长沙市妇幼保健院 生殖医学中心 湖南长沙 410000
【摘 要】目的：对比分析卵裂期胚胎以及囊胚冻融移植后的妊娠结局差异。方法：以长沙市妇幼保健院生殖中心在2014年5月-2016年6月实施玻璃化冻融复苏移植的不孕不育患者为研究对象，结合患者冻融胚胎阶段将其分为两组（卵裂期胚胎组、囊胚组），统计评估两组患者314个周期的妊娠情况，包括临床妊娠率和胚胎着床率。囊胚组根据移植囊胚个数分为单囊胚移植组和双囊胚移植组。结果：卵裂胚胎组与囊胚组患者自身年龄、不孕时间以及HCG日子宫内膜厚度、平均胚胎移植数量等均无显著性差异（P＜0.05）。囊胚组患者复苏率、流产率、异位妊娠率等与卵裂期胚胎组患者相比均无显著性差异（P＞0.05），而囊胚组患者临床妊娠率、胚胎种植率与卵裂胚胎组患者相比均存在显著性差异且均高于卵裂胚胎组（P＜0.05）。单囊胚移植组移植胚胎数少于双囊胚移植组，多胎率低于双囊胚移植组，均存在显著性差异（P＜0.05）。结论：囊胚冻融移植的妊娠结局优于卵裂期胚胎，单囊胚移植保证了患者妊娠率时，也有效降低了多胎率。
【关键词】卵裂期胚胎；囊胚；玻璃化冷冻
在体外受精－胚胎移植（IVF-ET）过程中，冻融胚胎移植是辅助生殖技术的重要组成部分［1］。冻融胚胎移植在实践应用过程中对促进患者胚胎利用、临床妊娠等均有良好效果，同时是降低新鲜周期控制性超排卵所导致的并发症发生率的重要措施。而玻璃冷冻技术是当前临床公认的最有效、最稳定的胚胎冷冻方法之一，是卵裂期胚胎及囊胚冷冻过程中的主要方法。基于以上，本次研究特地以不孕不育患者为研究对象，分析冻融单囊胚和双囊胚移植的妊娠结局差异。
1、资料与方法
1.1一般资料：以长沙市妇幼保健院生殖中心在2014年5月-2016年6月实施玻璃化冻融复苏移植的不孕不育患者为研究对象，统计评估两组患者314个周期的妊娠情况。根据移植冻融胚胎类型分为2组：卵裂期胚胎组：冻融卵裂期胚胎移植，共213周期，囊胚组：冻融囊胚移植，共102个周期。两组女性患者年龄23～40 岁，平均（31.05±3.62）岁，两组女性年龄、身体状况经比较不存在显著性意义（P<0.05）。
1.2研究方法
1.2.1 COH方案（控制性促排卵方案）：患者均给予标准COH方案，若患者B超检测结果显示其有3个卵泡直径≥18mm则继续给予患者E2、孕酮等生化指标检测，结合患者实际情况给予HCG（人绒毛促性腺激素）5000～10000 IU肌肉注射，36h 后在B超引导下经阴道穿刺取卵。取卵当天行IVF 或ICSI。
1.2.2胚胎评估 胚胎培养采用序贯培养（vitrolife，瑞典），授精后18-20 h观察受精情况，第3日常规评估胚胎。根据卵裂球数目、形态和碎片数目将卵裂期胚胎分为4级，其中6～10Ⅱ级定义为优质胚胎；D3除选择2～3枚优质胚胎进行移植或冷冻外，剩余的胚胎经患者知情同意后，继续给予5-6d的培养并确定其已经形成囊胚后，将其冷冻保存。而后以胚胎囊胚评分系统（Gardner评分标准）【2】对其进行评估，评分3BC和3CB以上的囊胚视为可用囊胚并将其玻璃化冷冻。
1.2.3玻璃化冷冻与复苏
该过程中患者囊胚及卵裂期胚胎的冷冻、解冻均应用玻璃化法进行，其中冷冻液和解冻液均为美国Irvine公司产品，冷冻机解冻的具体操作严格按照说明书进行。
1.2.4冷冻胚胎移植的子宫内膜的准备方案：采用自然周期或激素替代周期准备子宫内膜。患者移植时间≥14d则对其血HCG进行检测，若检测结果显示患者移植时间≥4周且其B超显示存在孕囊、胎心搏动则判定为临床妊娠。其中患者孕囊检测结果中的个数为胚胎种植个数。此外，若患者停经时间≤12周以内的流产则判定为早期流产。
1.2.5．统计学方法：本次研究使用SPSS19.0软件完成统计，计量资料使用（）进行表达的同时使用t检验，计数资料使用（%）进行表达的同时使用x2检验。检验结果显示P＜0.05者表示两者对比存在显著性差异，有统计学意义。
结果
一般资料：卵裂期胚胎组患者解冻时间持续212个周期，移植时间持续211个周期，其中存在1个周期在解冻后出现胚胎未复苏、移植现象；囊胚组患者解冻时间持续102个周期，移植时间持续102个周期。经统计学分析，卵裂胚胎组与囊胚组患者自身年龄、不孕时间以及HCG日子宫内膜厚度、平均胚胎移植数量等均无显著性差异（P＜0.05）。如表1。
讨论
玻璃化冷冻法是人类人工生殖领域中一项重要的发展技术，其能够对人类配子、胚胎进行良好的冷冻保存而达到相应的生殖目的。具体来将，玻璃化冷冻的实践应用原理主要是通过高浓度的冷冻液、以极快的冷却速度将液体转变为非晶体，从而有效避免以往冷冻过程中细胞内冰晶形成的现象，能有效缓解冰晶形成造成的细胞冷冻损伤，达到提升临床妊娠胚胎复苏、细胞完整的效果【4】。本次研究中特在冷冻前使用机械法以人工完成囊胚的皱缩，而后对囊胚进行玻璃化冷冻，以有效达到提高囊胚复苏存活率的效果。最终本次研究中囊胚组患者的复苏率、流产率和异位妊娠率与卵裂组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），说明玻璃化冷冻法是一种较为理想的、适用于人类卵裂期胚胎及囊胚移植的冷冻方法。临床研究显示，体外胚胎发育至囊胚后再将其植入子宫腔内，能有效达到降低子宫收缩频率、降低胚胎滑出宫腔率的效果【5】。由此证明，囊胚移植同样是一样符合人体生理规律及自然规律的过程，其能调节人体胚胎发育过程以使其更加贴合患者子宫内膜的容受性，使其保持同步状态。有研究显示，囊胚移植与卵裂期胚胎移植相比也更加贴合人体正常的生理状态，患者胚胎种植成功率明显提升【6】。这一点与本次研究结果中囊胚组患者的临床妊娠率和胚胎种植率与卵裂组比较存在显著性差异（P＜0.05）的结果也是一致的。
因此综上所述，玻璃冷冻法是一种理想的、适用于人类卵裂期胚胎及囊胚移植的技术，其能帮助患者达到较为优秀的临床胚胎复苏效果，而冻融囊胚复苏移植周期能有效提升患者的胚胎种植成功率及临床妊娠率。此外，由于囊胚具有较高的种植率，使得单囊胚移植在不明显降低妊娠率的同时，可显著降低多胎妊娠。
参考文献：
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[3] 纪冬梅，章志国，周平.激光皱缩法在囊胚玻璃化冷冻中的应用价值 [J]．生殖与避孕 2013（11）：725-729
[4] 宫立国，刘吉．人类囊胚玻璃化冷冻结局的影响因素 [J]．现代妇产科进展，2010，（12）：949－952。
[5]马兰.胚胎发育速度及解冻后不同体外培养时间对FET妊娠结局的影响[D].南方医科大学，2013.
论文作者:邓爱民,廖婷婷,张建梅
论文发表刊物:《航空军医》2017年第4期
论文发表时间:2017/4/19
标签：囊胚论文; 胚胎论文; 患者论文; 周期论文; 差异论文; 时间论文; 玻璃化论文; 《航空军医》2017年第4期论文;