陈 岩 周晓冬
陕西省传染病医院、西安市第八医院 陕西 西安 ７１００６１
【摘要】 目的 通过观察乙型及丙型肝炎感染者血清中自身抗体的变化情况,探讨自身免疫反应在乙型及丙型肝炎中的作用.方法 自身免疫性肝病免疫球蛋白G类抗体采用印迹法、自身抗体谱IgG采用间接免疫荧光法对６６７例乙肝患者、２６４例丙肝患者３０例正常对照进行检测,生化项目采用自动生化分析仪BS－８００检测,乙型及丙型肝炎病毒核酸定量测定采用聚合酶链式反应荧光探针法进行检测.结果 丙肝感染患者自身抗体阳性率２８．４％,乙肝感染患者自身抗体阳性率１９．３％,均高于正常对照(６．６％).均为低滴度,且有自身抗体产生的感染者与无抗体产生的感染者比较丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、乙型肝炎病毒基因均有差异.结论 乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒感染可触发机体自身免疫反应,自身免疫可能是HBV、HCV 感染后组织损伤的重要因素【关键词】 乙肝感染; 丙肝感染; 自身免疫性抗体【中图分类号】R４４６【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０７７３－０１
有学者认为HBV、HCV 肝组织损伤并非HBV、HCV 病毒在肝细胞内复制直接作用的结果,而是机体一系列免疫反应造成肝细胞的病理性免疫损害, 病毒可能参与激活自身免疫性疾病及自身抗体产生[１],近年来国内外学者发现HBV、HCV 感染者存在自身免疫现象,主要表现为血清中检测出各种自身抗体,且与正常人相比有显著性差异[２],干扰素抗病毒治疗将使具高滴度自身抗体或有自身免疫临床表现的乙丙肝患者的病情恶化,因此自身免疫在病毒性肝炎病情发展及癌变中的作用受到研究者的高度重视. １ 材料和方法
１．１ 研究对象我院２０１３年７月—２０１４年６月住院HBV、HCV 感染患者９３１人,其中乙肝６６７人,男性４３９人,女性２２８人;丙肝２６４人,男性１７４人,女性９０人.正常对照组均来自于陕西省中心血站.无急慢性肝肾疾病,且近期未使用抗生素及免疫抑制剂. １．２ 主要仪器和试剂:１．２．１ 主要仪器荧光显微镜免疫印迹扫描仪迈瑞全自动生化分析仪ABI７３００实时定量PCR检测系统台式高速离心机摇床印迹扫描仪
２．２．２ 主要试剂 自身免疫性肝病IgG 类抗体检测试剂盒(印迹法):包被有AMA－M２、M２－３E(BPO)、Sp１００、PML、gp２１０、LKM－１、LC－１、SLA/LP、Ro５２抗原自身抗体谱IgG检测试剂盒(间接免疫荧光法):用于人血清/血浆内自身抗体,主要包括抗核抗体、抗线粒体抗体、抗平滑肌抗体、抗双链抗体、抗肝肾微粒体抗体和抗横纹肌抗体的体外定性检测. 以上试剂均来自德国吕贝克欧蒙医学实验诊断股份公司生产生化:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产乙型及丙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒:湖南圣湘生物科技有限公司
１．３ 试验方法:１．３．１ 自身抗体检测 样本:人血清、乙二胺四乙酸、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆.免疫印迹法测定的项目患者样本用样本缓冲液１:１０１稀释,间接免疫荧光法测定标本欧蒙公司推荐的样本起始稀释度为１:１００.试剂、血清和血浆样本的准备严格按照要求进行室内平衡３０ 分钟,然后按照说明书要求进行操作.１．３．２ 生化项目在深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的全自动生化分析仪BS－８００上采用配套本厂试剂进行测定.１．３．３ ABI７３００全自动医疗PCR分析系统,美国生产,按照说明书要求进行操作检测
２ 结果２．１ HBV、HCV 感染患者者自身抗体检测结果,结果见(表一)
表一 HBV、HCV 感染者与正常对照组自身抗体检测结果
注:与自身抗体阴性组比较:＊＊表示p＜０．０１,＊表示p＜０．０５ ３ 讨论我们在HBV 感染者血清中检出多种自身抗体检出率(１９．３％)显著高于正常对照(６．６％),(p＜０．０１),检出的自身抗体以ANA、Ro５２ 多见,且以低滴度为主,与文献报道基本一致(３).研究结果显示HBV 感染可引发自身免疫反应,导致机体自身免疫紊乱,其机制可能为:①肝炎病毒感染诱导自身抗原修饰,从而诱发自身免疫.②肝炎病毒感染导致控制自身免疫的机制紊乱.③肝炎病毒抗原与机体自身抗原分子模拟.肝炎病毒致敏的免疫活性细胞不但与外来抗原发生特异性免疫反应,也与自身组织成分发生交叉免疫反应.
为进一步明确HBV 感染者自身抗体存在的临床意义,我们对照了感染者年龄、性别与自身抗体的关系,并检测了肝功、病毒载量,发现HBV 感染者自身抗体阳性与阴性组年龄、性别间的免疫差异无关,自身抗体阳性组ALT 、AST、HBV－DNA 显著增高,这说明自身抗体的出现与HBV 在体内的病毒活跃复制有关,HBV 复制可能促进了自身免疫,最终加重了肝脏的病理损害.
据文献报道慢性丙型肝炎存在与HCV 复制有关的自身免疫现象(４,５), 丙型肝炎患者体内常可检测到自身抗体,实验也证明HCV 感染者自身抗体阳性率(２８．４％)显著高于正常对照(６．６％),也高于HBV 感染患者(１９．３％)年龄较大及女性患者更加明显,其原因及理论可能有(１)分子模型机制,指HCV 病毒蛋白和人体某些自身蛋白之间存在序列相似性,导致交叉免疫反应,破坏了免疫耐受和免疫反应的平衡,从而使机体免疫系统持续不断攻击自身细胞或组织,产生自身抗体.(２)旁路激活理论,指病毒感染一个特定的组织后引发局部炎症反应,例如某些细胞因子的释放,最后使得自身反应T 细胞被激活, 从而辅助B细胞繁殖分化,并产生自身抗体.自身抗体阳性组ALT 、AST、HBV－DNA 阳性率、载量也都有不同程度增高,说明慢性丙型肝炎自身抗体增加了自身抗原的递呈,促发肝脏炎症损伤．
参考文献[１] CoviniG,MuhlenCAPacchettiS．etalDiversityofantinuctearantibodyresponsesinhepatocellularcarcinoma．Hepatol,１９９７,２６(６):１２３３－１２６５ 范列英．仲人前,孔宪涛,等慢性肝炎与肝癌患者血清中肝特异性自身抗体的差异分析.上海医学,２０００,,２３(５);２７９－２８１ [２] 张玉洪,叶荻庆,陈瀑等慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化患者血清中自身抗体结果分析.重庆医科大学学报,２００３,２８(３);３５８－３６１ [３] 李东复,杨春荣,孟宪明,等乙肝患者血清中四种自身抗体测定及临床意义[J自身免疫学杂志２００１,１７(９)５０６－５０７ [４] 刘文恩,谭德明,范学工,等,丙型病毒性肝炎发病机制中自身免疫反应的作用[J]世界华人消化杂志１９９９,７(２);９８－９９ [５] 任书荣,张艳丽,邹红霞,等丙型肝炎病毒感染者自身抗体检测及意义[J] 青岛大学医学院学报,２００２,３８(１):６０－６１
论文作者:陈岩 周晓冬
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/29
标签：抗体论文; 免疫论文; 血清论文; 自身免疫论文; 患者论文; 感染者论文; 病毒论文; 《中国综合临床》2015年9月供稿论文;