两两比较均无统计学差异(P>0.05)。术后2个月门静脉动脉化模型组门静脉通畅率为94.9%(37/39),腔门静脉转位组门静脉通畅率为84.2%(32/38)。两模型组磁共振血管成像及病理结果均未见明显异常。2、门静脉动脉化及腔门静脉转位对大鼠40%肝切除后再生的影响2.1一般情况:A组和C组手术成功率均100%,B组手术成功率96.7%。A组门静脉压力较对照组明显升高,B组门静脉压力在术后14天明显降低。肝功能A组术后3天ALT明显降低,B组术后14天ALT明显升高,三组大鼠ALB、ALP比较均无统计学差异。A组残肝再生率在术后3、7天均明显高于对照组,B组均明显低于对照组。2.2病理:HE染色A组肝窦扩张,小叶间静脉扩张明显;B组肝细胞有较多脂肪变性及细胞凋亡,汇管区有较多淋巴细胞浸润;C组基本正常。Ki-67标记指数A组术后3天明显高于对照组,B组在术后7天明显低于对照组,但在术后14天高于对照组。肝细胞凋亡指数B组在术后3、7天均高于对照组。2.3透射电镜观察:A组可见数量较多的线粒体及双核肝细胞。B组细胞核染色质稍浓缩,粗面内质网有轻度脱颗粒现象,可见凋亡细胞。C组基本正常。【结论】1、利用同种异体的动脉血管材料行袖套法建立大鼠门静脉动脉化模型,血管通畅率高,是一个可行、稳定、操作简便、可重复性强的模型。2、利用同种异体的上腔静脉做成的双头袖套行袖套法建立大鼠腔门静脉转位模型,手术时间短、成功率高、稳定可靠,是一个可行、操作简便的模型。3、在大鼠门静脉动脉化联合40%肝切除术后的实验中,发现早期ALT较对照组降低,而胆碱酯酶、残肝再生率、Ki-67标记指数均较对照组明显升高,电镜检查示线粒体增多,表明门静脉动脉化能增强肝切除术后早期残余肝脏的能量代谢及再生能力,从而有助于提高存活率。4、在大鼠腔门静脉转位联合40%肝切除术的实验中,发现早期肝功能指标与对照组无明显差异,而残肝再生率、Ki-67标记指数均低于门静脉动脉化组,肝细胞凋亡指数则高于门静脉动脉化组,表明腔门静脉转位在行肝切除术后早期对肝脏的能量代谢及再生能力、手术耐受力均比门静脉动脉化弱。
参考文献：
[1]. 同种异体大鼠肝细胞移植治疗90%肝叶切除术诱导的急性肝功能衰竭[D]. 高良辉. 江西医学院. 2000
[2]. 1. XJ-1器官保存液的研制及TLSF_（JM）对大鼠肝、心移植急性排斥反应防治作用的实验研究 2. 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察[D]. 管文贤. 第四军医大学. 1999
[3]. 肝干细胞移植治疗暴发性肝功能衰竭的实验研究[D]. 张金卷. 天津医科大学. 2004
[4]. 门静脉动脉化及腔门静脉转位术对大鼠肝切除后再生的实验研究[D]. 吴均政. 福建医科大学. 2011