高效液相法同时测定生素A和维生素E的含量论文_王琛

(厦门医学院药学系 福建厦门 361023)

摘要:目的 建立多维元素胶囊中维生素A和维生素E的HPLC含量测定方法。方法 采用Century SIL C18柱(5μm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇:三氯甲烷:水(体积比90:8:2);流速:1.0mL·min-1;检测波长:选择280nm;柱温:35℃;进样量:20μL。结果 维生素A在54.4~217.5μg·mL-1(r=0.9999)、维生素E在56.3~225.0μg·mL-1(r=0.9997)范围内均呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.70%(RSD=1.43%)、99.19%(RSD=1.25%)。结论 建立的方法灵敏度高、准确度和重现性好,可作为多维元素胶囊的质量控制方法之一。

关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素E

多维元素胶囊为维生素及矿物质类非处方药药品,用于预防和治疗因维生素和矿物质所引发的各种疾病。维生素A和维生素E为脂溶性维生素含量测定较为复杂[1-2],且有可能同时测定会相互干扰,本文建立一种高效液相法同时测定生素A和维生素E含量的方法。

1仪器与材料

UV-1575紫外检测器、PU-1580输液泵,N-2000双通道色谱工作站,三氯甲烷(色谱纯),二甲基亚砜(分析纯),正己烷(分析纯),甲醇(色谱纯),样品(自制),对照品:维生素A醋酸酯(瑞士Fluka公司)、维生素E烟酸酯(Sigma公司)。

2方法与结果

2.1色谱条件的选择

色谱柱:Century SIL C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇:三氯甲烷:水(体积比90:8:2);流速:1.0mL·min-1;检测波长:选择280nm;柱温:35℃;进样量:20μL。

2.2溶液的制备

对照品及供试品溶液的制备:取20粒胶囊,除去胶囊,将内容物研细,精密称取细粉适量(约相当于维生素A7500单位),精密加入二甲亚砜20mL,于40~50℃超声约20分钟,放冷至室温,离心10分钟(3000转/分);精密量取上清液15mL,用正己烷提取4次,每次20mL,小心振摇,静置使分层,合并提取液至100mL量瓶中,用正己烷稀释至刻度,摇匀,作为供试品贮备液。精密量取贮备液2mL,用氮气吹干,精密加异丙醇2mL使残渣溶解,混匀,作为供试品溶液[3-4]。

2.3系统适用性试验

取对照品溶液及供试品溶液在上述色谱条件下测定,色谱图见图1。理论板数按维生素A峰计算应不低于2000,各相邻峰之间的分离度大于1.5。

2.4线性关系考察

精密量取供试品3mL(六份)贮备液用氮气吹干,分别精密加异丙醇1.5、2.0、3.0、3.75、6.0mL使残渣溶解,混匀,精密量取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。维生素A回归方程:A=5900.9C–57900,r=0.9999;维生素E回归方程:A=6686.1C–66474,r=0.9997,结果表明,54.4~217.5μg·mL-1、维生素E在56.3~225.0μg·mL-1范围内均呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取对照品溶液20μL,重复进样6次,计算各峰面积。维生素A、维生素E的RSD分别为1.42%、0.68%,表明色谱系统精密度良好。

2.6重复性试验

精密称供试品6份,按“2.2”项方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,根据各峰面积计算,维生素A、维生素E的RSD分别为1.06%、1.94%,表明方法具有良好的重复性。

2.7回收率试验

采用加样回收法,称取已知含量的供试品共9份,按低、中、高浓度分别精密加入维生素A、维生素E对照品适量,按上述色谱条件测定,维生素A、维生素E的回收率分别为99.70%(RSD为1.43%)、99.19%(RSD为1.25%)。

2.8样品测定

取3批样品,按“2.2”项方法制得供试品溶液,按上述色谱条件测定,记录色谱峰面积,根据各峰面积用外标法计算样品含量(质量分数),维生素A三批测定结果分别为0.791、0.797、0.794,维生素E三批测定结果分别为0.0855、0.0867、0.0856。

3讨论与结论

为同时定量准确地测定维生素A、维生素E的含量,经过预实验条件摸索等工作,确定选择以甲醇:三氯甲烷:水(体积比90:8:2)为流动相进行测定。维生素A和维生素E样品处理方法较为复杂,为更好地处理样品采用萃取的方式进行样品提取,效果较好。维生素A和维生素E均属于油溶性维生素类,在进行含量测定时其性质与体内样品测定类似,因此建议使用保护住。本品为复方维生素类制剂,处方组分复杂,相互间干扰较大,本文建立的方法经测定,其他组分并无干扰。本法可作为该制剂产品质量控制方法之一。

参考文献

[1]刘翠红,陈科,姚雪清,等.不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量分析[J].中国药物经济学,2016,11:23-26.

[2]吴基任,余欢欢,云玭,等.保健食品中维生素A的含量测定[J].广州化工,2016,44(22):87-89.

[3]岑建斌,区硕俊,周朗君,等.二维液相色谱法同时检测婴幼儿乳粉中维生素A、E与D3[J].中国乳品工业,2017,45(2):43-46.

[4]谢云峰,王浩,刘佟,等.复合氨基酸胶囊中水溶性维生素的含量测定[J].分析化学,42(9):1343-1347.

论文作者:王琛

论文发表刊物:《航空军医》2017年第19期

论文发表时间:2017/11/22

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