刘瑞宝[1]2003年在《肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究》文中进行了进一步梳理目的 探讨原发性肝癌中多药耐药基因编码的P-sp表达对肝动脉化疗栓塞术疗效的影响。同时探讨应用化疗药物诱导传代的VX2肿瘤建立移植性耐药肝癌模型以及利用耐药逆转剂进行耐药逆转研究的可行性。 材料与方法 1．临床研究 47例未经过治疗的原发性肝癌患者，依据病人一般状况和肝功，应用不同剂量化疗药物与碘油混合制成碘油-化疗药物乳剂经肝动脉栓塞。其中33人应用常规剂量化疗药物(表阿霉素或阿霉素40mg、丝裂霉素20mg、氟尿嘧啶500mg)；14人应用半剂量化疗药物(表阿霉素或阿霉素20mg、丝裂霉素10mg、氟尿嘧啶500mg)。介入治疗前，在透视引导下，应用18G活检穿刺针经皮、经肝穿刺活检。10％中性福尔马林固定活检肿瘤组织，石蜡包埋，制成4μm厚连续切片。应用JSB-1鼠抗人单克隆抗体，采用链霉亲合素-生物素酶复合物法进行免疫组化染色，检测原发性肝癌中MDR1编码的P-gp表达。光镜下观察200个肿瘤细胞并计算阳性细胞数，平均阳性细胞数＞10％为阳性。首次肝动脉化疗栓塞后2个月进行CT检查，与治疗前比较，按公式(V)=1／2ab~2计算肿瘤体积，按WHO推荐的实体肿瘤疗效判定标准判定疗效，肿瘤体积缩小超过50％为有效。同时分析P-gp表达以及不同化疗药物剂量对肝动脉化疗栓塞术治疗疗效的影响。 2．动物实验 健康日本大耳白兔35只，10只用于肿瘤传代，25只用于建立移植性肝癌模型。携带VX2肿瘤大耳白兔2只，将其中一只麻醉，无菌条件下取出大腿肌肉内传代的肿瘤组织，制成肿瘤悬液注人传代兔大腿肌肉进行常规传代。另一只于传代后2周，连续叁周，每周一次，经耳廓后静脉注人阿霉素注射液(4mg乃耐次)进行间歇性耐药诱导。第叁次化疗结束后一周，取肿瘤组织，再次传代、化疗，共进行叁次传代，每次进行叁次化疗。25只健康大耳白兔随机分为五组，每组5只，全麻下腹正中线切口，暴露肝脏，在肝左叶中部植人1~，的vxZ肿瘤组织，建立移植性肝癌模型。A、B两组植人肿瘤组织取自常规传代兔，C、D、E叁组植人的肿瘤组织取自经过多次传代、化疗药物诱导的传代兔。肝脏内肿瘤植人3周后，进行增强CT检查，确定肿瘤大小。将肝癌模型兔麻醉，无菌条件下腹正中切口，暴露肝动脉，直视下穿刺，分别注人不同化疗药物或生理盐水。其中，A、C两组注人阿霉素4mg(2耐生理盐水稀释)B、D两组注人等量生理盐水，E组经肝动脉注人异搏定lmg(0.2以)和阿霉素4mg(2而生理盐水稀释)。治疗后一周再次进行增强CT检查并与用药前比较，分析各组肿瘤倍增率。处死全部兔，取边缘肿瘤组织，分别于一70℃冻存，ro%中性福尔马林、2.5%戊二醛固定。HE染色和制备电镜标本，光镜和透射电镜(JEM一1200EX)下观察VxZ肿瘤结构。冻存肿瘤组织制成单细胞悬液，PI染色，流式细胞仪检测分析各组肿瘤凋亡率。 3.统计学分析 应用sPsslo.0软件分析实验结果，采用xZ检验和Fishar精确概率检验法、方差分析进行统计学处理，尸<0.05为有显着意义。结、果 1 .47例原发性肝癌病人中，34例P一gP表达阳性，表现为细胞膜和细胞浆均匀或散在棕色颗粒，染色阳性率为72.3%。P一gP阳性表达与性别、乙型肝炎、Child分级、病灶数目、病灶大小、有无包膜、有无门脉栓子等临床病理因素无关。 2.应用常规剂量化疗药物与碘油制成乳剂栓塞的33例HCC患者中，P一gP阳性表达率为69.7%(23/33)。P一gP阴性患者TACE治疗有效率显着高于阳性患者(尸<0.05);应用半剂量化疗药物栓塞的14例HCC中，P一gP阳性表达率为78.6%(11/14)，P一gP阴性与阳性患者间TACE治疗疗效无显着差异(p>0.05);34例P一gP阳性患者中，应用不同剂量化疗药物，疗效无显着差别(尸>0.05);13例P一gP阴性患者中，应用不同剂量化疗药物，常规剂量组有效率高于半剂量组，但无显着差异(尸>0.05)。 3 .VXZ肿瘤传代兔化疗后，将肿瘤组织悬液注人兔大腿内侧肌肉再次传代，传代后瘤组织生长速度无明显变化。 4 .25只模型兔肝脏内肿瘤接种全部成功。叁周后行增强CT检查，肿瘤无强化，边缘光整，与正常肝组织分界清楚，各组之间肿瘤大小无明显差异。经肝动脉注人阿霉素、生理盐水和阿霉素加异搏定一周后行增强CT检查，各组肿瘤体积均增大。比较各组肿瘤倍增率，A组显着低于其它组(尸<0.05);C组肿瘤倍增率低于B、D两组，但各组之间无显着差异(尸>0.05);E组肿瘤倍增率低于C、D两组，但无显着差异(尸>0.05)。 5.形态学改变:传代后，经过耐药诱导的VXZ肿瘤与常规传代肿瘤组织在形态上无明显区别。 6.肿瘤凋亡:流式细胞仪检测各组肿瘤凋亡率，其中A组高于B、C、D叁组，并存在显着差异(尸<0.05)。C组高于B、D两组，但各组间无显着差异(尸>0.05);应用异搏定加阿霉素的E组肿瘤凋亡率高于C、D二组，但是，各组间无显着差异(尸>0.05)。结论 1.多药耐药是影响肝动脉化疗栓塞术疗效的重要因素，治疗前检测P一gP表达对制定个体化治疗方案有重要意义;减少P一gP阳性肝癌患者中化疗药物用量不影响介人治疗疗效;在P一gP阴性
王宁[2]2005年在《肝癌介入治疗与肝癌多药耐药实验研究》文中研究指明肝癌细胞的多药耐药性是影响肝癌治疗效果的重要原因之一,因此研究如何克服和逆转多药耐药性对于肝癌乃至其他恶性肿瘤的治疗,具有非常重要的意义。我们采用前瞻性临床对照研究,探讨原发性肝癌中多药耐药性对介入治疗疗效的影响,比较TACE 联合PAI 治疗和单纯TACE 治疗的效果。同时应用人肝癌细胞株HepG2,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系HepG2/ADM,检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性及多药耐药相关基因表达水平。比较ADM 诱导HepG2 和HepG2/ADM 凋亡的差异,并探讨联合应用热化疗诱导HepG2/ADM 凋亡的机制。发现肝癌细胞存在多药耐药性比较普遍,TACE联合PAI 治疗肝癌有较好的临床疗效。阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法建立的多药耐药细胞系HepG2/ADM 具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR1 mRNA 表达升高。热化疗具有较强的诱导HepG2/ADM凋亡的作用,这种作用与p53、bax、bcl-2 表达的调节及细胞内药物浓度的增高有关。
梅红军[3]2015年在《阿霉素调控骨肉瘤细胞的Notch通路活性》文中提出Notch信号通路在包括细胞增殖、分化及凋亡等多种生物活动中扮演关键角色。目前证据表明,异常表达的Notch信号通路能够促进骨肉瘤形成。但是,目前还不清楚传统化疗药物阿霉素对Notch信号通路的影响。为解决这一问题,我们使用不同剂量的阿霉素处理骨肉瘤细胞。我们发现,发挥细胞生长抑制效应的阿霉素能够提高Notch信号通路靶基因的表达,激活Notch信号通路,呈现除剂量依赖性。但是,起到细胞毒性效应的阿霉素可以显着性抑制Notch信号通路。我们的研究结果表明阿霉素与Notch信号通路之间存在显着性关联。第一部分骨肉瘤细胞中的阿霉素作用剂量的优化实验目的：确定后续各种实验中阿霉素对骨肉瘤细胞作用的最佳剂量范围。方法：骨肉瘤细胞经过培养,胎盘蓝染色以证实骨肉瘤细胞的活性。其后,在96孔板内进行剂量依赖的细胞毒性实验。按照不同剂量及不同作用时间处理骨肉瘤细胞,遵照CCK-8试剂盒说明书处理各孔细胞,在450 nm波长酶标仪检测光密度(OD)值。结果：与对照组比较,阿霉素的骨肉瘤细胞毒性作用在24h没有出现统计学上的显着性差异(p>0.05),存活细胞数没有明显变化,但是在48h显现出统计学上的显着性差异(p<0.05) (Fig.1A)另外,剂量在0.5μM以上时,阿霉素毒性作用效应呈现统计学上的显着性差异(p<0.05),尤其是1,2和4gM剂量时显现出统计学上的极度显着性差异(p<0.01),存活细胞数变化明显。但是,在0.5gM时没有发现阿霉素细胞毒性效应具有统计学上的显着性差异(Fig.1B,p>0.05)。结论：阿霉素在骨肉瘤细胞中发挥细胞毒性作用还是细胞生长抑制作用的临界剂量是0.5gM,而且阿霉素作用呈现剂量-时间依赖关系。第二部分阿霉素增加骨肉瘤细胞的Notch信号通路靶基因的表达实验目的：阐明小剂量阿霉素对骨肉瘤细胞Notch信号通路的影响。方法：传代骨肉瘤细胞经过阿霉素处理48h,其中阿霉素剂量在0.5μM以下,分别设置为0.1,0.25和0.4μM叁个剂量。使用实时RT-PCR技术检测骨肉瘤细胞Notch信号通路靶基因Hes-1,Hes5,Hey1,Hey2和HeyL的基因转录水平,以评估低剂量阿霉素对骨肉瘤细胞的作用效应。此外,我们还通过western-blot技术检测Notch信号通路靶基因蛋白表达水平,进一步明确阿霉素对Notch信号通路的作用效果。结果：骨肉瘤细胞经过0.1μM阿霉素处理48h后,通过实时RT-PCR技术检测靶基因Hes-1, Hes5, Hey1, Hey2和HeyL的mRNA水平,结果显示具有统计学上的显着性差异(Fig.2A,p<0.05)。进一步研究显示,骨肉瘤细胞经过递增的低剂量阿霉素(0.1,0.25和0.4μM)处理48h后,靶基因Hes-1和Hey1的mRNA水平上调,具有统计学上的显着性差异,呈现剂量依赖性(Fig.2B,p<0.05)。此外,通过western-blot技术进一步验证,表明阿霉素增加Hes-1和Hey1蛋白表达,具有统计学上的显着性差异(Fig.2C,p<0.05),证实阿霉素可以激活Notch信号通路,从而影响骨肉瘤干细胞特性。结论：低剂量阿霉素可以上调骨肉瘤细胞Notch信号通路靶基因的表达,呈现剂量依赖关系,提示阿霉素可以通过Notch信号通路影响骨肉瘤干细胞的特性。第叁部分高剂量阿霉素减少Notch信号通路靶基因表达实验目的：证实高剂量阿霉素对骨肉瘤细胞Notch信号通路的作用。方法：骨肉瘤细胞经过1gM阿霉素处理48h后,显现明显杀伤肿瘤细胞的作用。实时RT-PCR技术检测Notch信号通路靶基因Hes-1, Hes5, Hey1, Hey2和HeyL的mRNA水平,并通过western-blot技术检测验Notch信号通路靶基因蛋白表达水平,以进一步验证实时RT-PCR检测结果。结果：实验结果表明,骨肉瘤细胞经过高剂量阿霉素处理后,实时RT-PCR技术检测到Hes-1, Hes5, Hey1, Hey2和HeyL的mRNA表达水平明显受抑制,具有统计学上的极度显着性差异(Fig.3A,p<0.01)。并且,通过western blot技术检测到Hes1和Hey1蛋白表达明显下调,从蛋白水平验证了实时RT-PCR检测结果(Fig.3B,p<0.05)。结论：高剂量阿霉素可能通过降低Notch信号通路靶基因表达,发挥对骨肉瘤细胞毒性作用。
佚名[4]1996年在《湖南医科大学学报1996年第21卷1～6期文题索引（按文题中主题词的汉词拼音字母顺序排列，（期）：起—迄页）》文中提出湖南医科大学学报１９９６年第２１卷１～６期文题索引（按文题中主题词的汉词拼音字母顺序排列，（期）：起—迄页）Ａ癌癌人体结直肠癌Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变检测（６）：Ｂ白斑鼻冰丙病（６）：白血病白血病患者多药耐药与白细胞内谷胱甘肽含量的关系（２）：１３４—...
参考文献：
[1]. 肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究[D]. 刘瑞宝. 中国医科大学. 2003
[2]. 肝癌介入治疗与肝癌多药耐药实验研究[D]. 王宁. 吉林大学. 2005
[3]. 阿霉素调控骨肉瘤细胞的Notch通路活性[D]. 梅红军. 武汉大学. 2015
[4]. 湖南医科大学学报1996年第21卷1～6期文题索引（按文题中主题词的汉词拼音字母顺序排列，（期）：起—迄页）[J]. 佚名. 湖南医科大学学报. 1996
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