袁伟[1]2003年在《剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的影响》文中研究表明一、目的 观察体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞在不同剪切力作用后的形态学改变及其可能的改变机理，进一步丰富血迷路屏障通透性调控机理。 二、方法 1．通过体外培养的方法，获取单层融合的豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞，豚鼠脑微血管内皮细胞以及人脐V内皮ECV-304的单层融合状态。2．设计一套由驱动恒流泵、蠕动泵、储液器及若干导管组成的流体力学灌流系统，通过控制流量产生不同力量对上述培养好的细胞施加剪切作用。3．对于豚鼠耳蜗微血管内皮细胞我们设计τ=0.883dyn／cm~2、0.976dyn／cm~2、1.184 dyn／cm~2、2.929 dyn／cm~2，四个剪切力，在0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h 8个时相点用倒置相差显微镜对受到剪切力作用后的细胞进行形态学观察，在对应时相点对细胞形态进行照相，用Tiger图像分析仪进行形状参数Pyx和Q的测定。同样，对脑微血管内皮细胞设计剪切力大小为0.276 dyn／cm~2、0.476dyn／cm~2、1.069 dyn／cm~2，对ECV-304细胞设计剪切力大小为5 dyn／cm~2，观察时相点及内容同耳蜗微血管内皮细胞，把各个观测点的数据绘制成表，并进行统计学分析得出相应的结果，以研究各个剪切力对不同细胞的形态学影响及其与时间的关系，并绘制成曲线图。4．剪切过后的耳蜗微血管内皮细胞用phalloidin进行固定染色，对F-actin进行激光共聚焦荧光染色观察，绘制成不同剪切力下F-actin荧光含量表，并绘制成变化曲线，进行统计学分析了解其与时间的关系。 叁、结果 1．豚鼠耳蜗血管纹组织段在0.5％Ⅰ型胶原酶消化后约3小时即可见细胞游离，部分成团，培养24h后可见贴壁生长的“细胞岛”，4天后可见“细胞岛”逐渐扩大，出现融合趋势，单个细胞外观呈椭圆、叁角或卵石形，剔除可疑杂细胞，细胞排列成致密融合单层后，呈现典型“铺路石”样外观。豚鼠脑微血管段经胶原酶消化后2h即贴壁，3天后形成致密的单层“铺路石”样外观。EVC-304经培养后3天即可生长为单层融合状态。上述细胞经免疫组化鉴定，95％以上对Ⅷ因子抗原反应阳性，证实为内皮细胞。 2．对于豚鼠耳蜗微血管内皮细胞，τ=0.883 dyn／cm~2、τ=0.976 dyn／cm~2时作用24h并未发生细胞形态及排列的改变，当τ=1.184 dyn／cm~2时，作用8h后细胞形态开始出现第叁军医大学硕士学位论文顺应性变化，单个细胞由以前的椭圆变得长梭，整体细胞排列由以前无序变得顺流体方向有序性，随时间延长，变化趋势更明显。对于脑微血管内皮细胞当下二0.276 dy可c扩时，作用24h未发生形态学变化，当下=0.476dy吹mZ时，剪切作用4h后单个细胞逐渐由短圆形变为长梭形，细胞整体排列逐渐有序，下=l .069d州cmZ作用16h后则发生细胞间隙增大、脱落。对于人脐v内皮细胞，T巧dy可cmZ作用24h仍未见形态学改变。3.对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞F一actin的荧光染色观察当T=0.976勿可c扩时，作用8h后虽然细胞未见形态学变化，但F一actin含量增加，微丝排列有序，出现应力纤维，随着剪切力加大，时间延长，这种趋势更明显。 四、结论 豚鼠耳蜗微血管内皮细胞在受到剪切作用后其形态学不同于静态培养的内皮细胞。在流体力学环境中，形态学变化可以影响其通透性。受到剪切作用后的细胞之所以会产生形态学改变，可能与细胞骨架机制有关。实验数据表明，豚鼠耳蜗微血管内皮细胞所能耐受剪切力大小明显小于脐V内皮细胞，但又大于脑微血管内皮细胞，且耐受剪切力范围较小，说明内耳微环境相对较稳定，但对剪切力变化非常敏感，这一现象很可能是高切应力疾病发病的原因。这为进一步开展生理、病理条件下耳蜗血迷路屏障的调控提供指导。
袁伟, 张学渊, 魏运军, 李琪, 钟诚[2]2008年在《不同剪切力对豚鼠微血管内皮细胞形态学的影响》文中指出目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗、脑微血管内皮细胞的影响。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠脑、耳蜗微血管内皮细胞进行力学作用,获得形态学图像并进行形状参数Pyx的测定分析。结果通过胶原酶消化法可获得单层培养的豚鼠耳蜗、脑微血管内皮细胞。对于耳蜗微血管内皮细胞,剪切力为0·883dyn/cm2时作用24h未发生细胞形态改变;当剪切力增加到1.184dyn/cm2时,作用8h后细胞形态即开始出现顺流体方向的顺应性变化,随时间延长,变化趋势更明显。而脑微血管内皮细胞在剪切力0.267dyn/cm2时作用24h未发生细胞形态改变;当剪切力增加到1.069dyn/cm2时,作用4h后细胞形态即开始出现顺流体方向的顺应性变化。结论耳蜗、脑微血管内皮细胞在受到剪切力作用后其形态学不同于静态培养的内皮细胞。
袁伟, 张学渊, 魏运军, 李琪, 钟诚[3]2007年在《剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞形态学的影响》文中研究说明目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的影响,丰富血迷路屏障的研究。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞进行力学作用,获得形态学图像并进行形状参数 Pyx 和 Q 的测定分析。结果通过胶原酶消化法可获得单层培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞。对于豚鼠耳蜗微血管内皮细胞,剪切力为0.0883 Pa 时作用24 h 未发生细胞形态改变,P>0.05;当剪切力增加到0.1184 Pa 时,作用8 h 后细胞形态即开始出现顺流体方向的顺应性变化,随时间延长,变化趋势更明显,P<0.05。结论豚鼠耳蜗微血管内皮细胞在受到剪切力作用后形态学不同于静态培养的内皮细胞,其所能耐受的剪切力范围较小。
袁伟, 张学渊, 魏运军, 李琪, 姜振东[4]2007年在《剪切力对耳蜗微血管内皮细胞细胞骨架的影响》文中研究说明目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞形态学及细胞骨架的影响。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞行力学作用,获得形态学图象同时对其细胞骨架行激光共聚焦扫描 F-actin 荧光染色测定分析。结果 (1)不同大小的剪切力作用会导致细胞形态发生变化；(2)细胞形态变化后会出现应力
袁伟, 张学渊, 魏运军, 李琪, 姜振[5]2007年在《剪切力对耳蜗微血管内皮细胞细胞骨架的影响》文中研究指明目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞形态学及细胞骨架的影响。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞行力学作用,获得形态学图象,同时对其细胞骨架在激光扫描共聚焦显微镜下行F-actin荧光染色测定分析。结果不同大小的剪切力作用会导致细胞形态发生变化;细胞形态变化后会出现应力纤维改变,应力纤维的变化早于形态学改变,这种改变随剪切的时间、力量变化而变化。结论豚鼠耳蜗微血管内皮细胞在受到剪切力作用后之所以会产生形态学改变,可能与细胞骨架变化有关。
佚名[6]2007年在《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志2007年第42卷主题词索引》文中提出说明:(1)本索引主题词按汉语拼音字母顺序排列;(2)冠有阿拉伯数字、西文姓氏的主题词,按其后的汉字的拼音排序,在汉字相同的情况下,按数字、英文字母、西文字母顺序先后排列,如字母后面无汉字则排列字母栏之首;(3)为了集中同一种性质的主题词,采用倒装词,如疱疹,带状,耳部;(4)作者后括号内数字为期号,最后为起页一止页;(5)每个主题词栏下按页码排列文章顺序。
袁伟[7]2008年在《腺病毒介导的A20基因对耳蜗毛细胞保护作用的实验研究》文中研究指明一、研究背景和目的听力损失作为名列第十五位的世界疾病,在发达国家,约有一亿人遭受听力损失,且90%为感音神经性聋。据我国残疾人抽样调查统计,听觉残疾呈逐年上升态势。毛细胞病变所导致的听力丧失是耳聋的主要原因,因此如何保护毛细胞已成为科研工作者日益关注的课题。耳蜗毛细胞是将声刺激转化电化学能的末梢感受器,其中内毛细胞是感受器细胞,负责将机械振动转化为与之相连的听神经纤维的动作电位;外毛细胞与增强听神经的高度频率选择性、耳蜗自我的调节功能有关。内、外毛细胞的损伤都可引起不可逆的感音神经性耳聋。耳蜗位于蜗壳内,被其包裹和保护,同时存在血迷路屏障,这种独特的生理结构导致耳蜗在解剖和功能上相对独立,一旦受到损伤很难通过全身或局部循环与外界交流,主要靠自身代谢来排除损伤因素,因此如何提高毛细胞自身的保护功能,保护正常细胞不被进一步破坏是研究这一问题的关键。因此急切寻找一条途径对毛细胞进行持久的保护。机体遇到外界有害因子刺激时会产生防御性反射,而很多细胞在遇到有害因素刺激时会产生一些保护性蛋白,锌指蛋白A20就是其中之一。锌指蛋白A20首先是在人的内皮细胞中作为肿瘤坏死因子(TNF)刺激的应答产物被发现的。通过基因测序发现其可读框编码一个新型锌指蛋白,命名为锌指蛋白A20,简称A20。A20是一种存在于胞液的NF-κB(nuclear factor-κB)活性负反馈调控蛋白,在许多细胞中都发现有A20的表达,A20 mRNA中的3’端非翻译区内有4个规范重复序列ATTTA,正是该序列决定了A20在细胞表达的不稳定性。A20已在多种细胞如内皮细胞、脑神经细胞中显示有抗炎、抗凋亡、坏死作用。研究表明,毛细胞的损伤会导致NF-κB和Caspase-3信号通路的改变,这一点和A20的抗损伤通路之间有共同交叉作用点,前者上调NF-κB和Caspase-3的表达,后者抑制NF-κB和Caspase-3的表达,因此A20可用于毛细胞的防护研究。A20在体内的表达是快速而短暂的,因此需要体外构建载体来持续表达A20,从而发挥其抗损伤作用。腺病毒(Ad)载体具有高效率、低致病性、高滴度及不整合入宿主细胞染色体等优点,已被广泛应用于内耳基因治疗研究。造成毛细胞损伤有各种各样的原因,其中药物致耳毒性是日常生活中很常见的原因;同时现代社会、现代战争中电磁辐射尤其是高频电磁辐射也是威胁人类健康的重要原因,因此本实验选用这两个损伤模型来进行研究。通过研究初步明确锌指蛋白A20对内耳毛细胞的保护作用及其分子机制,为改善和修复受损的听功能提供了理论依据。基于以上分析,本研究首先建立了庆大霉素、高功率微波(HPM)致毛细胞损伤模型,观察了A20在毛细胞正常、损伤条件下的表达规律,然后制备纯化A20重组腺病毒表达载体pAdEasy-1/A20,观察其在庆大霉素、HPM两种损伤条件下对毛细胞的保护作用,并对其可能的机制进行了探讨。二、研究方法和结果1. HPM损伤毛细胞模型的建立:将豚鼠置于反射系数近似为零的微波暗室内进行辐照,辐照剂量分别为30 W/cm2、65 W/cm2、90 W/cm2,辐照时间20min,辐照后3 h、6 h、12 h叁个时相点观察。结果发现不同功率的辐照对豚鼠的神经行为、体温产生程度不一的影响,说明HPM可致豚鼠热效应损伤;ABR阈值测定显示功率65 W/cm2辐照6 h后出现显着性差异;光镜、电镜观察65 W/cm2 6 h后出现形态学改变,毛细胞损伤数目较辐照前有差异,尤其是内毛细胞损伤较大,细胞间出现许多球形物质。这部分实验说明HPM可以造成毛细胞损伤,65 W/cm2 6 h可以作为损伤观察的研究剂量。2.庆大霉素损伤毛细胞模型的建立:给予庆大霉素120㎎/㎏腹腔注射,连续10天,通过ABR、光镜、电镜观察发现庆大霉素功能上可以造成听力下降,形态上可以造成毛细胞损伤,其损伤主要表现为外毛细胞,第一排外毛细胞的损伤较第二、叁排重。3.锌指蛋白A20在豚鼠耳蜗毛细胞的表达研究:通过耳蜗冰冻切片、A20原位杂交显示正常情况下A20在体内沉默表达,HPM、庆大霉素损伤后3 h即出现表达,但6 h后表达即减弱,12 h后表达基本消失。说明体内毛细胞存在A20基因,其在损伤条件下出现短暂表达。4. pAdEasy-1/20腺病毒的制备及其在体对毛细胞作用的表达:通过酶切连接的方式将pCAGGS-FLAGmA20质粒的表达框连入pAdtrack-CMV穿梭载体,后者和Adeasy-1在大肠杆菌中进行同源重组,随后转染293细胞进行病毒颗粒包装。经单、双酶切及PCR鉴定正确,大量扩增病毒后,通过GFP报告基因确定病毒滴度为5×109 pfu /ml。5. pAdEeay-1/A20重组腺病毒对毛细胞的保护作用研究:通过耳蜗冰冻切片及免疫组化观察,pAdEeay-1/A20可以成功感染毛细胞;我们把研究对象按毛细胞损伤模型分为庆大霉素和HPM两个大组,每组又分为5个实验组,分别为正常对照组、pAdEeay-1组、pAdEeay-1/庆大霉素注射(或HPM)组、pAdEeay-1/A20/庆大霉素注射(或HPM)组和人工外淋巴液/庆大霉素注射(或HPM)组。结果发现正常对照组处死前后ABR听阈无明显变化,P>0.05;pAdEeay-1组耳蜗给药前、后动物ABR反应阈变化无统计学意义(P>0.05),表明耳蜗给药操作及重组腺病毒对动物ABR反应阈无明显影响,未导致内耳损伤;pAdEeay-1/庆大霉素(或HPM)组处死前后听反应阈值变化明显,P<0.01,提示不含A20的pAdEeay-1未对庆大霉素(或HPM)造成的听功能下降起到保护作用;pAdEeay-1/A20/庆大霉素(或HPM)组及人工外淋巴液/庆大霉素(或HPM)组听反应阈均提高,两组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但pAdEeay-1/A20/庆大霉素(或HPM)组听阈增高程度较人工外淋巴液/庆大霉素(或HPM)组低,两者统计学比较有差异,两组之间P<0.05,提示A20能够对庆大霉素(或HPM)所造成的听功能下降起到一定的保护作用,但这种保护作用是不完全的。毛细胞形态学观察同样发现pAdEeay-1/A20/庆大霉素(或HPM)组与正常对照组比较毛细胞损害数目有差异(P<0.05),但同时pAdEeay-1/A20/庆大霉素组(或HPM)与pAdEeay-1/庆大霉素组(或HPM)、人工外淋巴液/庆大霉素(或HPM)组比较毛细胞损伤数目又有有明显差异(P<0.01)。说明A20可以在形态上对内、外毛细胞起到一定的保护作用。6.锌指蛋白A20保护毛细胞的作用机制:理论上A20抗损伤和毛细胞的损伤通路上都有一个共同作用点就是caspase-3,但A20保护毛细胞是否是作用于caspase-3这一通路还不得知,本研究采用免疫组化,通过对损伤组(庆大霉素、HPM)、pAdEeay-1/A20组比较发现免疫标记在正常对照组和空载体组中都呈阴性反应;损伤组和pAdEeay-1/A20组中冰冻切片标本均显示有大量含棕黄色颗粒细胞出现在耳蜗Corti器内,其中毛细胞和支持细胞均有阳性细胞出现,但pAdEeay-1/A20组的阳性颗粒细胞数明显少于损伤组,损伤组与pAdEeay-1/A20组阳性细胞数经IOD统计,结果具有显着差异性,P<0.05。叁、结论1.本实验成功制作电磁辐射(HPM)损伤毛细胞模型,发现HPM可以造成毛细胞损伤,HPM对毛细胞的损伤效应是随剂量和时间的变化而变化的,同时发现HPM主要对内毛细胞造成明显的损伤,而且细胞间有不规则的球状物出现。2.锌指蛋白A20在正常毛细胞中沉默表达,当受到外界损伤因素刺激后出现一过性表达,其表达时效仅数小时。3.通过构建重组pAdEeay-1/A20腺病毒载体以及在毛细胞的有效感染,证实了A20可以从功能和形态上对庆大霉素和HPM造成的毛细胞损伤起到一定的保护作用。4.本研究表明锌指蛋白A20保护毛细胞的作用机制之一可能是通过抑制caspase-3的表达来实现的。
吴永翔[8]2016年在《声预处理对急性声损伤的保护作用及其分子机制研究》文中指出第一部分声预处理对急性声损伤的保护作用及耳蜗形态学改变的影响目的:通过建立声预处理和急性声损伤SD大鼠动物模型,明确声预处理对大鼠听力的保护作用及其对急性声损伤所致耳蜗组织细胞结构变化的影响。方法:将20只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠按照完全随机分组的原则,分为四组即:正常对照组(Ctrl,5只)、声预处理组(SC,5只)、噪声暴露组(NE,5只)和声预处理+噪声暴露组(SC+NE,5只)。其中噪声暴露组给予声强为115d B SPL白噪声每天6小时,连续两天;声预处理组给予声强为85d B SPL纯音500Hz 24小时;声预处理+噪声暴露组则在先后给予声预处理和噪声暴露之间休息3小时;正常对照组不给予任何噪声接触,但其他方面均与造模组相同。于造模前以及造模后1天,分别采用ABR听性脑干反应(auditory brainstem response)检测SD大鼠双耳听觉反应阈值,在听觉功能上观察声预处理和噪声暴露对大鼠听力的影响。遂后采用基底膜铺片鬼笔环肽染色激光共聚焦和扫描电镜观察不同组SD大鼠耳蜗各转毛细胞形态变化,在形态学上证实声预处理和噪声暴露对SD大鼠耳蜗外毛细胞结构的影响;同时常规透射电镜观察各组大鼠耳蜗轴螺旋神经元细胞超微结构变化,在形态学上证实声预处理和噪声暴露对SD大鼠耳蜗螺旋神经元细胞线粒体结构的影响。结果:听觉脑干诱发电位(ABR)Click声和纯音检测听力阈值,结果均显示噪声暴露前给予声预处理的大鼠听阈明显低于单纯噪声暴露的大鼠听阈,且两者听阈差异具有统计学意义(P<0.05),而造模后声预处理组和正常组两者听阈在统计学上未见明显差异(P>0.05)。基底膜铺片鬼笔环肽染色和扫描电镜均证实了声预处理对各转叁排外毛细胞功能性的结构重塑,即:底转叁排外毛细胞结构完整,纤毛变短变粗且方向一致;中转、顶转叁排外毛细胞纤毛极性消失,排列不齐且松散,有少量出现纤毛排列紊乱,但无明显纤毛倒伏、融合和消失;并且与单纯噪声暴露相比,噪声暴露前给予声预处理其各转叁排外毛细胞缺失明显减少,外毛细胞纤毛变短但排列尚整齐,无明显纤毛倒伏、融合和消失;外毛细胞计数表明噪声暴露前给予声预处理在底转、中转外毛细胞缺失率上明显低于单纯噪声暴露,且两者差异均具有统计学意义(P<0.05),但两者在顶转外毛细胞缺失率未见明显统计学差异(P>0.05)。另外,透射电镜观察证实声预处理后耳蜗轴螺旋神经元细胞结构正常,线粒体数量有所增加,线粒体内嵴电子密度增高,内嵴间隙明显变窄;而噪声暴露后耳蜗轴螺旋神经元细胞皱缩,与鞘膜出现分离,线粒体肿胀变形且数量减少,内嵴电子密度降低,出现断裂、融合、消失,内嵴间隙明显增宽,大量空泡形成;同时较单纯噪声暴露,噪声暴露前给予声预处理其耳蜗轴螺旋神经元细胞皱缩和分离不明显,线粒体无明显肿胀变形,内嵴结构完整且电子密度增高,内嵴间隙明显变窄,未见内嵴断裂、融合、消失,偶有空泡形成。同时,耳蜗螺旋神经元细胞线粒体计数表明噪声暴露后螺旋神经元细胞线粒体密度明显减小(P<0.05),而声预处理后螺旋神经元细胞线粒体密度有明显增加(P<0.05)。结论:声预处理对大鼠急性声损伤有一定的听力保护作用,且对大鼠听力无明显损伤。在形态学上,声预处理对噪声暴露所致大鼠底转、中转外毛细胞损伤有一定保护作用;但对大鼠顶转外毛细胞损伤保护作用不明显。另外,噪声暴露破坏了线粒体的结构,对螺旋神经元细胞线粒体功能有明显损伤作用,而声预处理可明显提高线粒体的数量和功能状态,在一定程度上抑制了噪声暴露对螺旋神经元细胞线粒体的损伤和破坏。第二部分声预处理保护作用分子机制的在体研究目的:阐明声预处理通过调节螺旋神经元细胞线粒体结构和提高线粒体功能状态发挥保护作用的可能分子机制,从而指导临床急性声损伤的声预处理治疗,并提供新的思路和理论支持。方法:将80只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠按照完全随机分组的原则,分为四组即:正常对照组(Ctrl,20只)、声预处理组(SC,20只)、噪声暴露组(NE,20只)和声预处理+噪声暴露组(SC+NE,20只)。其中噪声暴露组给予声强为115d B SPL白噪声每天6小时,连续两天;声预处理组给予声强为85d B SPL纯音500Hz 24小时;声预处理+噪声暴露组则在前后给予声预处理和噪声暴露之间休息3小时;正常对照组不给予任何噪声接触,但其他方面均与造模组相同。造模后采用RT-PCR、免疫荧光染色和Western blot蛋白印迹方法分别检测各组SD大鼠Hsp70、Bmi1、SOD1、SOD2 m RNA和蛋白表达以及AKT蛋白磷酸化水平变化。结果:免疫荧光染色和Western blot蛋白印迹结果显示:Hsp70蛋白在正常螺旋神经节细胞(包括螺旋神经元细胞和支持细胞)中均有一定程度表达;噪声暴露降低了螺旋神经元细胞Hsp70蛋白表达,但其周围的支持细胞可以部分代偿性维持Hsp70蛋白表达;而声预处理能明显提高螺旋神经元细胞Hsp70蛋白表达,在一定程度上抑制了噪声暴露对螺旋神经元细胞Hsp70蛋白表达的下调。而Bmi1蛋白在正常螺旋神经节细胞(包括螺旋神经元细胞和支持细胞)中亦均有一定程度表达,噪声暴露降低了螺旋神经元细胞Bmi1蛋白表达,但其周围的支持细胞却代偿性提高Bmi1蛋白表达;而声预处理亦能明显提高螺旋神经节细胞Bmi1蛋白表达并转位于线粒体内,在一定程度上可以抑制噪声暴露对螺旋神经元细胞Bmi1蛋白表达的下调,这与Hsp70表达具有时间和空间上的一致性。另外,SOD1、SOD2蛋白在正常螺旋神经节细胞(包括螺旋神经元细胞和支持细胞)中亦均有一定程度表达;噪声暴露降低了螺旋神经元细胞和支持细胞SOD1、SOD2蛋白表达;而声预处理亦能明显提高螺旋神经节细胞SOD1、SOD2蛋白表达,在一定程度上可以抑制噪声暴露对螺旋神经节细胞SOD1、SOD2蛋白表达的下调。同时RT-PCR结果显示:较正常对照组,声预处理组螺旋神经节细胞Hsp70、Bmi1、SOD1和SOD2 m RNA表达均明显提高。结论:声预处理诱导上调螺旋神经元细胞Hsp70 m RNA和蛋白表达,增强了神经元细胞自身的保护性应激反应;同时螺旋神经元细胞Bmi1、SOD1和SOD2的m RNA和蛋白表达的上调及Bmi1蛋白的线粒体转位也参与了声预处理对噪声暴露所致急性声损伤的保护作用,其中诱导抗氧化基因SOD1和SOD2蛋白表达上调与Hsp70和Bmi1蛋白表达上调均具有时间和空间上的一致性。第叁部分相关分子机制的体外研究目的:为进一步证实声预处理可能激活的分子调控机制,阐明螺旋神经元细胞抗氧化基因SOD1和SOD2可能是Hsp70和Bmi1的下游调控分子靶点。方法:新生SD大鼠仔鼠耳蜗螺旋神经元细胞取材培养1天后,完全随机分为:正常对照组和Bmi1抑制剂组,其中正常对照组除按需更换细胞培养液外加入与抑制剂组相同体积的DMSO溶液,而Bmi1抑制剂组除按需更换细胞培养液外加入1μM PTC-209溶液(DMSO为溶剂);培养两天后细胞爬片免疫荧光染色并荧光显微镜观察各组体外培养大鼠螺旋神经元细胞Bmi1、SOD1、SOD2和Hsp70的表达变化。结果:Bmi1高选择性抑制剂PTC-209与新生大鼠螺旋神经元细胞体外共培养,免疫荧光染色观察,结果显示:在PTC-209抑制剂有效抑制Bmi1蛋白表达的前提下,与正常螺旋神经元细胞相比,其胞体内红色荧光标记的SOD1和SOD2表达均显着减少,而其胞体内Hsp70蛋白仍为弱阳性表达;这表明大鼠螺旋神经元细胞Bmi1正性调控了SOD1和SOD2蛋白的表达,但并不调控Hsp70蛋白表达。结论:螺旋神经元细胞抗氧化基因SOD1和SOD2可能是Bmi1的下游调控分子靶点。
佚名[9]2003年在《作者索引》文中认为第四军医大学学报(J Fourth Milit Med Unsv)2003年24卷索引AAdrian T.TINGB细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-KB的活化(19):1729一1732CClaus H.Schroder慢性乙肝病毒感染的诊断和治疗
参考文献：
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[9]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2003
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