湖南省郴州市第一人民医院中心医院 湖南郴州 423000
摘要：近些年，免疫组织在我国已经得到了广泛的发展、应用，几乎在所有病理科室的日常工作过程中都需做许多免疫组织来辅助病理的诊断，免疫组织化学成为了医院病理科室工作中不可或缺的一项重要辅助技术，其不但可以让病理诊断的结果更加精确，便于对肿瘤类型进行正确的分类，而且还可以对部分肿瘤预后进行有效的预测、提供更加有效的治疗依据。本文主要就病理科室日常工作中免疫组化组织对照的设计与应用进行详细的分析，进而使免疫组化在诊断、研究、鉴别工作中的作用得到真正发挥。
关键词：免疫组化；组织对照；设计；应用
有效、科学、合理的应用、设计组织对照是控制免疫组化质量的关键，其能够使实验过程中使用的所有试剂效用性得到保障，且可以使病理诊断更加准确、实验结果更加真实。不论是免疫组化的室间控制还是室内质控，只要是合理的使用组织对照即可让免疫组化实验、工作中存在的问题全面、客观的体现出来。但是，若将组织对照应用在病理科室日常的免疫组化的染色工作中，会增加相关人员的工作量及科室的成本。参照免疫组化中染色结果的不同判读原则，即定性判读和半定量判读来设计不一样的免疫组化对照组织。
1.免疫组织技术的基本原理
利用免疫学中的抗原、抗体的结合反应，且采用特异性的抗体，如多克隆或者单克隆对细胞、组织中的相关抗原物质进行检测，可以形成抗体、抗原有机结合的复合物。该复合物中带有事先做好的标记物，利用与标记物对应的系统对其进行检测之后，如果酶底物产生显色反应则可以使其现象出某种颜色，进而就能够将组织细胞中的抗原检测出来，达到鉴别、诊断、研究的具体目的。
2.半定量判读原则下的免疫组化组织对照设计
半定量判读原则下的免疫组化组织对照是针对相应组织中细胞增值的指数测定、激素受体的含量、药物的分子靶等一些肿瘤治疗、用于预后的免疫组化染色，在此类染色中除了需对其是否属于阳性进行判读之外，还必须判定阳性染色强度及染色细胞数，为此可以选择多点组织对照。以乳腺癌中的HER-2的检测作为相应的例子，乳腺癌的诊疗标准中早已将HER-2免疫组化的判读标准纳入其中，并且还明确定义出染色的结果分级。参照该判定标准即可筛选我实验室中的乳腺癌患者，可以将0～3+的所有不同病例选出来，再利用组织芯片仪进行采点，且将免疫组化中4点组织对照的小组织芯片设计并制作，就可以将该组织对照芯片应用在病理科室的日HER-2免疫组化的染色工作中。
对于其他半定量判读结果中的组化染色而言，全部都可以通过免疫组化的3点组织对照来对其染色结果进行判定。参照抗体自身特点的不同，收集日常工作过程中所有抗体阴性的对照组织、阳性较强的对照组织和阳性极弱的对照组织，其中每种对照组织各选取1例，通过组织芯片仪来采点并进行制作。对免疫组化进行染色的过程中，应在接受检测的组织四周黏上对照芯片，并一起进行相应的染色。以上两种抗体的免疫组化染色并不只是单纯的判读其阳性及阴性，且对阳性程度进行判读可以在病例中起到不一样的指导作用，因而对免疫组化中染色的质量要求相对较高，要求所有测试切片一定要附带相应的对照组织。
3.定性判读原则下的免疫组化组织对照设计
一般情况下，染色结果可以给病理的分型提供可靠依据或者病理的诊断提供一定的佐证，而在这种免疫组化的染色结果中，只需要作出阴性或者阳性判读。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆对此，可以利用免疫组化中的单点组织对照，对于这类抗体可以根据其功能划分为五种类型：I类是病原体的微生物标记物，比如EBV、HBSAg、HBCAg；Ⅱ是特异性的肿瘤标志物，如HMB45、glypican-3；Ⅲ是组织分型类标记物，比如CD20、AE3、CD45；Ⅳ是特异性的器官标志物，Herpar1、PSAP等；第Ⅴ是是特异性已经消失的肿瘤标准物，如MMSHC、p63[1]。对前两类及第Ⅴ类抗体进行免疫组化的染色过程中，应将免疫组化的单点组织对照添加到其中，此类对照主要是选择日常工作中阳性较强的病例，利用组织芯片仪进行取点之后再将其制作好。在第Ⅲ和第Ⅳ类抗体免疫组化的染色中，往往会要求病理医生事先告知接受检测的组织有没有内部的阳性对照现象，如果有内对照现象存在通常就无法将对照组织添加在被测的组织旁边，但是若无法判定有没有存在内对照，可以在被测的组织周围添加相应的外部免疫组织阳性对照。对此类抗体进行组织对照设计时，会将兼顾的原则应用到其中，兼顾原则主要就是将一种组织当作多种抗体组织的对照，比如可以利用阑尾组织对S100、EMA、a-SMA、vimentin等抗体进行测试；在扁桃体组织中，若其含有滤泡即用作各个淋巴瘤的分型抗体免疫组化的对照组织。
在所有免疫组化的染色切片中，其均含有各自相应的对照，而且受检测的组织和对照组织均在同一载的玻片上，条件相同的情况下对其进行染色可以确保这两种组织的实验条件相一致，可以对免疫组化的质量实时进行监控，进而给医师判读染色结果、分析问题染色提供相应的依据。因为一些抗体中可能有多个不一样的功能存在，无法采用以上的标准对其进行分类，所以病理技术者设计免疫组化的对照之前应与病理医师进行有效的沟通，且应让病理医师参与、指导免疫组化的组织对照设计、制作工作[2]。
4.免疫组化组织对照在日常工作中的应用
病理科室在开展日常具体工作的过程中，根据传统方法对免疫组化组织对照进行设计、制作时不仅费力、费时，而且价格也非常昂贵，还需要许多组织资源。从而致使常规的免疫组化组织对照片的设计、制作成为了病理科室日常免疫组化染色工作中的负担之一，由此可以看出免疫组化的染色结果缺少相应的可靠性。英国利用免疫组化的质量评估来对ER染色进行研究的结果中表明，单纯的进行强阳性组织对照、仅仅利用正常的腺体来对免疫组化的染色进行对照评估时，其结果并不够准确。在阳性较强的病例中，即使其染色的敏感性不断的降低，但仍然可以表达出自身的强阳性。在正常的腺体中，其核阳性的表达具有不稳定性和有限性，因此对上述所说的免疫组化的质量进行控制时必须做好更进一步的优化工作，免疫组化组织对照就属于一种新尝试。免疫组化组织对照与传统的对照相比具有一定 优越性：其可以使芯片组织钻取中生物学的表达标准化得以实现。待检组织和芯片组织可以条件相同时进行相应的免疫组化染色，进而使二者的可比性得到提升，且使组织表达结果的判读也显得更加方便。还能够同时对阴性对照、阳性对照进行设立；在等级表达生物学的标记中，组织对照的表达水平不同更加有利于对半定量进行准确的分析[3]。
综上所述，病理科室在日常工作中开展免疫组化的染色工作时，应合理、有效的应用组织对照，免疫组化组织对照的运用可以是疑难杂症得到有效、明确的鉴别，且还可以是诊断结果的准确性得到提升。在病理科室的日常工作中大量应用免疫组化组织对照，可以是基层医院的整体诊断水平得到提升，对医院病理科室的持续发展有一定的推动意义。但是，如何对组化对照进行设计、优化、制作也是一项比较重要的工作，因此相关人员比较引起重视。
参考文献：
[1]邓伟，杨春梅，黄江生.病理科室日常工作中免疫组化组织对照的设计及应用[J].诊断病理学杂志，2014，45（6）：402.
[2]陈海玲，杨杰，牛多山.免疫组化在基层医院中的应用[J].中国民族民间医药，2010，35（52）：196-197.
[3]张卫琴.免疫组化技术在病理诊断中的应用[J].安徽医药，2012，23（54）：785-786.
论文作者:蒙天云
论文发表刊物:《健康世界》2015年2期供稿
论文发表时间:2015/11/17
标签：免疫论文; 组织论文; 病理论文; 阳性论文; 抗体论文; 科室论文; 日常工作论文; 《健康世界》2015年2期供稿论文;