湖南中医药大学第一附属医院 长沙 410007
【摘 要】目的：探讨高血压病进展与心肌TGF-β1的相关性。方法：SHR大鼠及WKY大鼠各20只，于实验开始和实验2周末自SHR大鼠和WKY大鼠中每次各随机抽取10只大鼠进行相关指标检测。结果：SHR大鼠的尾动脉收缩压和心肌TGF-β1的表达随着周龄的增长而明显升高，SHR大鼠7周龄时已明显高于两正常对照组（P＜0.05），至9周龄时进一步升高，明显高于高血压7周龄组（P＜0.05）。结论：收缩压的升高可诱导心室重构的发生，而TGF-β1可作为较为可靠的潜在疗效性指标。
【关键词】高血压；SHR大鼠；TGF-β1；相关性
高血压是一种以体循环动脉压升高为特点，由基因遗传、环境及多种危险因素相互作用所致的全身性疾病。其中原发性高血压占95%以上，该疾病是心脑血管疾病的重要危险因素，严重威胁人类健康[1]。转化生长因子β1（Transforming growth factor-beta 1，TGF-β1）被认为与高血压心室重构有关，但具体相关性有待研究。本实验旨在利用自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertensive rats，SHR）作为高血压动物模型，探讨高血压病进展与心肌TGF-β1的相关性，现将实验方法及结果报道如下。
1.材料与方法
1.1动物
SPF级健康7周龄SHR大鼠20只，以及同品系同周龄WKY大鼠20只，均雌雄各半。保持光照时间每日12小时明暗各半，笼具垫料使用碎刨花及锯末，每两天更换1次，自由摄取标准水和食物。动物房温度保持在22—24℃，湿度保持在40—70％，避免噪音。动物许可证编号：SCXK（湘）2014-0012。
1.2动物饲料
普通饲料，由湖南中医药大学实验动物中心提供。
1.3主要试剂与仪器
试剂：TGF-β1抗体（美国Santa Cruz公司SC-146）
仪器：大鼠尾动脉血压测量仪（ZN17-DSWY1）
台式高速离心机（TGL-16G）
1.4方法
1.4.1 动物分组及处理方法
SPF级健康7周龄SHR大鼠20只，以及同品系同周龄WKY大鼠20只。于实验开始和实验2周末自SHR大鼠和WKY大鼠中每次各随机抽取10只大鼠进行相关指标检测。两次抽取后的四组大鼠分别命名为高血压7周龄、9周龄组和正常对照7周龄、9周龄组。
1.4.2 取材方法
将大鼠用10%水合氯醛（按3.5ml/kg）麻醉后，冰台活体取心脏，沿左、右冠状动脉下缘切开心脏，用冰盐水冲洗血块、滤纸吸干水分后放入液氮冻存。
1.4.3大鼠基础血压的测定
大鼠于早晨未进食前、清醒状态，应用大鼠尾动脉无创血压测量仪测量血压。室温下，将安静状态大鼠置于固定装置，将尾动脉无创血压测量仪的尾部气囊套入鼠尾近心端，脉搏换能器套入气囊装置内，缓慢加热至39℃使鼠尾血管充分扩张，另一端通过生理四通道信号采集仪连于电脑，待电脑收集信号稳定后，充气加压，直到脉搏信号成为一条直线，然后逐渐放气减压，待脉搏信号出现规则波形时，电脑读出血压值，每只大鼠每3分钟测1次，重复3次取均值。
1.4.4 心肌TGF-β1蛋白表达的检测
各组取约60—80mg左室心肌组织，制成20％匀浆后离心，取上清液 100ul进行 ELLSA 检测，在 ELISA 检测仪上，依序测量各孔的吸光度（OD值）。
1.4.5 统计学处理
所有资料进行正态性检验，用SPSS19.0统计分析软件包进行处理，计量资料均采用 表示，多组均数组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用LSD法，方差不齐时采用Tamhane’T2法，显著性水准P=0.05。
2.结果
2.1各组大鼠尾动脉收缩压的变化
SHR大鼠的尾动脉收缩压随着周龄的增长而明显升高，SHR大鼠7周龄时已明显高于两正常对照组（P＜0.05），至9周龄时进一步升高，明显高于高血压7周龄组（P＜0.05）。两正常对照组之间差别无显著性差异（P＞0.05）。
3.讨论
TGF-β1是由多种细胞分泌的一类具有多重生物学效应的生长因子，广泛存在于动物正常组织细胞和转化细胞中，可以影响多种细胞的生长、分化、细胞凋亡及免疫调节等功能。TGF-β1 就在胶原代谢中发挥着重要桥梁的作用[2]，已有众多研究提示它参与调节正常细胞外基质（ECM）的动态平衡和组织纤维化[3-4]。给予抗TGF-β1中和抗体可阻止 ECM 蛋白表达及抑制心肌肥厚。高血压时，心肌负荷加重，促使AngⅡ增多，AngⅡ通过 AT1R 上调 TGF-β1 的表达，从而刺激细胞外基质（ECM）蛋白过度表达，同时下调 MMP-1的表达，上调组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP）的合成，抑制胶原降解，并促进心肌成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，合成Ⅰ型、Ⅲ型胶原，尤其是Ⅲ型前胶原的沉积与 TGF-β1 密切相关，诱导心肌重构[5]。
高血压7周龄、9周龄两组SHR大鼠尾动脉收缩压逐渐升高，且伴随着心肌TGF-β1水平也不断升高，表明TGF-β1参与了高血压心室重构的过程，且收缩压的升高可诱导TGF-β1的过度表达。因此，临床上对高血压患者应早期积极干预，延缓心室重构的发生和进展，其中TGF-β1可作为较为可靠的潜在疗效性指标，但具体机制尚需进一步研究。
参考文献：
[1]Gauldie J，Bonniaud P，Sime P，et al.TGF-beta，Smad3 and the process of progressive fibrosis[J].Biochem Soc Trans，2007，35（4）：661-664.
[2]Khan R，Sheppard R.Fibrosis in heart disease：understanding the role of transforming growth factor-beta in cardiomyopathy，valvular disease and arrhythmia[J].Immunology，2006，118（10）：10—24.
[3]侯亮，刘雪平，侯训尧，等.氯沙坦对自发性高血压大鼠心脏血管紧张素转换酶 2 -血管紧张素（1～7）-MAS-ERK 通路的影响[J].中华高血压杂志，2010，18（2）：177—182.
[4]李鹏飞，张伟，马畅，等.自发性高血压大鼠心脏中 ACE，AT1R，ACE2 和 MasR 表达变化的研究[J].中国应用生理学杂志，20l1，27（2）：153-154.
[5]Asano Y，Ihn H，Yamane K，et al.Impaired Smad 7-Smurf-mediated negative regulation of TGF-beta signaling in scleroderma fibroblasts[J].J Clin Invest，2004，113（2）：253-264.
作者简介：
徐则林，女，湖南长沙人，医学硕士，主要从事中医药防治心脑血管疾病的研究。
通讯作者：
蔡虎志，男，湖南常德人，医学博士，主要从事中医药防治心脑血管疾病的研究，E-mail：805032226@qq.com；发票抬头：湖南中医药大学第一附属医院。
基金项目：湖南省科技厅科技计划项目（2014SK3242）；2015年湖南中医药大学校级青年基金。
论文作者:徐则林,蔡虎志
论文发表刊物:《航空军医》2016年第8期
论文发表时间:2016/6/22
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