河北省秦皇岛市人民医院急诊外科 河北秦皇岛 066000
[摘要] 目的 研究缺氧诱导因子（）在乳腺癌中的表达及临床病理意义。方法 采用RT-PCR检测乳腺癌和正常组织表达水平。分析在乳腺癌和正常组织中的表达差异以及表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化之间的关系。结果 在乳腺癌中的表达明显高于正常组织（P=0.015），未发现在乳腺癌中的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、分化级别相关。结论 乳腺癌中的表达明显高于正常组织，可作为乳腺癌辅助诊断指标。
[关键词] 乳腺癌； 缺氧诱导因子； RT-PCR
实体肿瘤生长到一定体积时存在一定程度的缺氧，缺氧诱导表达，是血管生成信号途径的上游转录调控因子[1]，刺激下游基因VEGF的表达，增加肿瘤血管生成。乳腺癌是我国常见实体肿瘤之一，本实验在mRNA水平研究在乳腺癌中的表达，探索与乳腺癌血管生成以及病理特性的关系。
1 对象与方法 本研究42例标本于2008年7月-2009年8月取自焦作第二人民医院I-III期乳腺癌。Trizol提取RNA（试剂购于invitrogen公司），逆转录后行荧光定量PCR（试剂盒购于Qiagen公司）。荧光定量RT-PCR方法：取RNA1µg加入逆转录体系至总体系20µl，合成cDNA第一链，反应条件为30℃ 10分钟，42℃ 30分钟，95℃ 5分钟，5℃ 5分钟；逆转录后行定量PCR扩增：cDNA2µl，上、下游引物各1µl，SYBR Green I Premix 12.5µl,水8.5µl 补足到20µ，95℃ 10分钟，95℃ 15秒，53.3℃ 30秒，72℃30秒，40个循环。引物及退火温度如表1。扩增曲线如图1
基因表达水平分析方法：定量PCR结束后，选定合适的阈值，记录每个目的基因CT值和内参照CT值，根据荧光定量PCR相对定量统计方法[2],目的基因对于内参相对表达量为2-△CT，△CT=CT癌组织目的基因-CT癌组织内参照基因。癌组织和正常组织表达差异采用配对资料t-test。表达与病理因素间的联系采用独立资料t-test，P<0.05有统计学意义。
2 结果 定量PCR显示乳腺癌扩增达到阈值所需循环数小于正常组织，相同条件下达到阈值所需循环数越小模板越多，即原始mRNA表达量高，（如图1），统计分析显示乳癌中的表达高于正常组织（如表2,P =0.015）。
乳腺癌中表达与临床病理关系进行分析，未发现表达量与临床病理因素有联系（如表3）。
3 讨论 VEGF是肿瘤血管生成的最主要因素之一，而VEGF是的靶基因，与肿瘤血管生成关系密切。缺氧对癌组织中表达起着重要作用[3]。实体瘤在人体内受内环境和人体自身免疫等因素的影响，有研究发现炎症反应也是表达调节的因素[4] ，因此，被认为是一种能被缺氧、炎症等多种因素调节的转录因子。本试验采用实体瘤标本直接测定基因表达情况，发现乳腺癌高表达，可能与上述调控机制有关，该发现有利于对肿瘤组织表达调节机制及影响因素进一步全面认识。
参考文献
1 陈信义，徐力,张燕明.恶性肿瘤新生血管研究进展[J].癌症进展杂志，2005，11（3）：528-531.
2 Livak KJ，Schmittgen TD.Analysis of relative gene expression data using real-time PCR and the 2-△△CT method. Methods.2001,25：402–408.
3 孙军辉.抗肿瘤血管生成机制及治疗研究进展[J].实用肿瘤学杂志.2005，19(6)：459-461.
4 KimaYH,NambBH.HIF-1αexpression in response to mediates induction of hepatic inflammatory cytokine TNFα.Exp Cell Res,2007,313:1866-1876.
论文作者:赵华锋 崔金娥
论文发表刊物:《临床医学教育》2018年3期
论文发表时间:2018/4/19
标签：乳腺癌论文; 肿瘤论文; 组织论文; 定量论文; 基因论文; 血管论文; 目的论文; 《临床医学教育》2018年3期论文;