浙江康恩贝制药股份有限公司
摘要：目的 建立富马酸依美斯汀含量与释放度测定方法。方法 采用液相法对样品进行回收率、重复性、线性和稳定性等方法学研究。结果 回收率平均为99.96%，RSD为0.45%。用液相法分别测定三批富马酸依美斯汀缓释胶囊的含量，重复性和均一性良好。结论 高效液相法可用于富马酸依美斯汀缓释胶囊含量和释放度的测定。
关键词：富马酸依美斯汀；液相；含量；释放度
1.仪器与试剂
1.1 仪器
WATERS-e2695-2489液相色谱仪，Agilent1260液相色谱仪，Agilent1100液相色谱仪，METTLER TOLEDO XS105天平，PHS-3C精密PH计，岛津2600紫外分光光度仪。
1.2 色谱柱
Waters SunFire C18 250*4.6mm，5um，柱号：014931105138 06
Xbridge C18 250*4.6 mm，5um，柱号：0141311301
依利特C18 200*4.6mm，5um，柱号：2109088
1.3 试剂
乙腈（Merck色谱纯），磷酸二氢钠（西陇化工股份有限公司），
十二烷基硫酸钠（Sigma Lot＃SLBJ 7652V，CAS：151-21-3），
磷酸（无锡市佳妮化工有限公司，批号20130701），
水为纯化水经0.45um滤膜抽滤，
富马酸依美斯汀对照品（USP REFERENCE STANDARD CAT.NO.1234806）
富马酸依美斯汀缓释胶囊样品（C15E042，C15E043，C15F051本公司生产）。
2.方法与结果
2.1方法确定
2.1.1色谱柱选择 根据富马酸依美斯汀缓释胶囊JP标准中含量项下方法，以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm）作为填充剂。
2.1.2流动相配制 通过对比富马酸依美斯汀USP方法与JP方法，两者流动相除水相与有机相比例略有不同外，选用盐的种类以及浓度基本一致。故水相采用3.9g磷酸二氢钠与2.5g十二烷基硫酸钠溶解至1000ml水，并用磷酸调节PH至2.4；结合JP方法中含量项下系统适用性分离度要求，采用水相-乙腈（42：58）作为流动相。
2.1.3波长以及进样量选择 根据富马酸依美斯汀缓释胶囊JP标准中含量项下方法，选用280nm作为检测波长，进样量为10ul。
2.1.4对照溶液（系统适用性）配制
称取富马酸依美斯汀USP对照品与4-甲基二苯甲酮各约10mg，置于同一只100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度；精密量取1ml上述溶液置于10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度即得。（平行配制两份）。
2.2专属性和回收率实验
纯原料分别按照处方量的80%、100%、120%与处方量的辅料分别配置3个平行样。具体数据如下：
表1 回收率试验数据
注：辅料稀释过程：辅料称定后置于100ml容量瓶，用流动相稀释至刻度；用0.45um聚偏氟乙烯膜过滤后量取1ml置于10ml容量瓶即得（稀释9份）。
供试液稀释过程：原料称定后（数据如上表）分别置于200ml容量瓶，用流动相溶解并稀释至刻度后分别取1ml加入上述辅料溶液中，用流动相稀释至刻度即得。
测得量=样品峰面积*F均值*样品稀释倍数；回收率=测得量/加入量。
2.2.1回收率试验补充
因本试验方法将用于制剂释放曲线测定，故需进一步放大回收率低浓度配制范围，以确保试验的准确度。数据如下：
表2 回收率数据补充
图1 线性关系曲线
从图1中可以看出，样品浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2.3样品含量测定
取本品内容物，研磨后精密称取粉末适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.01mg的溶液作为供试品溶液；另称取对照品与4-甲基二苯甲酮适量，制成每1ml中约含富马酸依美斯汀与4-甲基二苯甲酮各0.01mg/ml的溶液作为对照品溶液（系统适用性溶液）。分别量取上述溶液10ul进样即得，数据如下：
表4 液相法含量测定数据
由上述两表数据对比可知，用液相法所测得结果与紫外法所测结果基本一致。
2.4样品溶液稳定性
取含量测定用供试品溶液，分别于0-24小时进样，比较依美斯汀峰面积变化情况，数据如下：
表6 溶液稳定性
结果：由上表可知，本品溶液在24小时内较稳定。
2.5重复性
取本品内容物（C15E043批），照液相含量测定方法分别测6份含量，比较每次所测结果的异同，数据如下：
表7 重复性试验数据
由上表数据可知，本品重复性良好。
2.5耐用性
通过微调某一色谱条件来模仿试验中因不同日期，不同实验室，不同人员以及不同仪器对试验是否产生干扰。现用对照品溶液（系统适用性溶液）分别在以下条件进样，图谱如下：
有上述图谱可知，本品耐用性较好，对含量测定影响因素较小。
3.结论
通过上述方法学验证数据以及对三批样品含量检测可知本方法的专属性、重复性以及均一性都较好，因此用该方法检验富马酸依美斯汀缓释胶囊的含量与释放度是可行的。实际操作中由于柱子品牌、长短不一，可适当调节流动相比例，避免依美斯汀峰因出峰时间太早而与辅料或富马酸峰重合，影响计算。
参考文献：
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[6].富马酸依美斯汀缓释胶囊注册标准
论文作者:楼明波,董松波
论文发表刊物:《健康世界》2017年第2期
论文发表时间:2017/3/20
标签：溶液论文; 含量论文; 斯汀论文; 回收率论文; 富马酸论文; 数据论文; 液相论文; 《健康世界》2017年第2期论文;