张翼[1]2004年在《海藻抑制乙酰胆碱酯酶活性及红藻海头红化学成分的研究》文中研究说明本论文主要由叁章组成。第一章详述了乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型的建立及海藻组分对乙酰胆碱酯酶抑制活性的研究，第二章详述了红藻海头红化学成分的研究，第叁章对海藻生物活性成分研究概况进行了简要的综述。 阿尔茨海默氏病是老龄化社会面临的重大疾病之一，而乙酰胆碱酯酶抑制剂是目前临床疗效最显着的治疗该病的药物，海藻则是包括酶抑制剂在内的海洋药物的重要来源，因此我们建立了基于分光光度法的乙酰胆碱酯酶抑制剂体外筛选模型，并首次对青岛沿海的 22 种海藻进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测，结果表明 22种海藻的石油醚组分均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性，其中亮管藻、海头红、鸭毛藻和孔石莼活性较显着；这些海藻的乙酸乙酯组分中，只有鸭毛藻、孔石莼表现出显着抑制活性，其余的多数没有抑制活性或活性较弱，然而有些反而表现出不同程度的增强作用。 结合抗肿瘤活性及乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选结果，选取红藻海头红进行进一步的化学成分研究。综合利用各种植物化学分离手段，从海头红的甲醇-氯仿（1 :1）提取物中分离到单体化合物 37 个，采用多种现代波谱技术手段鉴定了其中 6 个化合物的结构，包括 2 个脂肪酸类成分，2 个甾醇类成分，以及 2 个甾醇的脂肪酸酯，其中 5 个在海头红化学成分研究中为首次报道；另外还对该提取物的挥发性成分作了 GC-MS 分析，显示含有烷烃及脂肪酸甲酯等成分。其它化合物的结构鉴定工作因样品量太少而非常困难，目前仍在进行中。
宋庆[2]2011年在《发酵豆制品中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离纯化研究》文中进行了进一步梳理发酵豆制品具有多种保健功能,如降血压、降血糖、降血脂、抗氧化、溶解血栓、抗癌、抗老年性痴呆和抗菌等。本论文主要从发酵豆制品可以抗老年性痴呆症的角度,研究了发酵豆制品中的乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选方法的建立,提取工艺优化,分离纯化的探讨等,主要研究结果如下:1筛选方法的建立建立基于分光光度法的乙酰胆碱酯酶抑制剂体外筛选模型,发现AchE浓度同OD值成正比例关系,即可用OD值表示酶活;通过薄层层析-生物自显影实验表明,利用Ellman试剂作为反应试剂,具有较好的显色效果。选用分光光度法测定不同地域的豆豉和腐乳提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性,结果表明,重庆永川豆豉提取物在1.0 mg/mL时对乙酰胆碱酯酶的抑制率最高为52.36%。2提取工艺优化采用乙醇回流提取工艺从豆豉中提取乙酰胆碱酯酶抑制剂,通过单因素实验和正交实验优化豆豉中乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂的提取工艺,并通过分光光度法测定豆豉提取物对AchE的抑制能力。结果表明最佳提取工艺为:提取时间为90min、料液比为1:12、提取温度为75℃、乙醇的浓度为80%。按照工艺优化出来的条件,进行了验证性实验,测得豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂在1.0 mg/mL时的抑制率为53.40%。3分离纯化的探讨选用重庆永川豆豉作为分离材料,对其具体的活性单体进行了系统的分离工作,采用萃取,大孔吸附树脂富集,硅胶柱层析,Sephadex LH-20层析和重结晶等手段。选用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取后,活性部位主要分布在石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯中,通过对石油醚组分进行纯化,最后得到2个高活性组分,分别为白色晶体(1)和白色粉末(2),用10%的乙醇稀释成1.0mg/mL,其对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别为:95.27%和100.00%。通过对二氯甲烷组分进行纯化,最后得到1个高活性组分,为淡黄色粉末。用10%的乙醇稀释成1.0mg/mL,对乙酰胆碱酯酶的抑制率为100.00%。活性相对于纯化前有很大的提高。本论文将分光光度法、薄层层析生物自显影技术和现代色谱分离技术结合起来,对发酵豆制品中的乙酰胆碱酯酶抑制剂进行分离纯化,取得了较好的效果。
徐睿[3]2010年在《海带和菲律宾蛤仔提取物对酪氨酸酶活性和黑素生成影响的研究》文中提出酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一种含铜的氧化还原酶,广泛存在于生物体中,是生物体合成黑色素的关键酶,筛选天然来源的酪氨酸酶抑制剂,可以为美白化妆品或以酪氨酸酶为作用靶点的药物开发提供依据。本研究对15种海洋藻类和5种海洋动物进行了酪氨酸酶抑制活性的筛选,结果表明海带和菲律宾蛤仔提取物对酪氨酸酶有明显的抑制作用。通过正交试验确定了这两种海洋生物提取物的最佳提取条件,系统研究了提取物对酪氨酸酶的抑制效果和作用机理,评价了其抗紫外线催化作用等生物活性,相关研究内容及结果如下：1.建立了筛选酪氨酸酶抑制剂的反应体系,确定以1.0mmol/L的多巴为底物,酶的终质量浓度为3.14mg/L,反应温度32℃,pH6.8,反应稳态时间为1min,以20%DMSO水溶液为测活提取物溶剂。依据建立的筛选体系,比较了15种海洋藻类和5种海洋动物提取物的酪氨酸酶抑制活性,发现海带提取物和菲律宾蛤仔提取物对酪氨酸酶抑制活性最强。2.用传统浸提法对海带中的酶抑制成分进行提取,通过单次单因素实验与正交试验结合的方法对提取条件进行了优化。最佳提取条件为：乙醇浓度50%,提取温度40℃,提取时间为3h,料液比为1g：12mL。乙醇提取物经有机溶剂萃取,依次得到乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性组分,酶活抑制实验表明：水溶性组分对酪氨酸酶有明显的抑制作用,其IC50约为0.16mg/mL。进一步动力学分析表明,水溶性组分对酪氨酸酶具有竞争性可逆抑制作用,抑制常数KI=0.07mg/mL。定性测定结果表明：水溶性组分中具有其他两种萃取物所不具备的酚类等物质,结合已有研究,初步判断水溶性组分中对酪氨酸酶起抑制作用的物质很可能是酚类。采用等毒法研究水溶性组分与熊果苷和曲酸的协同抑制作用,结果表明：水溶性组分与曲酸对抑制酪氨酸酶活性有协同作用。3.对菲律宾蛤仔提取物的最佳提取条件为：乙醇浓度95%,提取温度50℃,提取时间为4h,料液比为1g：8mL。菲律宾蛤仔乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性组分都具有较强的酪氨酸酶抑制作用,IC50分别为0.43mg/mL、0.63mg/mL、0.72mg/mL。进一步动力学分析表明,乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物对酪氨酸酶具有非竞争性可逆抑制作用,抑制常数分别为0.47mg/mL、0.71mg/mL。水溶性组分对酪氨酸酶具有竞争性可逆抑制作用,抑制常数为0.31mg/mL。联合抑制试验表明：乙酸乙酯萃取物与熊果苷对抑制酪氨酸酶活性有协同作用,水溶性组分与曲酸具有协同作用。4.以海带提取物水溶性组分,菲律宾蛤仔乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性组分作为待测物质,分别研究它们的抗紫外线催化作用,抗多巴自动氧化作用和促黑素分解作用,结果表明：四种组分均具有极显着的抗紫外线催化作用,另外海带提取物水溶性组分和菲律宾蛤仔石油醚萃取物具有显着的促黑素分解作用,海带提取物水溶性组分和菲律宾蛤仔提取物水溶性组分具有显着的抗多巴自动氧化作用。
参考文献：
[1]. 海藻抑制乙酰胆碱酯酶活性及红藻海头红化学成分的研究[D]. 张翼. 中国科学院研究生院（海洋研究所）. 2004
[2]. 发酵豆制品中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离纯化研究[D]. 宋庆. 上海师范大学. 2011
[3]. 海带和菲律宾蛤仔提取物对酪氨酸酶活性和黑素生成影响的研究[D]. 徐睿. 中国海洋大学. 2010