王太宇[1]2001年在《Hsp90在热诱导Jurkat细胞凋亡中功能的初探》文中研究说明当人体细胞处在“升温”(＞37℃)的条件下，即受到热休克或称热应激的影响。“热”作为一种外界物理诱导物，经细胞表面受体或通过其他方式的介导，将信息传入核内，从而调节基因的特异性表达。热休克与细胞周期和细胞凋亡密切相关。在临床上已将局部热疗作为某些肿瘤治疗或放疗的辅助手段。但细胞热应激的本质及机理尚有待揭示。 热休克蛋白家族成员中的分子量为90kD的热休克蛋白(Hsp90)是真核细胞中最丰富的蛋白质之一。Hsp90能使在热休克等应激反应中积累的误折迭蛋白再折迭，并可促进已变性的蛋白质降解。Hsp90还参与激素受体、其他转录因子、信号途径和翻译起始阶段的激酶及一氧化氮合酶的成熟、胞内转运和活性调节。因此Hsp90在真核细胞中有着广泛而重要的功能。但迄今为止鲜见关于Hsp90在热休克诱导的细胞凋亡中功能研究的报道。 本论文首先对热休克诱导Jurkat细胞凋亡的条件进行了研究，包括不同的热休克温度及热休克时间诱导细胞凋亡的情况。在此基础上观察了持续性热休克、短时间热休克及恢复过程对细胞凋亡相关蛋白及Hsp90表达的影响；用cDNA点阵分析的方法研究了热休克引起的基因表达谱的变化以及Hsp90功能的抑制剂格尔德霉素geldanamycin(GA)对热休克后基因表达谱的影响。然后研究了GA在热休克诱导的细胞凋亡中的作用。最后应用反义基因表达技术，建立了内源性Hsp90β低表达的细胞株，并对Hsp90在热休克诱导的细胞凋亡中的作用机制进行了初步的探讨。 1．不同热休克条件对Jurkat细胞凋亡的影响 42℃热休克1h没有造成明显的细胞凋亡，而42℃热休克2h多聚核糖腺苷二磷酸聚合酶(PARP)蛋白出现明显的断裂，热休克后恢复过程中亚二倍体细胞逐渐增多，DNAladder逐步明显。45℃热休克15min后恢复过程中同样出现上述现象。说明42℃热休克2h和45℃热休克15min可以诱导细胞凋亡，并且45℃15min比42℃2h更为强烈地诱导细胞凋亡的发生。
张业[2]2000年在《抑癌基因产物p53在热休克蛋白基因表达调控中的作用》文中研究说明热休克蛋白作为分子伴侣在细胞应激和蛋白质折迭过程中起重要作用。哺乳动物细胞中，Hsp90参与细胞信号传导，激素应答以及转录调控等过程。Hsp90即有高组成性表达又有诱导性表达，其调控机制极其复杂。因此，研究它的表达调控机制，不仅有利于我们进一步阐明其生物学功能，也为研究可诱导表达的真核基因表达调控机制建立了良好的模型。Hsp90有两个拷贝，Hsp90α和Hsp90β。二者由不同的hsp90α和hsp90β基因所编码。两种基因不同于其他hsp的是均包含有内含子和一个相对较小的，不编码的第一外显子。我们已经报道过二者的转录调控机制明显不同。研究hsp90β基因的转录调控发现其第一内含子主要参与热诱导调控，核心启动子、5′上游序列和第一内含子AT丰富区为组成性表达所必须，第一外显子在其调控中也起到非常重要的作用。 p53蛋白是一种反式作用因子，可以通过其特异的DNA结合位点或者通过与其他蛋白相互作用，对其下游基因起到反式激活或反式抑制，进而引起细胞周期阻滞或细胞凋亡，在基因组稳定性方面起到重要的保护作用。另一方面Hsp90作为细胞中一种特异的分子伴侣在保护细胞免受外界环境导致的损害中起重要作用。这样，两种在细胞应激过程中具有相反作用的重要的细胞效应物对于维持正常细胞代谢的动态平衡至关重要。研究二者的相互作用具有重要的理论和实用价值。为此，我们研究了野生型p53在hsp90基因主要是hsp90β基因表达调控中的作用，以及Hsp90在p53依赖性细胞凋亡中的作用。 1．野生型p53抑制hsp90β基因的表达 利用野生型p53真核表达质粒与hsp90β基因上游调控序列驱动的荧光素酶报告基因(hsp90β1.11)共转染Jurkat细胞，发现野生型p53能够以剂量依赖性方式抑制hsp90β基因的启动子活性。转染突变体p53(V143A)真核表达质粒则无此效应。
吴健民[3]2003年在《PKC对Jurkat细胞中hsp90基因表达调控的研究》文中进行了进一步梳理在细胞应答热休克过程中最早期的事件是将胁迫信号从细胞表面传至细胞内，从而诱导热休克蛋白的合成使细胞产生对热的耐受性。Hsp90是热休克蛋白家族中一类独特的、含量丰富的并对细胞存活必不可少的胞质蛋白。它参与调节包括基因转录、细胞信号转导、细胞生长、发育、凋亡等许多重要的生理过程。因此研究参与热休克诱导的hsp90的基因表达的信号转导途径将有助于对Hsp90在热胁迫中的分子功能的理解。蛋白激酶C(PKC)是一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它不仅在将外界刺激信号从细胞表面传至细胞内的过程中起了关键的作用，同是也是许多信号转导途径的一个中央枢纽。它还可调节许多生物功能包括细胞增殖、分化和凋亡等。本研究则主要探讨了PKC和热休克蛋白Hsp90在热休克应答过程中两者之间的关系。 本论文首先观察了PKC对热休克诱导的Jurkat细胞中hsp90基因表达的调节，包括了不同的PKC抑制剂对热休克诱导的hsp90的mRNA水平和启动子活性的影响。在此基础上进一步观察了热休克对Jurkat细胞中的PKC在细胞中定位的影响。然后将显性负突变PKC-ε质粒(DN-PKC-ε)和组成性活化PKC-ε质粒(CA-PKC-ε)等真核表达质粒瞬时转染到Jurkat细胞中，通过竞争性RT-PCR的方法证实PKC-ε在热休克诱导的hsp90β的基因表达中起了一个关键的作用。最后应用免疫共沉淀的方法观察了PKC-ε和Hsp90β是否存在直接的相互作用。此外，根据Hsp90不同的功能结构域一系列的hsp90的真核表达亚克隆和原核表达亚克隆被构建成功，为进一步研究PKC对Hsp90β的磷酸化打下基础。 1．PKC抑制剂GF1096203X对热诱导的hsp90基因表达的影响 用经典型PKCs(cPKCs)和新型PKCs(nPKCs)的抑制剂GF109203X处理Jurkat细胞中，只有热诱导的内源性hsp90β的mRNA水平呈现出剂量依赖性的抑制作用，而热诱导的内源性hsp90α的mRNA水平则几乎不受影响。瞬时转染了含hsp90的启动子的报告基因表达质粒(hsp90β_(3,1)-CAT或hsp90α_1-CAT)和转染内参照质粒(pM-CAT)的Jurkat细胞，经GF109203X处理后，热诱导的hsp90β基因的启动子活性受到抑制，其受抑制情况与上述热诱导的内源性hsp90β的mRNA水平受抑制情
蔡亚非[4]2005年在《奶牛热应激的细胞免疫调控及其分子机理研究》文中指出本研究目的在于揭示与奶牛热应激相关的细胞免疫调控及分子机理。通过全血自动分析仪分析热应激奶牛外周的各项生理指标;流式细胞术分析热应激奶牛外周淋巴细胞的细胞周期及凋亡率;半定量RT-PCR分析外周淋巴细胞HSP70mRNA、HSF1mRNA、BC1-2mRNA和Bax-αmRNA基因表达水平;荧光定量PCR分析Bax-αmRNA基因表达;PCR-SSCP技术分析HSP70基因5’-侧翼区SNPs;pET-32a-c(+)表达bHSP70蛋白,并分析了了bHSP70生物活性。研究结果如下: 1 热应激对奶牛外周血各项生理指标的影响 全自动血细胞分析仪分析日平均气温分为37.5℃(高温)、26.5℃(临界高温)和5.5℃(对照)条件下奶牛外周白细胞总数(White blood Cell,WBC)、淋巴细胞总数(lymphocyte,LYMPH)、中性粒细胞(granulocyte,GRAN)、单核细胞(mid-cell,MID)、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、单核细胞百分比(MID%)、中性粒细胞百分比(GRAN%)、红细胞计数(red blood cell,RBC)、血红蛋白含量(hemoglobin,HGB)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、红细胞比积(hematocrit,HCT)、平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)、红细胞分布宽度(red cell distribution width,RDW)、血小板计数(platelet count,PLT)、平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)及血小板比积(platelet-crit,PCT),等各指标的变化规律。 研究发现白细胞计数(White blood cell,WBC)(14.75×10~9/L)和红细胞计数(red blood cell,RBC)(3.85×10~(12)/L)在高温37.5℃时最低,随温度下降而逐步上升。RBC和血红蛋白(hemoglobin,HGB)在37.5℃最低,随温度降低逐步升高,相对于其它两个温度差异显着;红细胞平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)在26.5℃最高(18.82pg),相对于其它温度差异显着。红细胞平均血红蛋白浓度(mean Corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)和MCH水平在高温下明显高于对照组。
参考文献：
[1]. Hsp90在热诱导Jurkat细胞凋亡中功能的初探[D]. 王太宇. 中国协和医科大学. 2001
[2]. 抑癌基因产物p53在热休克蛋白基因表达调控中的作用[D]. 张业. 中国协和医科大学. 2000
[3]. PKC对Jurkat细胞中hsp90基因表达调控的研究[D]. 吴健民. 中国协和医科大学. 2003
[4]. 奶牛热应激的细胞免疫调控及其分子机理研究[D]. 蔡亚非. 南京农业大学. 2005