浅析尿分析检验的方法进展论文_胡飞

浅析尿分析检验的方法进展论文_胡飞

胡飞(贵州省清镇市中医医院 551400)

【摘要】Urinalysis(尿分析),是当前国外普遍使用的一个新词,其含义相当于我国的尿常规检验。尿是一种容易获得的检验材料,其组成的变化不仅能反映泌尿生殖道的病变,而且不少全身性疾病也可引起尿成分的变化。所以自古以来,验尿一直被认为是一种重要的诊病手段。时至今日,尽管医学上发展了很多先进的查病方法,但尿分析的作用并未稍减。笔者就近年来尿分析的重要进展,作一简要综述。 【关键词】尿分析;检验【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-7165(2015)11-0479-021

自动化试剂条技术的进展及评价 1.1 试剂条的新进展用自动化试剂条技术代替手工进行尿化学测定,已应用多年。

由尿中的血红蛋白、亚硝酸盐和白细胞酯酶间接推算是否存在红细胞、细菌和白细胞的过筛价值及实用性,经过一阵犹豫和争论之后,现已为大多数临床及检验专家所接受。因为尽管尿中出现血红蛋白不一定同时存在红细胞、引起泌尿系感染的细菌并非都还原硝酸盐、尿中的淋巴细胞等与没有酯酶活性,但毕竟是少数。国外在80 年代中期进行的大量对比研究表明,试条的过筛价值是无庸置疑的。至于令人头痛的尿中抗坏血酸的干扰问题,现已完全解决。新一代的试条在相关的试剂垫块(pad)中,加了抗坏血酸氧化酶或碘盐以分解或氧化抗坏血酸;有的试条则另加一个测抗坏血酸的垫块作为对照。

此外,有的试条还另加一个空白块,用于消除尿本身有深颜色时对结果的干扰。 目前大部分试条都加了一个含多电解质试剂的,偏碱性并含有pH 指示剂的垫块,用于测尿比重。所谓多电解质试剂。是一种多元羧酸,当尿中存在电解质时,其pKa 降低,pH 下降,指示剂随之变色。该法在尿呈酸性时有一定的准确性,但对碱性尿会有较大误差。

因此有的厂家提出当尿液的pH 大于6.5 时,其比重要加0.005,有的仪器已自动进行校正。与化学试验比较起来,测比重试条的准确性稍差。因此有些现代化尿分析仪,并不采用此法。

1.2 自动化尿分析仪的改进试条法是通过化学反应产生的颜色变化进行测定的。早期是用肉眼观察颜色变化及深浅,并与一标准色板进行比较而作定性或半定量。这种方法目前在一些标本量少的单位和供个人使用的试条仍大量使用。但在大批量检查时显得效率太低,而且肉眼比色受主观因素的影响,精密度较差。人眼对颜色深度的微细差别往往不及仪器,因此灵敏度也较差。当前应用最广的是半自动尿分析仪,该仪器实质上是一台反射式光度计。经过改进,精密度及灵敏度不断提高,已成为当前国内外临床检验最常用的仪器之一。新式的仪器往往采用多个波长,有的用了寿命较长的发光二级管作为光源,有的多达十多个检测器,并配有功能齐全的电脑。最先进的全自动仪器,如Supertron,Clinitek Atlas 等,自动化程度很高。例如Atlas 型仪器将490 个试条连在一起,并卷成圆筒,置于仪器内;同时有一个可放50 个尿样管的转盘和自动定量吸加液装置。测定时,将贴了条形码的尿样管排列于转盘上,启动仪器,转动着的试条简使试条转至光路区。仪器即自动按顺序吸尿样加至每个试块,自动进行测定。荧屏显示结果及打印,全部按程序自动进行,无需人看管。该仪器还有一特制白色滤纸垫块。用于检测尿的颜色(最新的仪器已能测定尿的清浊度)。同时有校正仪器用的专用试条,测定中(配合质控液)可插入对仪器进行质控的试条。这种仪器除了效率高、测定项目多、污染少以外,最大的优点是加尿量及读取结果的时间一致,而半自动仪器的试条靠手工浸尿液后再置入仪器中,易造成污染,且条件难以一致,往往影响结果。所以这种仪器的精密度和准确性都大大提高。 2 尿沉渣检查的标准化和自动化现代化的尿分析仪对红、白细胞和细菌的检测是靠化学试验间接(推测)求得的,特异性都不太强。试条也不能检出管型、上皮细胞、滴虫、精子、结晶等等。当筛查结果有疑问时,仪器往往给出警示信号,提示要进行镜检确定。

期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆目前,不管多么先进的尿分析仪,都不能完全取代尿沉渣的显微镜检查,只能起初筛作用。关于何种情况下需要进行镜检。美国临床检验标准委员会(NCCLS)提出了三条:①医师提出要求。②由于病人的疾病、病情或其他检查结果而要求。

③尿的任何一项物理、化学检查结果不正常。我国丛玉隆等也提出过类似的几条。 2.1 镜检方法的标准化尿沉渣镜检,首先遇到的问题是方法如何统一。例如,取多少尿离心,离心力、离心时间,最后留下多少沉淀尿液,取多少用于镜检;加盖片时,盖片的面积、显微镜放大倍率、高倍镜物镜镜头的直径,观察多少视野以及报告方式等等,目前国内外很不一致。

例如,NCCLS 的GP66-T 指南(1992)规定:取尿12ml 离心,相对离心力(RCF)为400xg,离心5 分钟,弃上清后留下0.2ml(用一种特制的带尖头的离心管,倾去上清后,恰好剩下0.2ml),吸取20μl,加于载玻片上,加22mm  2 的盖片,根据高倍镜头直径算出高倍视野面积,最后以每毫升尿中的细胞数报告。而日本临床检验标准委员会(JCCLS)的指南GP1-P2 号(1995)期规定为:取尿10ml,用水平离心机离心,RCF 为500xg,离心5 分钟,留下0.2ml,取15μl 沉渣加盖18mm  2 盖片,用10x 目镜和40x 物镜(每视野面积为0.196mm  2),结果以每高倍视野(HPF)细胞数或每低倍视野(LPF)管型数报告。我国的《全国临床检验操作规程》第二版的规定,除了离心速度为1500r/min,最后取沉渣液20μl 镜检外,其余与JCCLS基本相同。由此可见,各国在这些基本条件方面存在相当大的差别。

2.2 尿沉渣分析自动化尿沉渣分析自动化的研究由来已久,难度较大,近年来已取得重大进展。目前已有两种类型的自动化仪器问世-IRISTM 和UF-100 型。两种仪器的设计思路完全不同。IRIS 实际上是一台带图像分析装置的电视显微镜,称为自动智能显微镜(简称AIM)。它由频闪(strobe)光源灯,相聚光镜(phase condcnser),装在固定台上的流动样品池,10x 和40x 镜头可转动的物镜以及彩色摄像机等组成一个工作站。不离心的尿样经过染色,引入流动池后,进入显微镜光路,由电视屏进行观察、分类、电脑分析记录、打印结果等。这种仪器80 年代初即已上市,但至今推广有限。 UF-100 是日本东亚公司推出的:按流式细胞仪原理设计的一种新型尿沉渣分析仪。该仪器所用尿液也不需离心,但要经荧光染色。

尿经液流聚焦使有形成分有序地吸入测定管道后。同时检测电阳抗、激光照射后发射的荧光强度和在前向角测定的散射激光强度以及脉冲时间。再用电脑加以综合分析,在屏幕上显示各种散点图和直方图并打印出结果和图形。由于各种细胞、管型、细菌等的大小、形状、内部结构和结合荧光染料的多少不同,故可加以区分。该仪器还可以同时测定电导率,用以间接推算比重。值一提的是,仪器可检测一般不为检验人员所注意的细菌;同时还可将红细胞分为均一型、不均一型和混合型,对鉴别红细胞来源(肾小球、肾小管或是下泌尿道)有参考价值。以往这种检查要用相差显微镜,而且主观影响较大。但这种仪器不能准确区分管型的类型,也不能区分滴虫和结晶。对少数特殊细胞如移行上皮细胞、肿瘤细胞等的鉴别有困难。

因此,目前它仍然是一种过筛仪器,还不能完全取代人工镜检。

3 尿分析的质量保证和质控 与血液及生化检验比较起来,尿分析的质量保证和质控难度较大。除了方法未标准化和备试条、仪器生产厂家每种试条的灵敏度、定值标准等相互有差异以外,尿标本的留取、收集、运送、保存、前处理等环节多,往往难于控制。

例如尿的化学检查和沉渣检查,要求留尿后在常温下不得超过2 小时。除了检验科室本身以外,还要临床科室留取新鲜尿并及时送到检验室。这在有些地方很难做到。对试条的质控,相对比较简单。

目前试剂、仪器和尿沉渣定量检测板生产厂家,大都提供配套的用于试条质控的质控液,有的是片剂或粉剂,用前加水溶解。另外还有供仪器校正用的色板,校正带等。可按说明书进行仪器的检查校正。 台湾在1987 年和1990 年所进行的两次全省性尿分析室间质控中(1987 年参加者83 个单位,1990 年为135 个单位)。采用了HycorBiomedical 公司生产的Kova-Trol assays 系统作为质控物。该质控物包括了所有化学试验(含比重)和沉渣有形成分如红、白细胞,各种管型和结晶等,并按异常的程度不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个等级。参加者都用了试条法,包括肉眼比色(少数)和仪器测定。尿沉渣有用Kova系统作定量检查和普通玻片直接镜检两种。结果两次调查试条法各项化学检查结果十分接近。与标准(对照)符合率多数在90%以上,仅比重一项相差稍大。但沉渣检查如用Kova 系统相互相差较小。但用普通玻片法镜检者结果相互之间相差很大。表明尿沉渣检查如不标准化,其可比性差。此一问题国内急待解决。

参考文献:[1]孙玉标.临床尿常规检验的方法进展及评价[J].中国医药指南 ,2014, (17) :69-70. 

论文作者:胡飞

论文发表刊物:《医师在线》2015年6月第11期供稿

论文发表时间:2015/8/27

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