【摘要】 亨廷顿舞蹈病（Huntington disease，HD) 是一种由CAG重复序列异常扩展所致的常染色体显性遗传的神经变性疾病，致病基因IT15序列上CAG的不稳定扩增是HD发生发展的遗传学基础。目前发病机制不明，且没有很好的治疗方法。现将郑州市一例HD患者的临床影像学检查及基因诊断情况作简要报告。方法 对1例临床疑似HD患者的脑影像学特征进行分析；用聚合酶链反应技术方法，对4位家系成员的IT15基因的CAG重复序列进行分析。结果 基因分析确证了该患者IT-15基因序列上CAG重复次数大于35次，为HD患者；该家系成员中Ⅲ6出现舞蹈样不自主运动，但无脑部MRI的异常改变；Ⅲ2、Ⅲ5在临床上表现为不自主的舞蹈样运动，脑部MRI显示出现侧脑室扩大，但是基因诊断IT15基因没有发生突变，基因诊断排除HD。结论 亨廷顿舞蹈病的临床确诊需要结合临床症状、影像学改变及基因诊断进行联合分析。
【关键词】亨廷顿舞蹈病 影像学改变 基因诊断 CAG重复序列
【中图分类号】R741 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）33-0137-02
亨廷顿舞蹈症(Huntington disease , HD) 是一种以神经系统退行性改变为主要特征的常染色体显性遗传病, 临床症状为异常的舞蹈样动作，精神异常及痴呆“三联征”，呈进行性加重[1,2]，影像学上有尾状核和皮质的萎缩[3]。HD在世界上许多国家和地区均发生，发病率为0.05-0.08‰,在西欧和北美地区发病率较高。据统计，HD的发病年龄一般为30～50岁，病情缓慢进展，一般于发病后15～20年死亡[4,5]。起病越早，病情进展越快，男女患病率大致相等。
HD致病的突变基因IT15于1993年被发现位于人4号染色体短臂上，有一段过度扩增的CAG重复序列[6]。HD是由于IT15基因CAG重复序列的异常扩展突变引起[7]。CAG重复数≤26时为正常等位基因，不引起疾病；CAG重复数在27-35时为可引起突变的等位基因，个体本身不会患病，但在减数分裂时易发扩展突变，使后代患病；CAG重复数在36-39时为不完全外显的HD等位基因，携带者可能发病也可能不发病；CAG重复数≥40时为完全外显的HD等位基因，携带个体必然会患病[8]。
临床上通常依靠家族史、“三联征”及影像学上有尾状核萎缩作为诊断标准[9]。本病临床症状、体征和病理改变较为典型，在有家族史的患者，临床诊断比较明确。但临床上其他疾病,如齿状核-红核-苍白球-底丘脑核萎缩(DRPLA)、类似亨廷顿病-2(HDL-2)和脊髓小脑性共济失调17型(SCA17)等也可有舞蹈样动作，当HD缺乏典型临床症状及影像学改变时,与DRPLA、HDL-2和SCA17很难鉴别[10,11]，尤其需要通过致病基因的CAG重复次数进行确诊。
通过对郑州市一例亨廷顿舞蹈病患者的发病情况进行了调查，应用聚合酶链反应扩增IT15基因、结合脑部的MRI图像对家系内IT15基因的CAG重复次数进行检测，并对临床症状，影像学检测和CAG重复次数进行了分析。
1 临床资料
患者（Ⅲ4），女，47岁，已婚，生有一女。因2年来激动易怒，四肢不自主动作，近两月来进行性加重前来我院就诊。主要表现为双上肢舞蹈样不自主动作，行走不稳、易跌倒，言语不清伴记忆力减退。神经系统检查：神志不清，智力下降，定向力正常，无吞咽困难，无眼球震颤，手足不自主伸曲运动，四肢肌出现萎缩，肌力4级、肌张力略减，感觉无异常，腱反射存在，指鼻及跟-膝-胫试验阳性，闭目难立征阳性，病理反射未引出。血尿常规、肝肾功能电解质、心电图检查均正常。头部磁共振断层扫描显示双侧脑部尾状核萎缩和侧脑室扩大（见图1箭头所示）。其家系成员中有类似病史（图2）。
2 方法
2.1 基因组DNA的提取
按照知情同意原则抽取患者，家系成员及正常人外周静脉血5ml，采用TIANamp Blood DNA Kit全血基因组DNA提取试剂盒（D1800-50）抽提基因组DNA作为PCR模板。
2.2 基因检测
根据IT15基因（NG_009378）设计引物，IT15-F: 5’-CCCAGAGCCCCATTCATTGCC-3;IT15-R: 5’-GGCGGCGGTGGCGGCTGTTGC-3’,由上海英俊公司合成。25ul反应体系和条件： 2×GC buffer 12.5 ul,引物各 1.0 ul（10pmol/ ul）,dNTP 1.0 ul(10.0mmol/ ul),TaKaRa LA Taq polymerase(5U/ ul) 0.2 ul (Takara Bio Ltd., Ohtsu, Shiga, Japan),基因组 DNA 200 ng. 94℃预变性5min, 94℃30s,60℃30s,72℃2min,共30个循环。PCR产物由2%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定。电泳条件为电压100V，电泳时间4小时，EB染色后经培清JS－680B全自动凝胶成像分析系统（上海培清科技有限公司）扫描成像。
3 结果
家系成员Ⅲ2、Ⅲ4、Ⅲ5和Ⅲ6基因组DNA样品分别经PCR扩增后，2%琼脂糖凝胶电泳检测显示：健康成员只在250bp附近出现一个条带，而亨廷顿舞蹈病患者除了出现一条正常条带外，在约400bp附近出现一条异常电泳条带。该家系中Ⅲ4和Ⅲ6均出现一条异常扩增电泳条带，而Ⅲ2和Ⅲ5经PCR鉴定后不含有异常扩增条带（图3），提示Ⅲ4和Ⅲ5为致病基因IT15携带者。参照基因序列图，240bp的片段包含25个CAG重复，400bp 的DNA片段约包含75个CAG重复。CAG重复次数=(PCR产物长度-164)/3，最后结果误差在±（1-2）个CAG重复。
4 讨论
本文先证者神志不清，反应迟钝，记忆力减退，已不能正常工作，且症状有加重趋势，显示大脑皮质广泛受累。其脑部MRI结果显示双侧脑部尾状核萎缩和侧脑室扩大，提示脑部影像学出现异常改变；与之相应得，基因检测结果发现：患者Ⅲ4和家系成员Ⅲ6的IT15基因5’端编码区内的CAG三核苷酸重复序列数目＞40次，超过正常范围，支持其可能系亨廷顿病患者。
根据凝胶电泳结果显示：健康对照者只出现一条电泳条带，而疑似亨廷顿舞蹈病患者除此之外，在400bp附近出现一条异常条带。参照基因序列图， CAG重复次数=(PCR产物长度-164)/3，最后结果误差在±（1-2）个CAG重复。计算得先证者CAG重复次数为：62-78次之间。由于所设计的引物序列包括CAG重复序列及其邻近的CCG重复序列，且CCG重复数也存在多态性，若单纯通过琼脂糖凝胶电泳来判断CAG重复数目则会受到CCG重复序列的干扰而不准确。为精确判断CAG重复数目，可采用DNA测序方法进行直接计算排除CCG重复序列的干扰。该家系Ⅲ4和Ⅲ6均携带异常的IT15的异常等位基因，CAG重复数目＞40次，且均为杂合子，既携带IT15的异常等位基因，也携带正常等位基因(CAG重复数目＜35次)。
研究发现该家系经IT15基因突变分析证实存在CAG重复次数的异常扩展，是HD家系。但家系中各成员的临床表现，影像学改变与IT15基因的突变与否存在很大的差异。家系中Ⅲ4和Ⅲ6的IT15基因均出现CAG重复次数＞35，且临床表现符合“三联征”，但是影像学上Ⅲ6并未出现明显的尾状核萎缩和侧脑室扩大，脑平扫仅出现右侧侧脑室前角尾状核头部的不规则FLAIR信号，脑室系统未见明显扩张。Ⅲ2、Ⅲ5在临床上表现为不自主的舞蹈样运动，脑部MRI显示出现侧脑室扩大，但是基因诊断IT15基因没有发生突变，CAG重复次数＜35次，基因诊断排除HD。有研究报道，约1%的患者具有HD的临床表现但是却没有IT15的基因突变[12]。可见，临床上对于HD舞蹈病的确诊需要依赖临床“三联征”，影像学改变及基因诊断等的联合分析。
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论文作者:王仕海
论文发表刊物:《医药前沿》2013年11月第33期供稿
论文发表时间:2014-1-10
标签：基因论文; 家系论文; 序列论文; 电泳论文; 异常论文; 舞蹈病论文; 脑室论文; 《医药前沿》2013年11月第33期供稿论文;