罗成元1 金桂花2 陈健龙2 南善姬2（通讯作者）
（1珲春市市场和质量监督管理局 吉林 珲春 133300）
（2延边州食品药品检验所 吉林 延吉 133001）
【摘要】 目的:建立归芍止痛胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Thermo C18（4.6×250 mm，5 ?m）；流动相为乙腈-水（13:87）；流速为0.8mL?min-1；柱温为35℃；波长为230 nm。结果：芍药苷在0～96.0?g?mL-1范围内呈良好的线性关系，且回归方程为Y=8603.3X-6646.7，r=0.9996，平均加样回收率为100.09%（n=9），RSD为0.76%。结论：所建立的方法简便、灵敏、稳定、可靠，可以用于该制剂的质量控制。
【关键词】 归芍止痛胶囊；芍药苷；HPLC；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）04-0335-02
Determination of Paeoniflorin from Guishao zhitong Capsule by HPLC
Luo Chengyuan, JIN-Guihua2, Chen Jianlong2, Nan Shanji2, Communication author2.1.Hunchun Market and Administration of Quality Supervision,Hunchun 133300,China.2 .Yanbian Institute for Food and Drug Control,Yanji 133001,China.
【Abstract】Objective: To establish the method for determination of paeoniflorin in Guishaozhitong capsule by HPLC. Methods:HPLC method was adopted.The determination was performed on Thermo C18（4.6×250 mm,5 ?m）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（13:87）at the flow rate of 0.8 mL?min-1.The column temperature was 35℃ and detection wavelength was 230 nm.Results: The liner range of paeoniflorin was 0-96.0 ?g?mL-1 and the standard curve was Y=8603.3X-6646.7,r=0.9996.The average recovery of paeoniflorin in Guishaozhi- tong capsule was 100.09 %(RSD 0.76%)(n=9).Conclusion:The method is simple, sensiitive, stable, reliable,and can be used for the quality control of paeoniflorin in component preparation.
【Key words】Guishao zhitong capsule; Paeoniflorin; HPLC; Content determination
归芍止痛胶囊是由赤芍、当归和白芷等15味药材制成的复方制剂。具有活血化瘀，理气通络，消肿止痛的功能。可用于各种跌打损伤，症见淤血肿痈、局部皮色青紫、疼痛夜甚、痛处不移、舌紫暗苔薄白或边有瘀点、脉涩等症。赤芍为归芍止痛胶囊的君药，赤芍中的活性成分芍药苷，具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。本文采用HPLC法，建立芍药苷含量测定方法，具有分离效果好，操作简便，精密度良好，结果准确可靠，能够较好的控制该产品的质量。
1.仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC-2010 AHT型高效液相色谱仪（包括：四元汞，真空在线脱气机，紫外-可见光检测器， LC-SOLUTION色谱数据工作站, 自动进样系统）；KQ-500DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。
芍药苷对照品（供含量测定用，批号110736-201136；纯度为94.9%）由中国食品药品检定研究院提供；归芍止痛胶囊（批号分别为 20131001，20131101，20131102）由吉林省敦化市中医院提供；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷的对照品5mg，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成0.2mg/mL的芍药苷对照品的储备液（实际0.192mg/mL）。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取归芍止痛胶囊（批号：20131102）内容物粉末约0.25g，置于锥形瓶中，精密加入甲醇25mL称定重量，超声处理(功率500W，40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。
2.3 阴性样品溶液的制备
按处方组成及该制剂工艺，制备缺赤芍的阴性样品，按照“2.2”项下的方法，制成缺赤芍的阴性样品溶液。
2.4 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱：Thermo C18（4.6×250mm,5?m）；流动相：乙腈-水（13：87）；
流速：0.8mL?min-1；柱温：35℃；波长：230nm。分别精密吸取“2”项下的三种溶液各10?l，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。结果阴性样品在赤芍对照品相同保留时间位置上未见色谱峰，说明处方中的其他成分对赤芍测定无干扰，结果见图1。
2.5 线性关系考察
分别精密量取芍药苷对照品储备液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成浓度分别为0μg/mL、19.2μg/mL、38.4μg/mL、57.6μg/mL、76.8μg/mL、96.0μg/mL的系列标准溶液。按上述色谱条件测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=8603.3X-6646.7，R2=0.9996,结果表明浓度在0～96.0μg/mL范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取芍药苷对照品溶液（浓度为57.6μg?mL-1），按上述色谱条件，连续进样6次，并纪录峰面积，计算其峰面积的RSD为0.45%，表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
精密称取6份同一批归芍止痛胶囊（批号：20131102），每份约0.25g,按上述样品测定方法进行含量测定，测定结果的RSD为0.58%，表明该方法重现性良好。
2.8 稳定性试验
取“2.7”项下的供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，12，24 h按上述色谱条件测定，测得峰面积的RSD为0.34%。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.9 加样回收率试验
采用加样回收法，精密称取9份已知含量同一批号归芍止痛胶囊（批号：20131102，含量为5.509mg/g）粉末，约0.12 g，分成三组，分别精密加入用甲醇配制的三种浓度的芍药苷对照品溶液（22.24μg/mL、30.04μg/mL、33.28μg/mL）各25 mL，制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，平均回收率为100.09%，RSD为0.76%（n=9），表明回收率良好。（见表1）
表1 加样回收率试验结果
4.结论
本文采用HPLC 法，通过确定检测波长，对两种流动相；三种提取方法、提取时间及提取溶剂进行了考察，并进行了方法学验证。结果表明，文中所述的色谱条件及制备方法，具有专属性强，精密度、重现性好，准确度高等优点，可作为该制剂的质量控制。
图1. 高效液相色谱图
（A.阴性对照色谱图；B.芍药苷对照品的色谱图；C.供试品的色谱图）
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论文作者:罗成元1,金桂花2,陈健龙2,南善姬2（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2016年2月第4期
论文发表时间:2016/5/21
标签：芍药论文; 色谱论文; 赤芍论文; 溶液论文; 精密论文; 含量论文; 胶囊论文; 《医药前沿》2016年2月第4期论文;