杨晶晶1 戍俊陶2(通讯作者）
（1云南省第一人民医院、昆明理工大学附属医院老年病科 云南昆明 650032）
（2昆明市儿童医院 新生儿科 云南昆明 650000）
【摘要】目的：检测入组患者氯吡格雷用药相关基因、阿司匹林用药相关基因多态性，以便根据不同基因提出个体化用药方案，为探讨老年颈动脉粥样硬化患者基因多态性与个体化抗血小板治疗的相关性研究提供一定的实验方法经验。方法：运用荧光染色原位杂交技术检测入组患者氯吡格雷用药相关基因、阿司匹林用药相关基因多态性。结果：根据不同基因型及其意义提出个体化用药方案。结论：本研究通过抗血小板药物相关基因检测指导个体化抗血小板治疗，最终显示个体化抗血小板治疗组疗效优于传统治疗对照组。
【关键词】老年；动脉粥样硬化；药物相关基因检测
【中图分类号】R543.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）11-0058-02
为探讨老年颈动脉粥样硬化患者个体化抗血小板治疗，本研究运用荧光染色原位杂交技术检测入组患者氯吡格雷用药相关基因（CYP2C19*2 CYP2C19*3、PON1）、阿司匹林用药相关基因（GP IIIaPI A2、PEAR1、PTGS1）多态性，以便根据不同基因提出个体化用药方案，旨在为探讨老年颈动脉粥样硬化患者基因多态性与个体化抗血小板治疗的相关性研究提供一定的实验方法经验。
1.材料与方法
1.1 实验对象
2016年7月—2016年10月间在我院老年病科就诊的临床资料齐全的首发未经过治疗的老年（65岁以上）颈动脉粥样硬化患者71例，其中个体化治疗组50例（根据基因检测结果调整抗血小板治疗用药种类及剂量），其中男32例，女18例，平均年龄78.56±7.61岁；传统治疗对照组21例（常规剂量阿司匹林或常规剂量氯吡格雷治疗），其中男17例，女4例，平均年龄80.00±7.69岁。
1.2 主要试剂及仪器
配制NH4Cl稀释液、50uLSNP分析保存液、相应编号的耀金分试剂（北京华夏时代基因科技发展有限公司）、基因分析仪（北京华夏时代基因科技发展有限公司）。
1.3 方法
基因检测操作步骤为：配制NH4Cl稀释液，NH4Cl预处理液与纯化水按1:9稀释；取150uL混匀的临床全血，加入1mL NH4Cl稀释液并上下颠倒10次，室温静置5min至溶液透明；于室温3000转离心5min，弃上层液体；向此离心管中加入50uLSNP分析保存液（根据白细胞的多少酌情加30～50uL），反复吹打混匀；向相应编号的耀金分试剂（北京华夏时代基因科技发展有限公司生产）中加入1.5uL处理后的白细胞样本，上机检测，分析基因型。
2.结果
氯吡格雷、阿司匹林药物相关基因各基因型判别及意义：运用荧光染色原位杂交技术检测个体化治疗组患者氯吡格雷用药相关基因（CYP2C19*2 rs4244285位点、CYP2C19*3 rs4986893位点、PON1 rs662位点）、阿司匹林用药相关基因（GPⅢaPLA2、PEAR1 rs12041331位点、PTGS1 rs10306114位点）多态性，根据不同基因型及其意义（表1）提出个体化用药方案。
3.讨论
在基因多态性的测定过程中，核酸的提取占据重要的位置。分子荧光测序法提取核酸的过程相对其他检测方法较为简单，只需将血浆沉淀及离心即可得到白细胞样本，再用核酸纯化试剂反应10分钟左右后就可上机进行分析。
影响氯吡格雷抗血小板治疗个体差异的重要因素之一是CYP2C19基因多态性[1]。2010年美国食品药品监督管理局（FDA）已对氯吡格雷的使用发出“黑框警告”，提醒使用氯吡格雷后的心血管不良事件发生可能与CYP2C19等位基因功能缺失有关。东方人群中呈现出的氯吡格雷慢代谢状态75%～85%为CYP2C19*2，20%～25%为CYP2C19*3[2]。FDA和美国心脏病学会提出建议：CYP2C19慢代谢基因型患者考虑改变治疗方案。而一项针对高加索人群的研究发现，肝脏中的对氧磷酶1在氯吡格雷代谢中起重要作用，而编码此酶的PON1基因第六外显子区的rs662（Q192R）多态位性能够解释72.5%氯吡格雷抵抗的发生[3]。
国外有研究发现：较GPⅡb/Ⅲa基因未突变人群，突变型发生阿司匹林抵抗的风险显著升高，血栓事件风险亦增加[4]；另据报道显示，血小板GPⅢa亚基受体中，PLA2与血小板反应性增强有关[5]。另有研究发现，PEAR1的A等位基因具有影响血小板聚集和血小板活化的效果[6]。亦有报道显示，PTGSI基因多态性与发生阿司匹林抵抗相关[7]。
本研究通过抗血小板药物相关基因检测指导个体化抗血小板治疗，最终显示个体化抗血小板治疗组疗效优于传统治疗对照组，上述结论也需在今后的研究中通过进一步扩大样本量反复证实。抗血小板药物相关基因检测应用于老年颈动脉粥样硬化患者的个体化治疗过程中，对于临床指导合理用药，优化抗血小板治疗，改善患者预后具有一定意义。
【参考文献】
[1] 钟诗龙，韩雅玲，陈纪言，等.氯吡格雷抗血小板治疗个体化用药基因型检测指南解读
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[7] Cao L,Zhallg Z,Sun W,et al.Impacts of COX-1 gene Poly moprhisms on vascular outcomes in patients with ischemic stroke and treated with aspirin [J].Gene,2014, 546(2):172.
基金项目：云南省教育厅科学研究基金 项目编号：2016ZDX013
论文作者:杨晶晶1,戍俊陶2(通讯作者）
论文发表刊物:《心理医生》2018年11期
论文发表时间:2018/5/11
标签：基因论文; 个体化论文; 多态性论文; 格雷论文; 阿司匹林论文; 患者论文; 抗血小板论文; 《心理医生》2018年11期论文;