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【摘 要】目的：本研究建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型，通过检测不同时间点血清S100B蛋白水平，探讨血清S100B蛋白的表达在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病中的早期诊断价值。方法：清洁级，封闭群，健康新生7日龄SD大鼠168只，雌雄不限，体重12～18g，随机分为3组：假手术组，HIBD模型组，健康对照组，每组各56只。根据动物处死时间不同将三组又随机分为7个亚组。各组大鼠在相应的时间点断头取血后处死，收集血液,双抗夹心ELISA法检测血中S100B蛋白的变化。结果：血清中S100B蛋白的表达：HIBD组0h时间点组与正常对照组、假手术组比较血清中S100B蛋白差异无统计学意义（P>0.05）；HIBD组（0h、96h时间点组除外）、与正常对照组、假手术组比较各个时间点血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组48h时间点组分别与HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组比较血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组组间比较血清中S100B蛋白值差异无统计学意义（P>0.05）。结论：S100B蛋白可作为新生大鼠缺氧缺血性脑病早期诊断的生化指标。
【关键词】缺氧缺血性脑病；新生大鼠；S100B蛋白
【中图分类号】R722.1【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）14-059-02
新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是指围生期窒息导致脑缺氧缺血性损伤，是导致儿童神经伤残及死亡的重要原因之一，占婴幼儿神经伤残的25%～28%[1]。然而目前国内对HIE的诊断标准掌握过宽、分度不严、诊断过分依赖CT，没有结合临床表现等问题仍然普遍存在[2]。因此，临床上找到早期反映脑损伤指标显得尤为重要。S100B蛋白是由Moore等[3]于牛脑组织中发现的脑内特异蛋白。本次实验就在此背景下做出实验，欲给HIE的早期诊断带来福音。
1.对象和方法
1.1研究对象 清洁级，封闭群，健康新生7日龄SD大鼠168只，雌雄不限，体重12～18g，随机分为3组：假手术组，HIBD模型组，健康对照组，每组各56只，HIBD模型组采用改良Rice法制备HIBD模型。假手术组只分离左侧颈总动脉但不结扎，缝合皮肤后不做缺氧处理。健康对照组不做任何处理。
1.2研究方法 根据动物处死时间不同HIBD组又随机分为7个亚组：0h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h及96h组，每亚组各8只。假手术组及正常对照组也在相应时间点分为7组，每组8只。各组大鼠在相应的时间点断头取血进行S100B蛋白Elisa检测。
1.3统计学方法 所有数据均以±s表示，用SPSS17.0统计软件进行分析，若实验数据满足正态分布和方差齐性，则采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验，P<0.05为差异有统计学意义；若不满足正态分布或方差不齐时用秩和检验，检验水准为0.05，P<0.05为差异有显著性。
2.结果
2.1 Elisa法检测血清S100B蛋白的值
血清中S100B蛋白的表达：HIBD组0h时间点组与正常对照组、假手术组比较血清中S100B蛋白差异无统计学意义（P>0.05）；HIBD组（0h、96h时间点组除外）、与正常对照组、假手术组比较各个时间点血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组48h时间点组分别与HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组比较血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组组间比较血清中S100B蛋白值差异无统计学意义（P>0.05）；正常对照组、假手术组及HIBD三组在0h、6h、12h、24h、48h、72h、96h7个时间点S100B蛋白浓度变化趋势显示正常对照组及假手术组在不同时间点S100B蛋白表达变化改变不明显，HIBD组的S100B蛋白浓度随着时间的延长S100B蛋白渐渐增加，到48hS100B蛋白浓度达到浓度高峰，72hS100B蛋白浓度开始下降。（见表1）
3.讨论
新生儿缺氧缺血性脑病是由各种围产期因素引起的脑缺氧和脑血流减少或暂停而导致胎儿及新生儿的脑损害。目前对该病的诊断主要依据2004年长沙会议修订的HIE诊断标准[4]。但依据目前的诊断标准对HIE的诊断存在一定的滞后性，且不利于长期检测。
S100蛋白是Moore[3]于1965年在牛脑中发现的。目前已经发现S100蛋白家族有25个成员[5]。S100B是S100家族中在脑内主要的和最具有活性的成员，约96％存在于脑内，因此被认为是脑内特异蛋白。其主要经过肾脏排泄，生理半衰期为2 h，Jonsson等[6]报道血清中S100B蛋白在血清中的半衰期<1 h，因此可以利用蛋白的这种特性动态地观察临床各类疾病的病情变化。有学者报道[7] 足月儿出生窒息和 HIE 脐带血 S100B 蛋白浓度增高，可作为其早期的生化指标。本研究通过监测三组的不同时间点血清中S100B蛋白的浓度结果显示：HIBD组各时间点 (0h、96h)较正常对照组及假手术组各时间点S100B蛋白浓度均增高，差异具有统计学意义(P≤0.05)，进一步证明了HIE后血清中S100B蛋白浓度升高。0h未见明显升高，可能是由于新生大鼠脑部缺氧缺血刚发生时，神经元细胞损伤程度较小，脑细胞水肿不明显或尚未发生，胶质细胞激活数目较少，分泌的S100B蛋白较少，此时血脑屏障功能相对完善，S100B蛋白通过血脑屏障亦较少，因此升高不明显；HIBD组6h、12h、48h、72h时S100B蛋白较正常对照组及假手术组浓度明显升高，可能是由于新生大鼠缺氧缺血后脑细胞水肿，部分胶质细胞开始激活，分泌S100B蛋白进入脑脊液，此时血脑屏障功能破坏，通透性增加，S100B蛋白即透过血脑屏障进入血液当中，血清中S100B蛋白开始升高。血清中S100B蛋白的浓度变化不仅与神经元细胞坏死的程度有关，而且与血脑屏障开放的程度密切相关。这与吴松笛等[8]研究一致。国外亦有学者研究发现[9] S100B蛋白在血脑屏障损伤后的外周血中有明显的时间变化规律。从本研究结果中我们可以看出HIE后的早期6h S100B蛋白就开始升高，48h S100B蛋白浓度达到高峰值，在96h之前S100B蛋白的浓度都高于正常对照组及假手术组，差异具有统计学意义，不仅证明了S100B蛋白可以作为HIE早期脑损伤的一项可靠指标，对HIE的早期诊断具有重要价值，而且显示了血清中S100B蛋白在脑损伤后随着时间变化具有一定规律。这与国内外学者报道一致。国外学者WiesmanM[10]等指出在缺血性脑损伤早期，由于细胞坏死释放出大量S100B蛋白到脑脊液中，并通过损伤的血脑屏障进入血液，因此血液中S100B蛋白升高可比较特异和灵敏地反映中枢神经系统的损伤。对于HIE后S100B蛋白的高峰出现在48h，可能是由于随着脑水肿的发生，颅内压增高，血脑屏障进一步破坏，造成了继发性脑损伤，加上HIE后存在的再灌注损伤，导致神经元细胞大量坏死，胶质细胞进一步被激活，释放出大量的S100B蛋白，同时随着血脑屏障的进一步破坏，大量的S100B蛋白进入到血液中，使血清中S100B蛋白进一步升高，这与国内王兴河[11]等人报道一致。
通过实验结果证明S100B蛋白在新生儿HIE早期的诊断价值，同时为HIE后的S100B蛋白采血时间提供了参考。但基于实验建立在动物的基础之上，可能与新生儿有一定的区别，为了能服务于临床，还有待于临床进一步的大样本研究。
参考文献
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论文作者:冯敏
论文发表刊物:《系统医学》2016年14期
论文发表时间:2016/11/18
标签：蛋白论文; 血清论文; 时间论文; 缺血性论文; 统计学论文; 浓度论文; 屏障论文; 《系统医学》2016年14期论文;