南华大学附属第一医院 湖南 衡阳 421001
【摘要】：目的 观察高脂饮食饲养造成的肝脏胰岛素抵抗与肝糖输出有关的调控基因表达的关系。方法 选取30只SD雌性大鼠，体重180g左右。随机分成2组，每组15只，对照组给予普通饲料喂养，实验组每天自由采食高脂饲料，并定时灌喂黄油、胆固醇、牛奶和糖等的高脂饮物。测定肝脏糖原含量和计算待测基因的相对表达量。结果 实验组大鼠体重（220.45±16.00）g、Lee′s指数（289.18±3.29）均较对照组（276.61±12.60）g和（310.23±3.63）增高(P<0.05)，实验组与对照组比较，第28周时肝脏3H--2脱氧葡萄糖吸收率下降42.0%([214±176)cpm·min-1·g-1，对(368±3)cpm·min-1·g-1，P<0.05}。胰岛素水平分别为(144.8±27.6)μU/ml与(108.3±29.6)μU/ml，虽有升高趋势，但差异无统计学意义。肝糖原含量增加92.4%/[(13.89±1.75)mg/g组织对(7.22±2.07)mg/g组织，P<0.05。两组大鼠第28周时，肝脏葡萄糖一6一磷酸酶和糖原合成酶mRNA在两组大鼠之间均无差异(P＞0.05)。实验组大鼠肝脏肝脏磷酸烯丙醇竣激酶mRNA，为对照组的141.5%±18.2%，增加41.5%.实验组大鼠协同刺激因子1amRNA，为对照组的130.8%±9.4%，增加30.8%，实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 长期高脂饮食诱导肝脏协同刺激因子la和肝脏磷酸烯丙醇羧激酶基因表达，糖异生增加，同时肝糖分解不能相应受到抑制，导致肝糖输出增加。
【关键词】：高脂饮食；胰岛素; 肝糖输出
[Abstract]: Objective: To observe the relationship between high fat diet and insulin resistance in the liver glycogen output caused by the expression of genes involving. Methods 30 female SD rats were selected, weighing about 180g. Were randomly divided into 2 groups, each group of 15, the control group was fed with ordinary feed, the experimental group was fed with high-fat diet every day, and fed with high fat diet, such as butter, cholesterol, milk and sugar. The content of liver glycogen and the relative expression of the tested gene were determined. Results the rats body weight (220.45 + 16) g, Lee 's index (289.18 + 3.29) were lower than those in the control group (276.61 + 12.60) g and (310.23 + 3.63) increased (P<0.05), the experimental group and control group, at twenty-eighth weeks, liver 3H--2 deoxyglucose uptake rate decreased 42% ([214. 176) CPM - min-1 - g-1, the (368 + 3) CPM - min-1 - g-1, P<0.05}. The level of insulin was (144.8 +. 27.6) U/ml and (+ 108.3 +.) U/ml, although there was an increasing trend, but the difference was not statistically significant (). Glycogen content increased 92.4%/[(13.89 + 1.75) mg/g to (7.22 + 2.07) mg/g, P<0.05. There was no difference between the two groups (P > 0.05) in the liver of the rats in the two groups at the end of the twenty-eighth week of the treatment of glucose, glucose and glycogen synthase (mRNA). The experimental group of rat liver phosphate kinase mRNA allyl alcohol method, the control group of 141.5% + 18.2%, 41.5%. increased in rats of the experimental group of costimulatory factor 1amRNA, the control group 130.8% + 9.4%, 30.8% increase in the experimental group and the control group were statistically significant (P<0.05). Conclusion long term high fat diet induced liver costimulatory factor La and liver phosphate carboxykinase gene expression, increased gluconeogenesis and glycogenolysis, cannot be suppressed, resulting in increased glucose output.
[keyword]: high fat diet; insulin; glycogen output
随着经济高速发展，人们的生活水平提高，高脂食物在饮食中所占比重日渐增大，糖尿病患者人数在逐年增加，数据显示全世界糖尿病患者已达4亿。特别是2型糖尿病具有高致残率和致死率，成为威胁人类健康的主要疾病之一。肝脏作为胰岛素敏感组织，调控糖、脂以及能量代谢，使血糖血脂浓度维持在一定生理平衡范围内［1］。胰岛素抵抗(Insulinresistance，IＲ)是指各种原因导致的胰岛素功能缺失，对外周组织对胰岛素敏感性降低以及患者本身胰岛素分泌不足，细胞摄取和利用葡萄糖的效率下降，细胞糖、脂代谢发生异常，导致机体发生肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝等代谢型疾［2-3］。
1 材料及方法
1.1 实验动物
选取30只SD雌性大鼠(新疆医科大学医学实验动物中心提供)，动物等级SPF(生产许可证号：SCXK(新)2003-0001)，体重180g左右。随机分成2组，每组15只，对照组给予普通饲料喂养，实验组每天自由采食高脂饲料［4］，并定时灌喂黄油、胆固醇、牛奶和糖等的高脂饮物。
1.2方法
测定肝脏糖原含量：动物处死后取肝脏，经等渗盐水漂洗后用滤纸吸干，称取肝脏约50mg，用葱酮法测肝糖原含量，在620nm波长下，用试剂空白管调零后测定吸光度。据所称取的肝脏重量按公式换算成肝糖原含量(以mg/g肝组织表示)。
计算待测基因的相对表达量：采用Tirozl(美国Gibco公司)一步抽提法提取总RNA，聚合酶链反应(PCR)方法见参考文献［5］。扩增产物进行209/L琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下拍照后进行密度扫描，以β一肌动蛋白为内参照，计算待测基因的相对表达量。
1.3统计学方法
采用SPSS19.0软件对实验数据进行统计分析，结果以均数±标准差表示(x±s)。组间两两比较采用Bonferroni法，不符合正态分布的选用非参数检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1两组大鼠体重及Lee′s指数比较
实验组大鼠体重（220.45±16.00）g、Lee′s指数（289.18±3.29）均较对照组（276.61±12.60）g和（310.23±3.63）增高(P<0.05)，见表1。
2.2两组基因mRNA表达的改变
两组大鼠第28周时，肝脏葡萄糖一6一磷酸酶和糖原合成酶mRNA在两组大鼠之间均无差异(P＞0.05)。实验组大鼠肝脏肝脏磷酸烯丙醇竣激酶mRNA，为对照组的141.5%±18.2%，增加41.5%.实验组大鼠协同刺激因子1amRNA，为对照组的130.8%±9.4%，增加30.8%，实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。
3讨论
肝脏胰岛素抵抗是指胰岛素对其靶组织(如肝脏，脂肪细胞和骨骼肌)的作用出现障碍，其中肝脏是胰岛素调节葡萄糖体内平衡的一个主要靶器官，胰岛素刺激肝脏葡萄糖摄取和影响脂质代谢，且在能量代谢发挥着关键作用。研究表明［6］，肝脏发生肝脏胰岛素抵抗时，其质量增大，有关脂质合成的基因及蛋白，如胆固醇调节元件结合蛋白、葡萄糖一6一磷酸酶等表达增加，因此血脂水平如FFA，甘油三酯等浓度升高;胰岛素敏感性下降，葡萄糖摄取能力下降，糖异生过程增强，血糖浓度高，结果导致高血糖症、高脂血症等。胰岛素抵抗是一种由多种病因通路引起的糖脂代谢紊乱，导致血糖血脂代谢水平严重失调［7］。脂质代谢产物在肝脏的异常积累以及糖质代谢的异常，可能是导致胰岛素信号受损和胰岛素抵抗一个常见的途径，且与这些疾病的发病机理有着密切关系［8］。胰岛素抵抗的病因除了影响糖脂代谢的基础通路外，可能还存在其他许多因素的影响，如先天免疫途径［9］、氧化应激通路［10-11］、炎症信号通路［12-13］等。
本研究结果显示，实验组大鼠体重（220.45±16.00）g、Lee′s指数（289.18±3.29）均较对照组（276.61±12.60）g和（310.23±3.63）增高(P<0.05)，实验组与对照组比较，第28周时肝脏3H--2脱氧葡萄糖吸收率下降42.0%([214±176)cpm·min-1·g-1，对(368±3)cpm·min-1·g-1，P<0.05}。胰岛素水平分别为(144.8±27.6)μU/ml与(108.3±29.6)μU/ml，虽有升高趋势，但差异无统计学意义。肝糖原含量增加92.4%/[(13.89±1.75)mg/g组织对(7.22±2.07)mg/g组织，P<0.05。两组大鼠第28周时，肝脏葡萄糖一6一磷酸酶和糖原合成酶mRNA在两组大鼠之间均无差异(P＞0.05)。实验组大鼠肝脏肝脏磷酸烯丙醇竣激酶mRNA，为对照组的141.5%±18.2%，增加41.5%.实验组大鼠协同刺激因子1amRNA，为对照组的130.8%±9.4%，增加30.8%，实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。
【参考文献】
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论文作者:周峻林
论文发表刊物:《中国急救医学》
论文发表时间:2017/8/30
标签：肝脏论文; 实验组论文; 胰岛素论文; 肝糖论文; 大鼠论文; 对照组论文; 葡萄糖论文; 《中国急救医学》论文;