（1武警总医院 北京 100039）
（2北京中医药大学 北京 100102）
（3江西省药品检验检测研究院/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心 江西 南昌 330029）
【摘 要】目的：控制乳块消片的质量。方法：采用HLPC 方法测定。结果：确定了9 个共有峰，36批样品指纹图谱的相似度均在0.90以上。结论：所建立的指纹图谱简便可靠，可用于乳块消片的质量控制。
【关键词】乳块消片；指纹图谱；初步研究
【中图分类号】R286 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）5-0161-02
乳块消片功能为疏肝理气，活血化瘀，消散乳块，其质量收载于《中国药典》2010年版一部。现标准含量测定中指标控制成分少，因而采用指纹图谱对乳块消片中的橘叶、丹参、王不留行等药味进行了研究，经方法学验证，方法可行，可作为相应的控制标准。
1．仪器设备、试剂试药、样品、与对照品
仪器设备：Agilent1100四元低压梯度泵系列，Chemstation化学工作站。
试剂：乙腈为色谱纯、水为Milli-Q制备的纯化水；磷酸为分析纯。
乳块消片药店采购，共34批。丹参素钠（批号：110855-201311）、原儿茶醛（批号：110810-200506）、王不留行黄酮苷（批号：111853-201102）、丹酚酸B（批号：111562-201212）、橙皮苷（批号：110721-201316）对照品由中国食品药品检定研究院提供。
2．方法与结果
2.1 色谱条件Techmate C18色谱柱；检测波长：282 nm；流速：1.0 mL/min；乙腈(A)-0.2%的磷酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱 ( 0 ～ 30 min，5%→20% A;30 ～ 40 min，20 %A→30%A; 40 ～ 50 min，30%A;50 ～60min, 30 %A→5%A)。
2.2 供试品溶液的制备
取本品10片，除去包衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理60分钟放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
取丹参素钠、原儿茶醛、王不留行黄酮苷、丹酚酸B、橙皮苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含丹参素钠80?g、丹酚酸B 80?g、橙皮苷80?g、含原儿茶醛与王不留行黄酮苷各 40?g的溶液，即得。
2.4 精密度试验
取同一供试品( S1，批号120205) ，按2.2 项下的方法，制备供试品溶液。然后按2. 1 项下条件进样，测定，连续6次。测得其各共有峰的相对保留时间RSD 均＜2% ，相对峰面积RSD ＜ 5% ，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品( 同上) ，按2.2 项下的方法，制备供试品溶液。分别于制备后0，2，6，4，8，10，12，24 h 分别进样，按2.1 项下色谱条件测定，其各共有峰的相对保留时间RSD 均＜ 2%，相对峰面积RSD＜ 5%，结果表明供试品溶液放置24 h 稳定。
2.6 重复性试验
取同一供试品( 同上) ，按2.2 项下的方法，制备6 份供试品溶液，按2.1 项下色谱条件测定，测得各共有峰的相对保留时间RSD 均＜ 2%，相对峰面积RSD ＜ 5%，表明该方法重复性良好。
3 结果与分析
3.1 共有峰的确定 对比所测定20 批次乳块消片样品色谱图，见图1，根据其相对保留时间，从中选定了9 个共有峰作为的乳块消片指纹图谱共有峰，见图2。
3.2 参照峰的选择
精密吸取丹参素钠、原儿茶醛、王不留行黄酮苷、丹酚酸B、橙皮苷对照品混合对照品溶液、供试品溶液各10 μL，按2. 1 项下色谱条件测定，发现各成分在样品图谱中均有体现，2号峰为丹参素钠; 3 号峰为原儿茶酫; 4 号峰为王不留行黄酮苷; 5 号峰为橙皮苷; 8 号峰为丹酚酸B，见图3。8 号峰丹酚酸B峰高度适度，分离度好，保留时间适中，可以作为参照峰。
3.3 相似度测定
取20批乳块消片，按正文[指纹图谱]项下方法制成供试品溶液，色谱测定，记录色谱图。将测定色谱图，分别在Agilent色谱工作站进行积分。逐个以cdf数据文件的形式，导出谱图的AIA文件。将导出的上述20批乳块消片色谱图AIA文件，分别导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（V2.0）。
将导入的20批乳块消片供试品色谱图，对其中9个主要色谱峰进行色谱峰匹配，采用自动匹配生成对照指纹图谱，并导出对照指纹图谱的电子文件乳块消片对照指纹图谱文件.scp，结果见表1。
34批乳块消片供试品色谱图经计算机相似度计算软件与乳块消片对照指纹图谱进行比较，结果除1批（该批未检出丹酚酸A）外，其他相似度结果均大于0.90，从目前的数据说明乳块消片批与批之间有较好的一性。综合以上数据，结合生产的可操作性，暂定相似度不低于0.90。
4 讨论
4.1 检测波长的选择
因丹参素钠、原儿茶酫、丹酚酸B、橙皮苷等的最大吸收波长为282±2nm（分别见图1～5），而王不留行黄酮苷则在270nm有最大吸收，为使各峰的响应值都较大，试验采用了282nm作为检测波长。
4.2 提取方法与时间的考察
采用超声处理15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、加热回流1小时等方法进行提取，结果，四种提取方式供试品均能达到良好的分离，考虑操作方便，故确定本品提取方法为超声处理60分钟。
参考文献：
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[2]CHEN Wei － kang( 陈伟康) ，LUO Yue － hua( 罗跃华) ，XIONGWei( 熊蔚) ． Sutdy on fingerprint chromatogram of Coyrdalis decumbensfor injection( 夏天无注射液的HPLC 指纹图谱的研究) ［J］． Chin J Pharm Anal( 药物分析杂志) ，2008，28 ( 3) :434
[3]邵军等. 夏天无提取物UPLC 指纹图谱及成分定性研究.药物分析杂志，2014，34（9）：1585～1589
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论文作者:王凤林1,何慧丽1,刘,华1,李瑾瑾2,万林春（通
论文发表刊物:《河南中医》2015年5月供稿
论文发表时间:2015/10/13
标签：色谱论文; 图谱论文; 指纹论文; 溶液论文; 王不留行论文; 儿茶论文; 丹参论文; 《河南中医》2015年5月供稿论文;