北华大学附属医院 吉林吉林市 132011
摘要：目的 苹果酸脱氢酶（MDH）的测定方法——速率法。进一步探讨、研究MDH在肝炎诊断中的意义和价值。方法 建立了苹果酸脱氢酶的检测方法——速率法，并制备成试剂盒。同时对120例健康体检者、120例肝炎病人和65例肝癌、65例肝硬化病人同时进行了MDH的检测分析。结果 肝炎病人血清中苹果酸脱氢酶明显升高，是对照组的5.2倍。急性肝坏死时升高的更突出，是对照组的11.2倍，经统计学处理P<0.01。肝炎的初期和病情的极期升高的幅度与严重性相关。结论 用速率法判定MDH快速、简便、准确、试剂样品的用量小，可用于各型自动生化分析仪。MDH是肝炎的诊断、判断病情、估计愈后、观察疗效的良好指标，可提高肝炎的早期诊断率。
关键词：苹果酸脱氢酶；速率法；肝炎；肝硬化
苹果酸脱氢酶发现于1910年，肝脏含量丰富，到目前为止分为线粒体中的M-MDH和位于胞浆中的C-MDH两种[1]，国外有人报道临床意义和测定方法，国内报道很少，临床应用主要用于肝炎的检测。测定方法为分光光度法和比色法。速率法未见有报道及试剂盒提供。我们于2005年起对MDH的检测方法和对肝炎的诊断价值进行研究。旨在于为肝炎的诊断提供新的敏感可靠的指标。弥补肝功能常规组项的缺陷。
1 材料与方法
1.1 试剂盒测定的原理
在 340nm波长下，测定每分钟MDH吸光度的变化值（AA/分钟），计算MDH的活性。
1.2 试剂盒测定的方法及主要参数
1.2.1 测定方法：速率法
1.2.2 主要参数：反应温度37℃，测定时间60s，延迟时间：60s。
试剂用量250μL，样品用量25μL，反应波长340nm，反应方向：正反应。
1.3 研究对象
1.3.1 正常对照组
从健康体检中取健康人120例，年龄在28~74岁，平均年龄46.8岁，其中男58人，女62人。
1.3.2 试验组：120例，根据肝炎分型九项、肝功能检查、超声、临床症状体症诊断为肝炎的住院病人，不伴有它疾病，年龄30~75岁，平均年龄47.78岁，其中男59人，女61人。肝坏死病人15例。
1.3.3 试验对照组
肝癌65例，年龄25~76岁，平均年龄47岁，男35人，女30人。肝硬化病人65例，年龄29~64，平均年龄44.4岁，男39人，女36人。
1.4 实验方法和步骤
1.4.1 标本的采集
采集时间为每天早6：00~9：00时，取静脉血2.5ml。
1.4.2 仪器与试剂：
（1）已制备成的试剂盒（MDH诊断试剂盒）
（2）全自动生化分析Areset2000。
1.4.3 标本的检测：按仪器操作规程进行MDH检测。
1.5 统计学处理方法
实验结果以¯X ±SD表示，试验组和对照组比较采用t检验。
2 结果 见表1-3
肝炎病人血清中的MDH明显升高，是对照组的5.2倍，经统计学处理P<0.01
3 讨论：
3.1 肝炎病人MDH检测的临床意义。
我们的研究结果表明，肝炎病人MDH明显升高，与对照组比较有显著性差异，经统计学处理P<0.01。在肝炎发病的初期和极期，病人血清中MDH升高的幅度与病情的严重性相关[2]。当急性肝炎发生坏死时，MDH升高的更为突出。本研究15例肝坏死的病人，MDH是对照组的5.2倍。急性肝炎患者血清中MDH下降的其为缓慢[3]。甚至在黄痰出现后5-8周，AST、M-AST、LDH、GLDH恢复正常后，血清中MDH仍处于高水平。这可能于肝炎时线粒体型MD释放出量大（占线料体酶量的90%），再加上MD-MD在血流中的半寿期较长（28天）有关。[4]肝癌、肝硬化病人血清中MDH轻度升高与对照组比较P<0.05。该酶的测定对判断病情、估计预后、指导治疗具有十分重要的意义。
3.2 苹果酸脱氢酶检测试剂盒的应用前景。我们建立苹果酸脱氢酶的检测方法速率法，并制备成了试剂盒，确立了参考区间：12~30U/L。同时对120例肝炎病人，65例肝癌病人和65例肝硬化病人，120例健康体者进行了检测分析。对肝炎的诊断具有重要价值。可提高肝炎早期诊断率。为临床提供患者痊愈和疗效的指标，弥补肝功能组项的缺陷，速率法检测MDH简便、快速、准确，试剂、样品用量小，可用于各型自动生化分析，易于推广和普及，有广阔的应用前景。
参考文献：
[1]孙芳，胡瑞文等，鸭心苹果酸脱氢酶的分率纯化及酶学性质。生物工程2013，34（23）：239-244。
[2]陈芊伟，呈星等。肝硬化患者血清苹果酸脱氢酶的活性检测。临床和实验医学杂志，2011，10（5）：347-349.
[3]汪新颖，王波等。苹果酸脱氢酶的结构及功能。生物学杂志，2009，26（4）：69-72。
[4]王坤等，实用酶学，重庆，重庆科学技术出版社，第一版，1998：219-221。
论文作者:李彬先,孟宪玲,张晓梅,王丹峰,吴翠翠
论文发表刊物:《健康世界》2015年30期供稿
论文发表时间:2016/4/15
标签：肝炎论文; 苹果酸论文; 病人论文; 血清论文; 速率论文; 对照组论文; 肝硬化论文; 《健康世界》2015年30期供稿论文;