杨占双 聂晶 梅梅 王显鹤 康晓明 张洋 李丽 吴祥红
佳木斯大学附属第一医院儿科 黑龙江佳木斯 154000
摘要：目的：分析Nogo-66受体特异性小干扰RNA对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经再生功能的影响。方法：选取新生大鼠HIBD模型60只，分析大鼠的逃生时间等。结果：假手术组和实验组的阳性细胞数明显高于其他两组，P〈0.05表示统计学有意义。而假手术组和实验组相比无差异，P〉0.05表示统计学无意义。HIBD组的大鼠逃生时间明显高于假手术组，实验组的大鼠逃生时间明显短于HIBD组和对照组，P〈0.05表示统计学有意义。结论：合成特异性的siRNA能够对新生大鼠的脑组织NgR表达产生一定的影响，从而能够有效促进大鼠神经的再生，促进大鼠神经功能的恢复。
关键词：Nogo-66受体；特异性小干扰RNA；缺氧缺血性脑损伤；新生大鼠
新生儿缺血缺氧性脑病是导致新生儿出现脑损伤的常见因素，具有较高的死亡率，而存活的患者也会导致出现永久性神经功能障碍疾病，导致患者的脑功能受损，影响学习和记忆能力[1]。
1资料和方法
1.1一般资料
选60只新生清洁级大鼠参与本次实验，大鼠的雌雄无规定，平均体重在（9.4±1.3）g之间。主要选用的试剂为兔抗大鼠NgR多克隆抗体、Trizol试剂、RT-PCR试剂盒；GAPDH抗体、生长相关蛋白-43抗体、二氨基联苯胺显色液等。选用的仪器包括水迷宫、光学显微镜、琼脂糖凝胶电泳仪、冷冻切片机等。
1.2方法
1.2.1HIBD制备和分组 新生大鼠在吸入乙醚进行麻醉后，仰卧固定在手术台上，切开大鼠的颈部皮肤，将左侧颈总动脉进行结扎，将切口缝合，放回母鼠身边恢复2个小时后再放入5000ml的密闭玻璃箱中，充入8%浓度氧气的氧氮混合气体，流量在3L/min，持续2小时候恢复正常供氧，此为HIBD的模型制备。建模成功后，将60只新生大鼠进行分组，将新生大鼠分为siNgR实验组20例，特异性小干扰RNA对照组20只，HIBD组20只[2]。
1.2.2脑室给药治疗 实验组和对照组的大鼠在模型建设成功72小时后采取乙醚麻醉，放在立体定位仪中进行固定，采取人字缝旁开1.5毫米的位置进行进针点，实验组采取siNgR和转染试剂10μl进行脑室注射，对照组采取特异性小干扰RNA和转染试剂10μl进行脑室注射，HIBD组不采取脑室注射处理，每天注射1次，连续注射3天[3]。
1.2.3大鼠脑组织NgR蛋白表达 实验组和对照组大鼠在脑室给药72小时后，各取4只大鼠采用10%浓度的水合氯醛进行麻醉，然后暴露心脏，从左心室的顶尖部位进针，切开右心耳，持续灌注NS，在流出液质地清亮后采用4%浓度的多聚甲醛进行灌注处理。试验后发现，大鼠的尾巴和四肢发生抽搐，身体变僵硬后要结束灌注，断头取大鼠全脑，在4%浓度的多聚甲醛溶液中静止1天，然后用10%浓度的蔗糖多聚甲醛液、20%浓度的蔗糖多聚甲醛液、30%浓度的蔗糖多聚甲醛液进行固定，连续冷冻切片，片厚在8μm左右。
1.2.4水迷宫实验 采用LW-II型黑色水池木工系统，记录大鼠找出迷宫出口的时间。实验组和对照组在大鼠给药14天后，与HIBD组和假手术组的水迷宫实验进行对比。
1.3统计学方法 应用SPSS21.0统计软件包进行统计学分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验；计数资料用X2进行检验，用%表示，P〈0.05表示统计学有意义。
2结果
2.1各组大鼠的逃生时间分析 HIBD组的大鼠逃生时间明显高于假手术组，实验组的大鼠逃生时间明显短与HIBD组和对照组，P〈0.05表示统计学有意义。见表1。
2.2各组大鼠阳性细胞数分析 假手术组的阳性细胞数为（33.2±2.53）个，HIBD组的阳性细胞数为（20.65±2.18）个，对照组的阳性细胞数为（18.9±1.8）个，实验组的阳性细胞数为（28.4±1.8）个，假手术组和实验组的阳性细胞数明显高于其他两组，P〈0.05表示统计学有意义。而假手术组和实组相比无差异，P〉0.05表示统计学无意义。
3讨论
改善脑损伤患儿的学习能力是临床的主要研究目标。通过动物实验发现，新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的后期脑组织中，Nogo-66受体的表达会升高，如果采取特异性小干扰RNA进行感染，能够将髓磷脂相关的抑制物与受体的结合进行阻断，从而能够促进HIBD的神经功能的恢复。通过实验发现，RNA干扰能够将大鼠神经细胞中的NgR基因的表达进行阻滞，化学合成siRNA转染细胞基因沉默效果显著，大概可持续6天左右。
综上所述，合成特异性的siRNA能够对新生大鼠的脑组织NgR表达产生一定的影响，从而能够有效促进大鼠神经的再生，促进大鼠神经功能的恢复。
参考文献：
[1]肖钢明，秦晓庆，周晓光.Nogo-66受体特异性小干扰RNA对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经再生功能的影响[J].中国新生儿科杂志，2015，（3）：224-228.
[2]郭杨，马勇，冯诚，等.脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-66受体NgR表达的影响[J].中国组织工程研究，2016，（18）：2622-2627.
[3]黄丹霞，黄赛娥.Nogo-A抑制信号通路在脑缺血后神经再生中的作用及研究进展[J].按摩与康复医学，2015，（20）：12-14，15.
课题来源：1.黑龙江省卫生计生委科研课题 课题编号：2014-234；2.佳木斯大学科学技术校级面上项目 课题编号S2014-008
论文作者:杨占双,聂晶,梅梅,王显鹤,康晓明,张洋,李丽
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年7月19期
论文发表时间:2018/8/29
标签：大鼠论文; 实验组论文; 特异性论文; 统计学论文; 新生论文; 受体论文; 多聚甲醛论文; 《中国误诊学杂志》2018年7月19期论文;