（中国人民解放军第三五九医院 江苏 镇江 212002）
【摘 要】目的：分析特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。方法：以健康人外周血单个核细胞引出三种抗原致敏细胞，分别是LAK、DC和CIK，用A549肺癌细胞抗击DC,并将DC放在显微镜下进行观察，检测DC在两种状态下的表型变化，一种是DC经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化，另一种是DC未经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化。本次实验中靶细胞为恶性肿瘤原代细胞，效应细胞分为四组：分别为CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK细胞，在效靶比为50∶1、20∶1、10∶1时进行杀伤实验，测定杀伤活性的方法为LDH释放法，其中，细胞因子分别为IL-2、IL-12、IFN-γ，检测细胞因子分泌水平的方法为ELISA法。结果：在显微镜下观察DC经恶性肿瘤抗原后的表型，呈成熟形态，而LAK细胞 、CIK细胞和DC-LAK细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效果都不及DC-CIK细胞（P<0.05）；DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应与效靶比有着直接的关联，效靶比如果降低，DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应也会随之减小（P<0.05);在杀伤实验中CIK、LAK和DC-LAK细胞组中的IFN-γ、IL-12分泌水平明显低于DC-CIK细胞组，而DC-LAK细胞组中IL-2的分泌水平最高，DC-LAK和LAK细胞组明显高于其它2组(P<0.05)。结论：抗原致敏的DC可引诱特异性CIK细胞,从而提高CIK细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效应,而IFN-γ、IL-12的分泌水平与CIK细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效应也有关系。
【关键词】抗原致敏；DC-CIK细胞；恶性肿瘤原代细胞；细胞因子；杀伤效应
【中图分类号】R730.23 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6194（2015）02-0412-01
目前，恶性肿瘤的治疗效果在临床中还是不够理想，因此，临床中更多的使用过继免疫疗法作为治疗恶性肿瘤的辅助方法。CIK是以细胞因子为诱导，具有较强的增值效应和杀伤效应，可以限制MHC，而DC具有较强的抗原致敏效果，能够有效激发T细胞[3]。如果将树突状细胞DC和CIK细胞分开治疗恶性肿瘤，效果都不是很理想，本次实验通过将特异性抗原致敏的DC细胞与CIK细胞联合起来分析对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。
1资料与方法
1.1一般资料
选取三种抗原致敏细胞，分别是LAK、DC和CIK，用A549肺癌细胞抗击DC,并将DC放在显微镜下进行观察，检测DC经恶性肿瘤抗原冲击后和未经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化。LAK、DC和CIK三种细胞都对恶性肿瘤细胞有杀伤效应，具有可比性。
1.2实验方法
将DC细胞与LAK和CIK共培养，组成四种效应细胞，分别为：CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK细胞，在效靶比为50∶1、20∶1、10∶1时进行杀伤实验，分析CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤活性，并检测细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。
1.3统计学方法
对上述四组细胞中表型变化和杀伤效应进行分类总结，采取统计学软件SPSS19.0进行检测，所有结果均用（x±s）表示，P＜0.05，表明有显著性差异，具有统计的意义。
2结果
3讨论
治疗恶性肿瘤的有效途径之一是建立免疫应答，而LAK细胞、TIL细胞和CIK细胞等都属于免疫活性细胞，可用于治疗恶性肿瘤胞。其中，TIL细胞对恶性肿瘤具有杀伤的作用，杀伤活性大于LAK细胞，另外，TIL细胞也可限制MHC，即使这样，TIL的细胞功能也很难改变，从而获得较少的细胞数，所以，在临床治疗中TIL细胞对恶性肿瘤的杀伤效果并不是很理想[2]。而LAK细胞在临床推广中也具有较强的限制性，原因有两点：（1）LAK细胞的体外扩增能力不高；（2）LAK细胞对恶性肿瘤的杀伤作用不大。与TIL细胞和LAK细胞相比，CIK细胞的体外扩增能力较高，杀伤作用也比较强，所以在临床中值得推广。
目前，CIK细胞抗恶性肿瘤的机制还有待完善，但是如果能利用淋巴细胞的功能将CIK细胞的结构激活，一定会对恶性肿瘤细胞带来良好的杀伤效应。本次实验中，CLK细胞的杀伤率为40.59%，而常规细胞的杀伤率为20.12%，在临床上，CIK细胞已经运用到很多重大病症中的研究，比如白血病、肝癌、肾肿瘤等，并取得了良好的治疗效果，但在对部分患者进行免疫治疗时，还是会出现一些问题[4]。
DC能够引诱恶性肿瘤细胞，提高恶性细胞的毒活性，在本次试验中，在A549肺癌细胞中提取恶性肿瘤蛋白抗原，利用DC进行抗原冲击，发现DC进行抗原冲击前后的效果有明显的差异，在显微镜下观察DC经恶性肿瘤抗原后的表型，呈成熟形态。恶性肿瘤细胞抗原中蕴藏丰富的蛋白分子，经DC的加工之后，从而引诱具有特异性的T细胞，有效抗击恶性肿瘤细胞。
在临床中，如果仅用CIK细胞进行恶性肿瘤细胞的杀伤，杀伤效率仅为40.59%，将DC细胞与CIK细胞共同培养，杀伤效果明显增强，杀伤率为84.90%，研究证明，抗原致敏的DC细胞联合CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效果最为明显。在杀伤实验中，一些细胞因子可以诱导和激活CIK细胞，例如，IFN-γ、IL-12、IL-2等细胞因子[1]，其中，CIK、LAK和DC-LAK细胞组中的IFN-γ、IL-12分泌水平明显低于DC-CIK细胞组，而DC-LAK细胞组中IL-2的分泌水平最高，DC-LAK和LAK细胞组明显高于其它2组(P<0.05)，将本次实验结果进行总结：在CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK细胞中，CIK、LAK和DC-LAK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤作用明显低于DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤作用，所以，DC-CIK细胞在临床中值得推广。
参考文献：
[1]韩秀蕊,杨娣娣,赵园等.树突状细胞介导CIK细胞抗恶性肿瘤效应的实验研究[J].现代检验医学杂志,2014,29(3):44-47.
[2]李丽华,张余.DC-CIK细胞免疫治疗骨肉瘤的研究进展[J].中国骨与关节杂志,2012,01(4):415-419..
[3]丛珊亭,时圣彬.DC/CIK在非小细胞肺癌中的应用进展[J].实用癌症杂志,2012,27(3):315-316,
[4]刘涛,沈杰,何凤等.肿瘤细胞免疫治疗疗效影响因素研究进展[J].西部医学,2013,25(9):1433-1436.
论文作者:周向毅
论文发表刊物:《中国慢性病预防与控制》2015年2期
论文发表时间:2016/3/18
标签：细胞论文; 恶性肿瘤论文; 抗原论文; 效应论文; 表型论文; 细胞因子论文; 特异性论文; 《中国慢性病预防与控制》2015年2期论文;