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摘要：为了对于免疫增强剂（VA5）对鸡的免疫效力情况进行分析，在本项研究内，将剂量不同的免疫增强剂充分的混合H9禽流感抗原以后，制备疫苗，对SPF鸡免疫效力情况进行评价和观察。依照筛选出的结果，把最优剂量免疫增强剂与H9禽流感抗原以共同混合的形式配制疫苗，以及把伴侣形式的免疫增强剂同H5或者H9禽流感疫苗充分的混匀以后，免疫商品鸡，之后对免疫增强结果展开科学的评估，探究免疫增强剂在提升禽流感疫苗效力中发挥出的价值。
关键词：免疫增强剂；禽流感疫苗；效力；研究
当前，在我国的养鸡业发展中，构成相对严重影响的就是H5亚型以及H9亚型，在此期间，于禽流感的防控工作中可以产生关键作用的就是禽流感灭活疫苗。因流感病毒自身很容易出现变异的问题，所以当前普遍应用到的疫苗，是很不容易应对新出现的变异株的，保护的功效并不能够良好的发挥出，这种形势下，就必须要加大力度提出跟流行毒株抗原性具有相同性的疫苗毒株。将现有疫苗保护效力良好提升的途径中，包括了采取免疫增强剂这一举措。在兽用疫苗中，应用的种类较多，其中猪支原体疫苗佐剂Amphigen是比较普遍实施的，机体应答过程中相关的天然免疫受体和激动剂可以施展关键性的作用。另外，在部分的化学药物以及中草药多糖成分中，也包含了理想的免疫增强功能。下面，对于免疫增强剂（VA5）对禽流感疫苗免疫增强效果情况展开评估。
一、实验研究概况
第一，实验室进行鉴定以及保存H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Nanjing/02/2001（NJ02）、A/Chicken/Shandong/01/2011（SD01），进行测定、记录这两株病毒序列情况，其结果同GenBank提出的中国近期H9病毒流行株以MEGA4.1展开对比，严格的按照要求标准备好H5（Re-5）亚型禽流感商品疫苗、Re-5检测抗原。
第二，配制含免疫增强剂疫苗，严格的遵循专利（申请好201210235427.0）进行配制含VA5免疫增强剂疫苗。含VA5免疫增强的H9疫苗进行配制，方法就是共混的举措。遵循疫苗的规程，疫苗毒是NJ02，各羽份疫苗含抗原量是108.0鸡胚半数感染量（EID50），VA5的高剂量疫苗简称是H9-VA5-H，中剂量简称是H9-VA5-M，低剂量疫苗简称是H9-VA5-L，其中将存在免疫增强剂的常规H9疫苗进行排除，即无这些成分。另外针对含VA5免疫增强剂的H5疫苗，采取伴侣形式展开配合。 进行配制工作中，把H5商品疫苗按照含有VA5高剂量的H5-VA5-H以及中剂量的H5-VA5-M，低剂量的H5-VA5-L进行配制，同时不包括免疫增强剂的H5商品疫苗。
第三，准备SPF鸡以及展开相应的测定，在负压隔离器内进行饲养。同时选购海安某种鸡场的一日龄商品海兰褐鸡，饲养于普通的环境状态中。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆选择不同剂量VA5免疫增强剂H9共混疫苗免疫十日龄SPF鸡，高中低剂量组分别是10只鸡，同时建立常规H9疫苗组（10只鸡）以及空白对照组（10只鸡），免疫后采血。采取0.1ml具有1×107.0EID50H9亚型病毒SD01毒经滴鼻攻毒。实施此项程序之后，采取喉气管和泄殖腔棉拭分离病毒，之后进行合并，即把每只鸡喉气管和泄殖腔棉拭实施合并，全部的工作结束以后，展开鸡胚的接种。如果为阳性，则三个个胚中的一个或以上产生HA效价在4lg2以上。
第四，商品海兰褐鸡免疫含VA5免疫增强剂的H9疫苗，实施商品海兰褐鸡的免疫操作之前，需要对于血凝抑制抗体（HI）母源抗体采血，采血以后保存展开检测，而且只有在HI母源抗体为2lg2以下时，才能够严格的按照流程实施免疫。混合VA5免疫增强剂跟H9疫苗，混合时必须要按照伴侣形式展开。另外对14日龄商品鸡免疫，在此期间为了有效的进行对比观察，设立常规疫苗对照以及不免疫的空白对照，每一组内均设置鸡的数量是10只。进行免疫以后，予以采血保留进行抗体检验。依照SPF鸡免疫，混合VA5-L以及H9抗原进行制备免疫。
第五，实施商品海兰褐鸡免疫前，进行血凝抑制抗体（HI）母源抗体的采血检测，在2lg1以下时，对于HI母源抗体效价实施免疫。低剂量VA5免疫增强剂跟H5疫苗进行混合，即采取伴侣形式展开混合之后免疫14日龄商品鸡，与此同时，同样设置常规疫苗对照、不免疫的空白对照，每个组中设置的鸡数量均为10只，采血实施抗体检验。
二、免疫增强剂对禽流感疫苗效力产生的结果
首先，对比病毒遗传进化情况。测序疫苗毒株NJ02、攻毒毒株SD01基因以后，把以上两方面开放阅读框（ORF）序列，同GenBank下载序列采取MEGA4.0展开比对。显示出，NG02同早期阶段的分离株于相同的进化分支上，即1994年至2001年，但是SD01同近期阶段的分离株是属于同一个分支，即2007年至2011年。充分地体现出，基因水平角度上，疫苗用毒株与攻毒毒株存在差异性问题，能够作攻毒毒株。其次，SPF鸡免疫之后，在第7天、14天和21天之后进行采血以及分离血清，对HI抗体效价进行检测。结果显示，免疫以后的第21天以及28天时，含免疫增强剂的疫苗组同常规疫苗免疫组相对比，其血清效价较高。而且含有免疫增强剂的疫苗组，免疫之后没有检测出病毒问题。接下来，VA5免疫增强剂同H9抗原混合后，制备疫苗展开免疫商品鸡，或者应用VA5免疫增强剂同疫苗混合后免疫商品鸡，在进行免疫之后的14天时，抗体在7lg2以上，而且在第21天和28天时的抗体效价对比，含免疫增强剂疫苗免疫组优于常规疫苗组。最后，将VA5免疫增强剂采取疫苗伴侣形式同H5疫苗进行混合，对于商品鸡展开免疫，于第14天时，便将抗体超过7lg2以上。第21天和第28天时，含免疫增强剂疫苗免疫组显著的优势于常规疫苗组。
三、免疫增强剂提高禽流感疫苗效力的分析
含有V5免疫增强剂的H9疫苗，其采取抗原混合后制成疫苗应用的形式，或者实施独立的将此增强剂制成疫苗伴侣同疫苗共免疫的形式，免疫的效果是具有相同性的，均可以拥有理想的免疫功效，而且通过进行观察，结果显示免疫效果同常规的疫苗相比较，优势均显著，主要是体现于抗体合格提前7天达标，在之后的第21天以及第28天，同常规疫苗组相对比显著更高。把VA5免疫增强剂同H5疫苗采取伴侣形式展开免疫之后，得到的免疫效力一致于H9疫苗中应用成效，在此免疫增强剂中，涵盖了天然免疫受体的Toll-like receptor（TLR）激动剂成份。所以，研究显示相异免疫类型的细胞上的不同TLR，具有各异形式的丰度、细胞表面的位置现象。而且如果信号通路相异，则激活的免疫刺激因子不尽相同，特点各异，但是都可对于机体细胞免疫展开提升，所以，实施多种受体激动剂的混合方式，能够获取相异单组分协同效应的复合免疫增强剂，最终达到良好的成效。
结语：
通过进行观察，免疫增强剂同H9疫苗共同混匀，或者把免疫增强剂制备成疫苗伴侣形式同H5或者H9商品疫苗共同混合免疫商品鸡的形式，都可以实现H5或者H9疫苗免疫后提前7天将抗体获得71g2的效果，相较不含有免疫增强剂的常规疫苗组而言，其进行免疫之后抗体的效价更高，应用前景更加广阔，值得大量推广。
参考文献：
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[3]樊英，李乐，于晓清，刘恩孚，李天保，许拉，叶海斌.免疫增强剂党参对仿刺参肠道菌群结构的影响[J].动物营养学报，2015，27（02）：638-646.
论文作者:林勇登,李锦平
论文发表刊物:《基层建设》2018年第2期
论文发表时间:2018/5/16
标签：免疫论文; 疫苗论文; 抗体论文; 商品论文; 抗原论文; 效力论文; 形式论文; 《基层建设》2018年第2期论文;