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摘要：本文主要分析了不同因素对醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果的影响，主要包括实验材料、醋酸纤维薄膜的质量与浸泡方式、电极缓冲液、染色液、室内温度、点样方法，进行文献综述。并结合现有文献和多次实验结果，进行分析研究，从而得实验教学的优化。
关键词：醋酸纤维薄电泳；血清蛋白；影响因素
1、引言
生物化学与分子生物学实验学是医学类学生的必修课程，而醋酸纤维薄膜电泳是其基础项目之一[1]。醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜作为支持物的一种区带电泳，具有简便快速、分辨率强、对蛋白质和染液吸附少、易于保存等优点，常被广泛使用[2]。在临床上，血清蛋白的分离与鉴定常为临床肝肾疾病，提供诊断依据 [3]。
在多年的实验教学中发现，醋酸纤维薄膜电泳实验受各种因素影响，最常发生的原因是学生操作不当，导致实验结果不理想。因此，我们针对实验中常出现的问题，结合所查文献资料和多年的实验教学经验，进行归纳总结，使实验操作得到优化，学生实验得到较理想的实验结果。
2、实验概述
2.1 材料、仪器和试剂
2.1.1 材料
小牛血清，醋酸纤维薄膜（8cm×2cm）
2.1.2仪器
DYY-2型电泳槽（北京市六一仪器厂），RDY-CS1型电泳仪。
2.1.3试剂
硼酸缓冲液（pH=8.6），氨基黑10B染色液，2.5%醋酸漂洗液
2.2实验方法
2.2.1本实验参照张纯洁[4]的实验方法。
2.3结果判断
一般醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白分离为5条区带，从正端起依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白[5]。
3、醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素及应对措施
通过电泳原理分析和文献梳理，认为醋酸纤维薄膜电泳影响因素主要包括实验材料、醋酸纤维薄膜的质量、醋酸纤维薄膜的浸泡、缓冲液的浓度、电压、温度等。笔者按实验准备与操作的顺序进行逐一分析。
3.1实验材料
3.1.1 血清
实验室常用人血清作为实验材料，但考虑到人血清具有一定的感染性，为减少实验室污染，提高教师与学生的安全性，遂用小牛血清进行替代。经研究表明[6-7]，小牛血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果与人血清电泳实验结果相近，其电泳结果可见五条清晰的区带，达到实验效果。且小牛血清相比于人血清易得，储存较稳定。
实验血清的质量问题也是直接影响电泳结果的关键要素，溶血标本会导致电泳区带不清晰，离散，甚至会有拖尾现象[8]。
3.1.2 醋酸纤维薄膜
醋酸纤维薄膜的质量是电泳结果的重要影响因素之一，薄膜的厚度以0.1mm ~ 0.15mm 为宜。太厚，其吸水性差，蛋白质分离效果不好；太薄，膜易碎[9]。薄膜的质地应均匀，无斑点，以保证蛋白质区带的完整性。检验薄膜质量的方法为：用镊子轻夹薄膜置于缓冲液液面，若薄膜迅速湿润，且无斑点或气泡出现，则薄膜质量良好。
3.2实验仪器
实验前确保仪器的正常功能，选择电流、电压等功能稳定的仪器，检查正负极插口的正确连接。实验期间，电泳槽应处于密闭状态，减少缓冲液挥发导致离子浓度改变。
3.3实验试剂
3.3.1 电极缓冲液
为保证溶液在整个电泳过程中有较为稳定的pH值，可根据所需的pH范围或特殊要求，选择采用多种缓冲液。血清蛋白电泳常用的是巴比妥-巴比妥钠缓冲液。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆由于巴比妥具有一定的毒性，且巴比妥-巴比妥钠缓冲液在进行约六次实验后应更换，否则会有明显的拖尾现象[10]。而硼酸缓冲液无毒副作用、费用低、使用时效长，血清分离效果与巴比妥-巴比妥钠缓冲液相同，大多实验室已将硼酸缓冲液代替传统的巴比妥缓冲液使用 [11]。
3.3.2 染色液
蛋白质染色液常用氨基黑-10B、丽春红等。染色液原理为通过活性炭吸附有机色素，因此可循环使用，节约试剂，降低实验成本。但染色液使用次数过多时，会导致蛋白质染色不均匀。当染色后有空泡产生，则提示应更换染色液[12]。
3.4 实验操作
3.4.1 醋酸纤维薄膜浸泡
镊子轻夹薄膜，使其粗糙面朝下逐条平稳浸泡于缓冲液30min左右，避免镊子按压或用力戳薄膜，否则会破坏薄膜表面的微孔，影响电泳时蛋白质的分离。
3.4.2 点样与平衡
点样是血清蛋白电泳最关键的步骤。实验常因学生的操作不熟练，导致电泳失败，应让学生先在滤纸上熟悉操作。而实验所需样品量少，约60-80ug[13]，点样器轻划过血清表面即可。蘸取太多时，点样器可轻点滤纸，去除过多的血清。由于血清具有一定的黏性，而薄膜轻薄，易被粘起，使薄膜除点样处外也容易碰到血清，影响电泳结果。所以在点样时，可用两指轻压薄膜两端，点样器垂直将血清点于膜条点样线上，点样时不可晃动点样器或多次重复点样，应保证薄膜上仅有一条垂直样品带。
点样后立即把膜条平移搭在电泳槽中的纱布桥上，膜条拉展，与纱布紧贴，但点样处不可与纱布接触。
3.4.3电泳时间、电压大小及稳定性
电泳的时间及电压的大小与纱布桥正负极之间的宽度、所放薄膜数量的多少[14]、室内温度和湿度有关，所以不可照搬实验指导，应视实验时的情况而定。同时不同的电泳仪所需电压、电流有可能不同，应灵活掌握。
同时有研究[15]表明：混合正负电极缓冲液能显著延长缓冲液的使用时效。因此，每次电泳后，应及时检测缓冲液 的pH，电泳 2 ～ 3 次后，将正负极缓冲液混合后使用，同时观察实验后血清蛋白的分离效果，若分离效果不佳，需要使用新配制的电极缓冲液，确保实验结果的成功率。
3.4.4 染色
电泳完成后，应将薄膜平移至染色液中，使其完全充分浸泡。如待染薄膜有多条，要避免薄膜重叠，导致血清蛋白粘连，影响分离效果。
4、结束语
综上所述，醋酸纤维薄膜电泳实验的影响因素有很多。为得到满意的实验效果，达到实验目的，不仅需要进行预实验确保实验器材可正常使用，还需学生提前预习了解实验原理和实验操作要点；老师上课规范学生操作。相信把握好上述所讲的细节，醋酸纤维薄膜电泳实验的成功率就能得到大大的提高。
笔者建议可将本次实验改为设计型实验，学生分析实验原理，思考实验可能存在的变量，以小组为单位进行自主创新设计性实验，调动学生的主动性、积极性和创造性，激发学生的创新思维和创新意识，逐渐掌握分析问题、解决问题的方法，提高创新和实践能力[16]。
同时，在实验中加入一些临床疾病的模型，学生们通过电泳的结果可以更直观地明确醋酸纤维薄膜电泳的临床意义[17]，引导学生将实验结果与临床意义相结合，学以致用。
参考文献：
［1］魏春华，李嘉欣，李晓晶，等.“医学生物化学与分子生物学”实验技术教学改革的探索［J］.高校医学教学研究（电子版），2018，8（6）：34-37.
［2］陈华絮，肖生鸿.关于提高血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳效果的探讨.[J].中国教育技术装备，2006，6：15-18.
［3］张纯洁.生物化学检验[M].高等教育出版社，2007：55－56．
［4］武洋，李颜敏.醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质实验材料比较[J].卫生职业教育，2017，35（24）.
［5］于乐军，刘晨光.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素分析及改进[J].中国教育技术装备，2013，12（132）：132-134.
［6］周丽亚.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的改进[J].生物学杂志，2008，25（2）：67-68.
［7］翁闪凡，庄锡伟.醋酸纤维薄膜法血清蛋白电泳的影响因素分析与对策[J].检验医学与临床，2010，7（6）：502-503.
［8］王先泽.生物化学实验技术原理和方法[M].北京：中国农业出版社，2002：123-126.
［9］杨红军，李磊，石东里，等.乙酸纤维素薄膜电泳实验材料和缓冲液的改良替代研究[J].生滨州学院学报，2016，32（6）：69-71.
论文作者:谢丽霞,孔秋雨,翁闪凡△通讯作者
论文发表刊物:《健康世界》2019年5期
论文发表时间:2019/7/2
标签：电泳论文; 醋酸纤维论文; 薄膜论文; 血清论文; 缓冲液论文; 蛋白论文; 因素论文; 《健康世界》2019年5期论文;