1.岳阳市一人民医院 湖南岳阳 414000；2.湖南中医药大学第一附属医院 湖南长沙 410007
【摘 要】目的 本实验探讨醋炙乌药水提取物对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型血流动力学的影响。方法 采用大鼠离体心脏模型，复灌注后实时监测血流动力学指标包括：左室舒张末期压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室收缩压最大变化速率（+dP/dtmax）、左室舒张压最大下降速率（-dP/dtmin）。结果 与模型组相比，醋炙乌药水提取物组能降低LVEDP，提高LVDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax。结论 醋炙乌药水提取物对大鼠离体心脏有一定的保护作用。
【关键词】醋炙乌药；水提物；离体心脏
乌药 Lindera aggregata（Sims）Kosterm. [L.strychnifolia（Sieb.et Zucc.）F.-Vill]. 为樟科山胡椒属植物乌药的干燥块根，其性辛、温，归肺、脾、肾膀胱经，具有行气止痛，温肾散寒等功效。现代研究表明，乌药化学成分含有生物碱类、黄酮及其苷类、挥发油、倍半萜类及其内酯、鞣质等，主要具有镇痛抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗氧化、调节消化系统和心血管系统等药理活性[1]。乌药经炮制后，其化学活性基础物质和药理药效都会有不同程度的影响，主要表现在改善化学活性物质的溶出及增加其含量或产生新的活性成分等方面。
我们课题组一直致力于研究炮制乌药成分及药理作用[2-4]，为了探讨醋炙乌药水提物是否能改善心肌缺血再灌注损伤，本次研究利用Langendorff方法来证实这个现象。本研究可为醋炙乌药的临床应用与新用途开发提供实验依据。
1 材料
1.1 仪器
ZH-LF离体心脏灌注设备，RM6240生物信号采集系统。
1.2 试药
乌药饮片：将购自浙江台州乌药生品，经鉴定为樟科植物乌药的干燥块根；Krebs-Henseleit标准溶液（标准成分mM：NaCl 118.5，NaHCO3 25.0，KCl 4.8，KH2PO4 1.2，MgSO4 1.2，glucose 11，CaCl2 2.5），该溶液用95% O2 /5% CO2 的气体饱和（pH 7.4，37 ℃）。
1.3 动物
Wistar大鼠50只，雄性♂，体重约（300±20）g，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，许可证：SCXK（湘）2016-0002。
2 方法
2.1 醋炙乌药水提取物的制备
取生乌药500 g，加入用100 mL蒸馏水稀释的100 g食醋搅拌，闷润90 min，待醋液被吸尽后，置于60 ℃恒温烘箱中烘制4 h，取出，放凉，备用。（按2015版中国药典，干燥品含乌药醚内酯不少于0.030%。）
醋炙乌药水提物制备：分别取适当量上述经炮制后的样本，加10倍水煎煮两次，每次一小时，滤去残渣，合并浓缩滤液。
2.2 大鼠离体心脏模型的制备
将大鼠采用水合氯醛（1000 IU/kg）麻醉并及时给予肝素（1000 IU/kg），待麻醉后，剪开胸部，取下大鼠心脏，置于-4℃的K-H缓冲液中，清净血液，将离体心脏的主动脉绑定到装置上，设定灌注压约为80 mmHg。
将自制好球囊插入左心室，并通过三通阀调整将LVEDP在4～8mmHg范围内。待心脏平衡稳定后，立即停止灌注营养液，使心脏缺血30min，再复灌注营养液。
2.3 动物分组
将大鼠随机分为4组：模型组：灌注含氧K-H液30min后，停止灌流30min，然后再灌注40min。醋炙乌药水提物低、中、高剂量给药组：灌注含氧K-H液20min后，分别灌注终浓度为0.15、0.3和0.6g/L 10min的含药液，停止灌流30min，复灌注40min。
2.4 离体血流动力学考察
将心脏与离体装置绑定好后，打开电脑接入RM 6240系统，记录左室舒张末期压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室收缩压最大变化速率（+dP/dtmax）、左室舒张压最大下降速率（-dP/dtmax）等心功能指标的变化。
2.5 统计学方法
所有数据以表示，采用SPSS 19.0统计学分析软件统计处理，组间比较采用方差检验，p<0.05 表示差异才有统计学意义。
3 结果
3.1 醋炙乌药水提取物对大鼠离体心脏心功能指标的影响
离体心脏经复灌注后，模型组的LVEDP，直线逐渐增加，在复灌后10 min时达到86.62±12.45 mmHg，随着复灌时间的持续，复灌后30 min时达到53.26±9.37 mmHg，提示离体心脏正慢慢恢复到正常水平；醋炙乌药水提取物组能抑制LVEDP的急剧升高，其中，醋炙乌药水提取物中、高剂量组较模型组有显著差异明显（p<0.05或p<0.01）。（见表 1）。此外，模型组心功能其它三个指标LVDP、+dP/dtmax和-dP/dtmax在复灌后从低向高逐渐恢复，复灌后30 min时，醋炙乌药水提取物高剂量组与模型组相比，三大指标明显升高（p<0.001），有统计学意义。（见表 2、3、4）
表1 醋炙乌药水提物对离体心脏LVEDP（mmHg）的影响（n=10）
4 讨论
近年来随着中药学方向的发展，使得其越来越受人们的关注。当前中医药临床实践的主流仍然是中药的炮制品，我们课题组前期就发现乌药经炮制后其镇痛效果优于生品[4]，即乌药经炮制后，其化学活性基础物质和药理药效都有不同程度的影响，主要表现在改善化学活性物质的溶出增加其含量或产生新的活性成分等方面。本研究是在我们课题组前期研究成分的基础上进行的，是乌药炮制品研究的重要一环。
缺血-再灌注是个复杂多因素的过程，这个过程能诱导了心肌细胞凋亡[5]。本实验采用大鼠离体工作心脏为研究对象，结果显示：醋炙乌药水提物可使LVDP、±dp/dtmax绝对值升高，表明经过醋炙乌药水提物影响后，大鼠心脏收缩和舒张功能有所增强，且室壁肌张力随之上升，心肌收缩能力从减弱趋势转向正常，整体提示醋炙乌药水提物是能改善心肌缺血再灌注损伤。
参考文献：
[1] 海萍，高原，李蓉涛，等.乌药的化学成分研究[J].中草药，2016，47（06）：872-875.
[2] 周新蓓，欧阳荣.乌药不同炮制品中乌药醚内酯的含量测定[J]. 中药材，2008，（03）：350-351.
[3] 左美玲，欧阳荣，皮晓华.乌药不同炮制品中乌药内酯含量测定[J]. 中国医药指南，2010，8（05）：43-44.
[4] 李珊，陈文明，欧阳荣.乌药及其炮制品不同提取物镇痛作用的研究[J].中国现代应用药学，2015，32（11）：1306-1308.
[5] 焦博，张琳，余立群，等.模拟在体心脏缺血-再灌注损伤的离体心脏模型[J].生理学报，2013，65（6）：647-653.
项目基金：湖南省教育厅重点项目，17A156；湖南省中医药管理局重点项目。
通讯作者：欧阳荣
论文作者:陈兴1,谭树慧2,曹艺2,欧阳荣2（通讯作者）
论文发表刊物:《兰大学报（医学版）》2018年8期
论文发表时间:2018/11/27
标签：乌药论文; 心脏论文; 离体论文; 提取物论文; 大鼠论文; 模型论文; 活性论文; 《兰大学报（医学版）》2018年8期论文;