黄素臻 胡鹏 马改霞
（廊坊卫生职业学院 河北 廊坊 065001）
【摘 要】目的：优选血脂清胶囊的最佳提取工艺。方法：以大黄素、大黄酚的总含量及出膏率为考察指标，通过正交试验设计，确定血脂清胶囊的最佳提取条件。结果：最佳提取工艺为第一次加8倍量70%乙醇，浸泡1小时，回流提取2.0小时，第二次加6倍量70%乙醇，回流提取1.5小时。结论：该提取工艺科学合理，数据可靠，适合于生产。
【关键词】血脂清胶囊；提取工艺；正交试验
【中图分类号】R286.26 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0659-02
血脂清胶囊是三河市医院制剂，由丹参、大黄、山楂等六味中药组成，用于治疗血瘀痰浊阻滞所致的头晕，胸闷，高血脂症等疗效显著[1-2]。本制剂以药物粉末装胶囊直接应用临床，为提高药物的生物利用度，根据处方中每味药材有关的化学成分、理化性质、药理作用等特性，制定乙醇作溶媒回流提取的制备工艺。以大黄素、大黄酚总含量为指标，采用正交试验，优选提取工艺。
1 仪器与试药
1.1 仪器
电子分析天平（AB204-N，梅特勒—托利多仪器上海有限公司）；电热恒温水浴锅（BC1，北京中西集团公司）；电热恒温减压干燥箱（DNP-9052，上海精宏实验设备有限公司）；高效液相色谱仪（Agilent 1260型，安捷伦科技有限公司）。
1.2 试药
丹参、大黄、山楂等药材均购自安国美威中药材有限公司（经检验质量符合《中国药典》2010年版一部规定）；血脂清胶囊购自三河市医院；大黄素对照品（111537-200502）、大黄酚对照品（110739-200814）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 乙醇提取次数考察
2.1.1样品溶液的制备
称取20g处方量的药材，加入8倍量70%乙醇，浸泡1小时，回流提取4次，每次1.0小时，分次滤过，回收乙醇，分别定容于50mL容量瓶中，得4次的提取储备液，备用。
2.1.2大黄素、大黄酚的含量测定
2.1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent SB C-18，5μm，3.5×150mm；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(75:25)；检测波长：254nm；柱温：30℃；流速：1.0mL?min-1；进样量：10μL。
2.1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含大黄素、大黄酚各80μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2 mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含大黄素、大黄酚各16μg，)。
2.1.2.3 样品溶液的制备 精密移取“2.1.1”样品溶液2 mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液l0mL，超声处理2分钟，再加三氯甲烷l0mL，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次l0mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.1.2.4样品测定 按以上操作制备样品溶液，分别精密吸取对照品和样品溶液个10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算大黄素和大黄酚的总含量。
2.1.3出膏率的测定
精密移取“2.1.1”各样品溶液30ml，分别置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，计算干膏得率。
2.1.4结果分析
上述方药，经前两次乙醇回流提取，提取的大黄素和大黄酚的总含量已达到92%，其干膏得率也达到90%，说明两次回流提取有效成分已基本提取完全，确定乙醇提取次数为2次。
2.2 乙醇提取工艺考察
2.2.1正交试验设计
乙醇提取次数确定后，选取加溶剂量、乙醇浓度、提取时间三个因素，采用L9（34）正交表进行试验。因素水平设计见表1。
2.2.2试验方法
称取20g处方量的药材，按L9(34)正交表进行提取试验，合并提取液，回收乙醇，定容于50ml量瓶中，按照“2.1.3”法测定出膏率，按照“2.1.2”法测定大黄素和大黄酚的总含量。
2.2.3结果分析
干膏得率方差分析结果为：A因素有显著性意义（P<0.05），B、C因素差异不显著（P>0.05），各因素作用主次为A>B>C。A因素中A3>A2>A1，选择显著因素最好水平为A3；B因素中B2>B1>B3，选择显著因素最好水平为B2；C因素没有显著性差异，因素中C3>C2>C1。
大黄素和大黄酚总含量方差分析结果为：A、C、B因素差异均不显著（P>0.05）。直观分析：A因素中A2>A3>A1，选择因素最好水平为A2；B因素中B1>B2>B3，因B1与B2相差不大（R=0.04），从减少出膏量及最大限度提取有效成分考虑故选B2较为适宜；C因素中C3>C1>C2，选择最好水平为C3。
综合以上方差分析，以大黄素和大黄酚总含量为考察指标来确定提取工艺是比较客观的，干膏得率作为参考，确定最佳提取工艺为A2B2C3，即第一次加8倍量70%乙醇，浸泡1小时，回流提取2.0小时，第二次加6倍量70%乙醇，回流提取1.5小时。
2.3 工艺验证
根据正交试验结果，按最佳工艺条件投料3批进行工艺验证，提取液中大黄素和大黄酚总含量高于正交试验的结果，并且出膏率及大黄素和大黄酚总含量波动很小，说明该提取工艺条件稳定。
3 讨论
本试验结合了处方中各药的化学成分及药理作用，最大限度地提取了有效成分，为血脂清胶囊的进一步制剂研究提供了理论基础和试验依据。
参考文献：
[1]孙玉华,哈木拉提,徐磊,等.降脂颗粒药效学研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,12(8):215-218.
[2]赵士魁,周伟澄.降血脂药物研究进展[J].中国医药工业杂质,2009,40(7):539 -542.
论文作者:黄素臻,胡鹏,马改霞
论文发表刊物:《河南中医》2015年8月
论文发表时间:2016/6/1
标签：大黄论文; 乙醇论文; 溶液论文; 因素论文; 正交论文; 工艺论文; 小时论文; 《河南中医》2015年8月论文;