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摘要：目的 了解基质辅助激光解析离子－飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS, MS）在临床分离革兰阴性杆菌鉴定中的应用，为临床医师正确诊断提供科学依据。方法 回顾性分析2015年4月－2015年10月临床标本经MS鉴定为革兰阴性杆菌，将所得菌质谱峰图与数据库中峰图进行比较，分析得出鉴定结果。结果 MS共鉴定出革兰阴性杆菌834株，肠杆菌科622株共6种，占74.58%，主要为大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌，分别占肠杆菌科的39.40%及50.16%；非发酵菌属212株共4种，占25.42%，主要为鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌，其在非发酵菌属中的构成比分别为49.53%及39.15%，使用MS后能鉴定出临床常见革兰阴性杆菌。结论 MS能快速鉴定出常见革兰阴性杆菌，为临床治疗及鉴别感染病原菌提供了快速的筛选方法。
关键词：常见革兰阴性杆菌；基质辅助激光解析离子-飞行时间质谱仪；快速鉴定
Performance of matrix - assisted laser desorption/ionozation-time of flight mass spectrometry in rapid identification of gram negative bacilli
Abstract:Objective To investigate the performance of matrix - assisted laser desorption/ionozation-time of flight mass spectrometry in rapid identification of gram negative bacilli so as to provide scientific basis for correct clinical diagnosis. Methods The gram negative bacilli that were identified from clinical specimens by the MALDI-TOF mass spectrometry were retrospectively analyzed. The mass spectrometer was placed for the identification after it was dried; the acquired bacterial mass spectral peak figure was compared with the peak figure in the databases, and the results of the identification were analyzed. Results A total of 834 strains of gram-negative bacilli have been identified with the use of MALDI -TOF mass spectrometry , including 622 (74.58%)strains of Enterobacteriaceae, with 6 species involved; the Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae were the main parts of Enterobacteriaceae, accounting for 39.40%, 50.16%, respectively; there were 212(25.42%) strains of nonfermentative bacteria (4 species), among which the Baumanii and Pseudomonas aeruginosa were the predominant species, accounting for 49.53%, 39.15%, respectively. Conclusion The MALDI-TOF mass spectrometry can identify a variety of species of gram -negative bacilli, and it may facilitate the clinical treatment an the rapid screening of the pathogens causing infections.
Key words: common gram negative bacilli; matrix - assisted laser desorption/ionozation-time of flight mass spectrometry; Rapid identification
革兰阴性杆菌是是临床最常见的病原菌[1]。传统的微生物鉴定技术复杂、检测周期长，近年来随着飞行时间质谱仪（MS）技术在临床微生物领域的飞速发展，使革兰阴性杆菌能够快速准确的鉴定到种，为临床快速诊断提供了重要依据。
1材料与方法
1.1 菌株来源
收集2015年4月-2015年10月临床细菌培养阳性的所有菌株。质控菌株为大肠埃希菌ATCC8739、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.2 仪器与试剂
VITEK MS(法国生物梅里埃公司),VITEK MS-DS靶板和VITEK MS-CHCA基质液。
1.3 MS鉴定样品处理
用1μl定量接种环将标准菌株大肠埃希ATCC8739均匀涂抹在质控位点，后滴加1μl的VITEK MS-CHCA基质液，其他涂板方法与涂抹标准菌株一致，待其干燥后放入MS仪器进行检测，然后将所得菌质谱峰图与数据库中峰图进行比较，分析得出鉴定结果。
2结 果
2.1革兰阴性杆菌检出结果
2015年4月-2015年10月共检测出834株革兰阴性杆菌，肠杆菌科616株共6种，非发酵菌属212株共4种，革兰阴性杆菌的种类分布见表1-3。
表1 MALDI-TOF-MS鉴定常见革兰阴性杆菌的分布及构成比（％）
３ 讨 论
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是近年来发展起来的一种新型软电离质谱技术，国内外的临床微生物实验室均逐渐重视起MALDI-TOF MS在微生物领域的应用[2]。本研究中，经MS鉴定的常见肠杆菌科的革兰阴性杆菌占74.58%、非发酵菌属占25.42%，常见肠杆菌科主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，临床常见革兰阴性杆菌均能通过MS完成鉴定。
MS在病原微生物的检测和鉴定中具有快速、准确、灵敏等优点，通常48个样本在1小时内即可完成检测。MS鉴定不但准确而且费用低廉，虽然MS设备价格较高，但日常检测只消耗少量基质、1μl定量接种环和靶板等，检测费用低。
随着MS在微生物鉴定领域的应用，为临床对革兰阴性杆菌的快速诊断提供了有力依据，实现了早发现、早治疗，从而更好的服务于临床[4-5]。
参考文献
[1] 文细毛,任南,吴安华,孟莉,郭燕红．全国医院感染监测网2012年综合ICU医院感染现患率调查监测报告[J].中华感染控制杂志,2014,13(8): 458-462.
[2] Dingle TC, Butler-Wu SM. Maldi-tof mass spectrometry for microorganism identifi cation[J]. Clin Lab Med, 2013, 33(3): 589-609.
[4] Zhou C, Hu B, Zhang X, et al. The value of matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-fl ight mass spectrometry in identifying clinically relevant bacteria: a comparison with automated microbiology system[J]. J Thorac Dis, 2014, 6(5): 545-552.
[5] Li Y, Gu B, Liu G, et al. MALDI-TOF MS versus VITEK 2 ANC card for identification of anaerobic bacteria[J]. J Thorac Dis, 2014, 6(5): 517-523.
论文作者:张爱民[1] 龙永疆[2] 李建明[3] 通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2016年9月第17期
论文发表时间:2016/11/25
标签：杆菌论文; 阴性论文; 鉴定论文; 基质论文; 菌株论文; 质谱仪论文; 微生物论文; 《医师在线》2016年9月第17期论文;